传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波课件.ppt

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1、传染病诊断技术国产化和产业化的必要性,许文波 国家麻疹/脊灰实验室 病毒病预防控制所,中国疾病预防控制中心,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,2,对于传染病的预防、控制和治疗，最关键的是对疾病的早期诊断。无论是细菌性的还是病毒性的传染病，快速、准确地诊断出传染病病因和传播途径对于传染病的预防、控制尤其重要一些新出现的传染性疾病，尤其是病毒性传染病的发生频率越来越高，给人民的健康安全带来严重威胁。,新发和突发传染病病毒诊断用的标本病毒分离鉴定所用的细胞病毒实验室检测类型诊断试剂国产化和产业化的展望临床中的病毒病诊断分子流行病学在病毒病诊断中的应用国家麻疹、脊灰和HFMD实验室网络和研

2、究领域,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,4,1.新发和突发传染病Emerging and re-emerging viral diseases :,一种新的疾病以前没有鉴定出来已经知道的疾病的发病率或地理分布明显增加或扩大已经存在的病毒发生重组形成一个新病毒SARS-coronavirusNipah virusHendra virusAustralian bat lyssavirusMenangle virusJapanese encephalitis virusChikungunya virusDengue virusesAdv14Adv11变异株 (和Adv14重组) Ent

3、erovirus 712009-H1N1 Flu (Swine Flu),传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,5,病原微生物危险,感染性的致病因子，无论是直接感染人类，还是间接地散播到环境中去，对人类、动物或植物都是一个现实的或潜在的危险。,Animals,Humans,Plants,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,6,Chernobyl,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,7,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,8,2.病毒诊断所用的标本-a -标本质量对于病毒诊断至关重要,对于诊断急性病毒性感染最好是采集于疾病发生的部位、或传播部位的标本。标本（

4、除血清外）运输应在4冷藏,如果超过24小时,标本应保存于-70或更低。血清学诊断的急性期标本通常应在发病最初几天获得，恢复期标本在2-4周后获得。一些病毒感染也可从唾液或尿中检测到抗体。,2.病毒诊断用的标本-b 标本的正确收集、处理至关重要-1（成功的第一步）,病毒分离和用于提取RNA标本的采集时间，位置及质量 直接关系到能否成功分离到病毒或RNA的活性，而标本 保存与运输不当也会影响病毒的分离。 为提高病毒的分离率。在用于病毒分离的样品采集的 数量、类型和地点方面，实验室与流行病医生应达成 共识。一般来说，病毒分离用样品应与血样同时采 集，以便做血清学诊断。,血液、CSF、尸检组织标本,

5、粪便标本,咽拭子、 鼻咽拭子和下呼吸道分泌物吸取液,病毒实验室维持良好的细胞系特别重要细胞系经常被支原体污染,支原体污染会严重影响细胞的培养，因为这种污染不抑制细胞生长，即使在显微镜下观察也很难察觉。与细菌和真菌相比，支原体污染比较容易蔓延到其他培养中，而且很多对细菌污染有效的抗生素，支原体却并不敏感。,3.病毒分离鉴定所用的细胞,树立“预防为主”的思想,保证细胞来源干净确保基质和器材无菌严格无菌操作细胞培养时避免交谈操作结束时消毒台面每传15代的细胞应更换所有细胞培养材料丢弃前应高压消毒,3. 病毒分离鉴定所用的细胞2,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,13,L20B adeno

6、virus CPE,RD-A adenovirus CPE,病毒复制的检测抗原检测核酸检测血清学抗体检测,4. 病毒实验室检测类型每种方法各有优势,依据病毒来定检测策略,4.病毒实验室检测类型-病毒实验室诊断方法,检测抗体/抗原,检测病毒,检测核酸,ELISA/HI/PA,蛋白印迹,免疫荧光,病毒分离,ELISA,中和试验,电镜,基因芯片,中和试验,RT-PCR,实时荧光定量PCR,套式PCR,LAMP,免疫荧光,基因芯片,每种方法各有优势,依据病毒来定检测策略,New molecular tools for epidemiologystudies and diagnosis,病毒复制的检测,

7、1） 细胞病变-病毒分离和鉴定 2） 血吸附实验 3） 干扰试验。 4） 其它检测方法 5） Shell viral culture 6） 基因工程细胞学 7 ） 电子显微镜 8 ） 标本的直接检测 9 ） 检测固定的细胞 10) 感染型细胞的检查 11) 光学显微镜 12） 细胞学检查 13） 组织学检查 14) 核酸检测,病毒包涵体,抗 原 检 测-1用于病毒抗原检测的方法包括IFA、IHC、ELISA,优点： 可在接到标本几个小时内获得结果，检测不 需活病毒（特别是标本运输时间较长时） 在下列情况可进行抗原检测 有病毒抗原表达； 有特异性抗体； 抗原有变异，但在不同株之间有共同抗原位点；

8、 抗原在运输贮藏时稳定。,抗 原 检 测-2,标本：呼吸道（鼻咽拭子或鼻咽洗液，气管呼吸道灌洗液）病毒：呼吸道合胞病毒，流感病毒A ，B。副流感病毒1-3 麻疹和腺病毒,风疹 标本：皮肤和黏膜拭子病毒：水痘病毒，疱疹病毒 标本：结膜或角膜拭子病毒：疱疹病毒,腺病毒 标本：粪便病毒：腺病毒（肠道血清型），轮状病毒,肠道病毒?等标本：血病毒：CMV（pp65），乙肝病毒（表面抗原），HIV（p24）,用于病毒诊断的核酸检测标本,血液、CSF、尸检组织标本, 粪便标本,咽拭子、鼻咽拭子和下呼吸道分泌物吸取液,血 清 学 诊 断-1,测定病毒抗体是最早应用于病毒学诊断的方法之一，仍然在病毒学诊断中占有

9、重要的地位。血清学诊断对那些不能培养或培养缓慢或较困难的病毒尤其重要。血清学方法的敏感性十分重要， ELISA法应用广泛。 1）病毒抗体反应的动态变化 2) 再感染和再激活时抗体的变化 3）慢性感染的血清学 4）血清学方法 A 结合试验： B 抗原分离试验： C 功能测定试验 D 凝集试验 5）特异性IgM, IgA和IgG抗体 6）唾液和尿液中的抗体检测 7）CSF中抗体检测,血清学诊断-2病毒的急性期感染,Epstein-Barr virusaCytomegalovirus ( mononucleosis syndrome)aHepatitis Viruses (A-E)bMeaslesa

10、RubellaaMumpsaParvovirus B19aEncephalitis virusesaRabiesHemorrhagic fever virusesaDengueaHuman immunodeficiency virusHuman T-cell lymphotrophic virus types I and IIA：检测特异IgMB：用于HAV和抗HBV核心抗原的IgM检测,血清学诊断-3测定对特定病毒的免疫水平,VZVHSVEpstein-Barr virus (Ig G to the viral capsid antigen)RubellaMeaslesParvovirus

11、B19Hepatitis A virus (total antibodies)Hepatitis B virus (anti-HBs),传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,23,常用的病毒ELISA检测方法主要有两种：Capture ELISAIndirect ELISA 一般认为抗体捕捉法ELISA比间接ELISA法优越，无需对血清进行预处理,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,24,血清学检测IgM/IgG抗体检测,间接法ELISA检测IgM/IgG抗体原理图（ IgM检测时，血清需进行预吸附以去除IgG抗体和类风湿因子）,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,

12、25,ELISA捕获法检测风疹IgM抗体原理图,血清学检测,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,26,新技术-多种病原的同时检测,目前广泛使用的免疫学试验方法只能获得单个病原体的实验数据不明原因疫情需要按顺序进行排查耗费时间和价格较高试验方法不统一昂贵的自动化信息量少。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,27,多种病毒抗体的同时检测,可同时得到多种参数,短时间内价格低廉用统一的方式简单的自动化,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,28,新技术:短时间内可同时得到多种病原体检测结果相对价格低廉试验方法统一易于自动化，操作简单。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性

13、-许文波,29,基本原理,首先将不同病原体的抗原包被于球形固相载体上,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,30,对球型固相载体进行编码,用不同的荧光色的深度来表示不同的抗原在700纳米时其吸收值最大,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,31,混合包被的抗原,与待测血清中抗体结合,加入荧光标记二抗,照射: 488 纳米的 激光,绿色荧光(定量) : 标记物指示抗体多少 红色荧光(定性): 决定被检物是是哪种病原体,流程图,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,32,检测: 原理(2),照射: 488 纳米的 激光,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,33,检

14、测: 原理(3),绿色: 荧光标记物多少抗体 (定量),红色: 包被的抗原哪种抗原 (定性),传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,34,检测: 报告输出格式,定量,定性,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,35,检测需要流式细胞仪,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,36,多种检测技术的应用-ToRCH,一些病原体能感染孕期妇女导致新生儿先天畸形如：弓形虫风疹病毒巨细胞病毒单纯疱疹病毒,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,37, 主要依靠临床诊断导致误诊，病原构成 不明确，难以发现新病原引起的疾病负担 特异诊断主要依靠病原分离慢，灵敏度不高 暴发应急病因

15、学诊断效率低常不能确定病 原，或时间长、病原多、工作量大 水、食品、空气标本细菌检测灵敏度低无法 开展常规监测、危险度评估、暴发流行中溯源 分离菌落依靠血清鉴定和生化反应慢，通量 低，只能选择部分“疑似”菌落进行鉴定，偏主 观、存在漏检,5.诊断试剂国产化和产业化的展望1-商品化试剂严重滞后,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,38,引起五大症侯群的常见病原微生物,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,39,5.诊断试剂国产化和产业化的展望-2,现阶段病毒学诊断已成为医院里的常规服务，特别是下列因素的影响，加速了临床医院和CDC病毒病诊断的发展。 1） HIV的流行和AIDS

16、的治疗 2）病毒感染与器官移植 3）多种抗病毒制剂的应用，依赖于正确的诊断 4）诊断技术的发展:单克隆抗体（Mcab）、基因工程抗 原和PCR技术的应用，使诊断时间大大缩短。 5）多种方法应用于病毒病感染的诊断。病毒培养、检测 抗体、检测抗原、核酸等。 6) 病毒病的强化控制,消除和消灭 但大部分病毒诊断技术仍集中省级CDC、大医院或大的医疗研究中心,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,40,5.诊断试剂国产化和产业化的展望-3在一些临床领域病毒实验室诊断具有重要的位置,免疫缺陷的病人、器官移植的接受者、HIV 或AIDS. 急性呼吸道感染、儿童胃肠道感染。感染单核细胞增多症，急慢性

17、病毒性肝炎、严重的眼部感染。 新生儿或胎儿先天性感染。发热和出疹性疾病通过病毒学检测直接或间接确定和评价一个新的治疗方案。例如对HIV或AIDS的抗病毒治疗中依赖于血浆的HIV RNA的含量、基因型别和表型及对药物的抵抗。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,41,5.诊断试剂国产化和产业化的展望-4诊断病毒学在公共卫生方面的重要性,监测和分析新的病毒分离株,包括新的血清型或基因型，监测可能的输入病毒或预测可能的流行。早期诊断麻疹和风疹为强化免疫提供科学依据，防止暴发和流行。鉴定虫媒脑炎，帮助制订控制蚊子的措施。检测Norwalk病毒和其他杯状病毒（caliciviruses）帮助制

18、订和控制食物和 水传播的胃肠道炎。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,42,“阜阳13例不明原因肺炎死亡病例”,病例高度散发不具有传染性，可能为感染性疾病只在一例中发现疹子以“重症肺炎”为主要临床表现病情进展迅速，大部分入院几小时-2天死亡病因不明讨论会:EV71感染中枢 神经系统引起的 心肺衰竭可能性最大,“疫情概况”,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,43,阜阳不明原因肺炎死亡病原学鉴定,4月18，中国CDC组织专家组,流行病学,临床资料,实验室检测,EV71是此次疾病的主要致病原,证实4月23日,分析判定病原和实验室检测方向为=HEV71,传染病诊断技术国产化和产

19、业化的必要性-许文波,44,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,45,手足口病第38种需上报的传染性疾病,2008.05.02,手足口病皮疹分布 1. 颊粘膜和手指; 2. 手掌 3. 足底 4. 唇粘膜 5.咽峡炎,1,2,3,4,5,EV71; 无皮疹的重症病例,5,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,46,2005年8月17日,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,47,468例发热呼吸道传染病爆发主要临床表现构成图,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,48,6.临 床 中 的 病 毒 病 诊 断,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,49,

20、6.临 床 中 的 病 毒 病 诊 断,疱疹病毒感染呼吸道感染胃肠道病毒感染病毒性脑膜炎和脑炎病毒性肝炎人乳头瘤病毒（Human Papillomaviruses）人类多瘤病毒（Human Polyomaviruses）病毒引起的出疹性疾病肠道病毒感染病毒先天性或新生儿感染逆转录病毒Retroviruses 外部传入病毒的感染,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,50,疱 疹 病 毒 感 染 -疱疹病毒,HSV和VZV，可感染中枢神经系统引起脑炎、脑膜炎和脊髓炎。可通过培养和抗原检测来诊断，新鲜的水泡更易于分离病毒。HSV对兔肾，豚鼠胚胎细胞；貂肺细胞和Vero细胞培养敏感。VZV培

21、养较困难，只在人胚纤维细胞中和猴肾上生长。FA可快速诊断HSV和VZV，也可用PCR法检测。血清学：需双份血，特别是血清学交叉反应，不能区分初次和无症状（复发）。HSV-型和型特异性诊断方法已建立。 VZV：如果在未能获得病毒培养和抗原检测结果时，血清阳转可诊断。如果IgM阳性证明可能是原发感染或激活。ELISA，IFA和乳胶凝集法已广泛应用于VZV免疫力的测定。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,51,疱 疹 病 毒 感 染-疱疹病毒,CMV、HHV6、HHV7这些病毒在人群中广泛感染多为无症状，但有时特别是免疫抑制者中引起严重疾病。问题是检测的结果是否伴随病理损害，组织学检查可

22、提供依据。CMV只在人胚纤维细胞中生长，7-21天才能出现CPE。Shell viral诊断CMV可在24-28小时出结果，在临床上快速诊断尤其重要。CMV培养结果阳性不一定代表引起疾病，无症状者唾液和尿液中都能释放病毒，对诊断意义不大。但血液中的培养更确切，因为无症状者血清中无CMV（免疫抑者除外）。但血清阳性的免疫抑制者可无症状或提示有感染引起的症状。FA和IP法快速检测血中白细胞上的PP65抗原。CMV在正常机体里常表现为单核细胞样增多症，通常检测CMV-IgM做为一种简便的诊断。EBV感染可导致CMV IgM假阳性，CMV引起的单核增多症可从尿和血中培养到CMV或PCR检测PP65基因

23、。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,52,疱 疹 病 毒 感 染-疱疹病毒,CMV的核酸检测法：用PCR和地高辛标记的核酸杂交法检测CMV的DNA。通常检测血中DNA证实急性期感染，并且血清DNA阳性的个体提示正在临床感染期或近期感染过。（免疫抑制个体者除外）。定量检测血中CMV DNA量对该抗病毒治疗尤为重要。CMV的ELISA血清学诊断方法：不用于（免疫抑制个体），但用于检测献血者、受血者、器官捐献者和接受者的CMV的免疫状态。CMV在免疫抑制的个体：在器官或骨髓移植后，没有完美的方法诊断CMV感染综合征。CMV局部感染的诊断：CMV感染肺炎或胃肠炎等并不一定伴随病毒血症，最

24、好的方法采取局部组织检查，诊断中检查中枢系统感染最好是检测CSF中DNA（PCR法）CMV在移植后症状前的诊断：术者4个月内每1-2周进行血清中CMV检测，PCR最敏感，也可用核酸杂交，PP65抗原检测法。细胞培养最不敏感。评判抗CMV治疗的效果： 先天性CMV感染通过培养或PCR检测出生后第1周尿中的病毒，也可检测羊水（但时间要准确）人单疱病毒6和7型。HHV6引起婴儿红疹，也可引起发热、脑炎、肝炎，骨髓转移失败。HHV7也可引起出疹。两者广泛存在，多为无症状排泄病毒，在婴儿血清抗体阳转可诊断急性感染，PCR可检测到外周血单核细胞中HHV6。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,5

25、3,疱 疹 病 毒 感 染,1）-疱疹病毒2）-疱疹病毒3）-疱疹病毒,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,54,疱 疹 病 毒 感 染-疱疹病毒,现已发现EVB和HHV-8（ KAPOSIS Sarcomn virus）对人致病，在淋巴和上皮细胞中增殖后潜伏在淋巴细胞中。EB病毒引起单核细胞增多症，依据血中特异性VCA（Capsid antign）,EA(early Ag)和NA(nuclea Ag)的抗体产生状况来诊断。VCA-IgM阳性代表急性感染， Anti-EA只在部分急性期病人检测到，Anti-EA和Anti-NA对确定感染的时间有意义。VCA IgG用于人群免疫状态的调

26、查。和其它疱疹病毒一样，在免疫个体也可引起严重的疾病，在AIDS中也引起原发性CNS淋巴瘤（PCR检测），EB引起PTLD移植后（淋巴增殖紊乱）,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,55,呼 吸 道 感 染,标本采集： 鼻咽分泌物、洗漱液、咽拭子、气管镜获得的气管吸液标本和灌洗液。方法: 1) 吸道病毒的培养 2) 呼吸道病毒抗原的检测 3) 呼吸道病毒的核酸检测方法,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,56,胃肠道病毒感染,轮状病毒、腺病毒（血清型40、41）、caliciviruses、astroviruses、toroviruses这些病毒的诊断多依赖于电子显微镜检查

27、，抗原检测和核酸技术。乙酸油酰或磷钨酸负染电镜可直接检测到粪便中的病毒，caliciviruses用免疫荧光，多用于专项实验室。抗原检测：ELISA和乳胶凝集法应用于粪便中的病 毒检测。在感染期轮状病毒在粪便中可达1011粒/g。 核酸检测：RT-PCR和PCR已应用于检测，但无抗原 检测优点多，但此方法可能对环境中的病毒和分子 流行病学更有用。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,57,病毒性脑膜炎和脑炎,脑膜炎 肠道病毒性脑膜炎 HSV脑膜炎大多为伴随HSV-2，复发时病毒培养为阴 性,PCR敏感性和特异性更好些。 VZV脑膜炎 脑炎： HSV脑炎 虫媒病毒脑炎 狂犬病毒 引起脑

28、炎和脑膜炎的病毒EVB、HHV-6、B-VIRUS、麻疹、腮腺炎、风疹、流感、腺病毒、 在免疫抑制个体中引起中枢神经系统感染 CMV引起脑炎和在中AIDS引起radiculomyelitis ，CMV 很难从CSF中培养出来,但可用PCR检测，通过PCR定量， 可区分是CNS感染或无症状感染前期。 EB病毒在AIDS中引起CNS淋巴瘤，PCR法可检测CSF中 的EB病毒。 PCR诊断JC病毒,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,58,病 毒 性 肝 炎,6种肝炎病毒A、B、C、D、E和G是已知的。 甲肝检测IgM抗体，症状出现后既产生IgM并持续数月， IgG抗体则检测其对甲肝免疫力

29、及以前的感染史（或接种史） 乙肝 有数个不同的血清学方法检测HBV的感染。检测HBs表面抗原证实现在乙肝 的感染，如果HBs抗原阳性超过6个月， 诊断为乙肝病毒携带者。 在HBV感染后产生HBV抗体和HBC 抗体，抗HBc抗体是首先出现的，并意 味着临床感染，抗HBs 随后产生，两者都可持续数年。 HBc-IgM抗体阳性证明，急性HBV感染，特别是在窗口期，HBS和HBS抗 体都阴性时更有意义。 疫苗接种后只产生HBs抗体，此也提示对HBV有免疫力。 HBe抗原是C抗原的组成部分，E抗原阳性意味着病毒在复制，是活动期，抗 HBe抗体在HBV携带者中阳性时提示不在活动期。 PCR检测是最敏感的方

30、法，也可定量测定DNA量。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,59,病 毒 性 肝 炎,丙肝ELISA检测最常用，如阳性多用放免沉淀来证实RT-PCR也用于定量RNA检测，可监测治疗效果。核酸杂交和序列分析也应用于HCV基因型别的鉴定并对治疗方案进行订正。 D、E和G型肝炎检测HDV抗体，只在HBV感染的个体中有HDV，可通过RT-PCR检测。HEV通常用ELISA法，IgM阳性提示近期感染。HGV诊断方法还未商品化。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,60,人类多瘤病毒Human Polyomaviruses,JC和BK病毒是两种对人致病的病毒JC病毒引起进行性多发性

31、脑病，常见于AIDS患者 BK病毒引起出血性膀胱炎多见于骨髓移植的者BK生长于人胚肾细胞，JC只生长于人胎脑或人胎 细胞中。PCR已用于检测CSF中的JC和尿中的BK。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,61,人乳头瘤病毒Human Papillomaviruses,HPV和宫颈癌有关，特别是感染16、18、31和45型HPV与宫颈癌高度相关HPV不能细胞培养。 如发现在宫颈 papanicolaou 氏涂片上有HPV的细胞特征，提示有HPV感染。PCR和核酸杂交已应用于检测临床标本中的HPV DNA宫颈拭子的HPV检查已应用于高危人群，最常用的基因编码区是L1 MAJOR CPS

32、ID（在所有型别HPV常见）型别鉴定通过不同特异性DNA 探针来进行，也可做定量DNA检测HPV是否作为常规宫颈癌的预防性检查还在研究之中。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,62,病毒引起的出疹性疾病,常见于麻疹、风疹、腮腺炎、小DNA病毒B19、肠道病毒。除了B19外上述病毒都可用细胞培养诊断，但现多被其它快速诊断方法所取代。ELISA法查特异性IgM抗体已广泛应用于麻疹、风疹、腮腺炎和B19的早期诊断，也可通过双份血清抗体的阳转和4倍升高来诊断也用IgG抗体来评价4种病毒的特异性免疫力。麻疹和风疹在出疹3天内75%患者IgM阳性，4-28天100%阳性。查CSF中IgM也可诊

33、断急性麻疹脑炎，风疹脑炎和腮腺炎脑炎。通过检测血和CSF中麻疹IgG抗体的滴度和比值可诊断SSPE。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,63,病毒引起的出疹性疾病,B19感染早期可引起溶血危机时血清中可能查不到IgM，但可通过PCR查到B19-DNA。在免疫抑制个体中B19造成造血干细胞的慢性感染，导致再生障碍性贫血，这种慢性感染者可能不产生B19抗体，但可通过检测血中B19DNA来诊断。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,64,麻疹病例的临床诊断发热38OC，出现斑丘疹和至少伴有以下一种症状：咳嗽，鼻炎或结膜炎或医务人员疑为麻疹,EchovirusesEcho病毒,M

34、easles 麻疹,Parvovirus B19细小病毒B19,Dengue登革热,HHV-6疱疹病毒6型,Rubella 风疹,Others 其它,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,65,发热伴出疹，发热37.5，持续一天以上，伴有全身或局部的皮肤或粘膜出疹。,肠道病毒（HEV71，CA16）,登革热病毒,麻疹、风疹、 B19,其它,发热伴出疹症候群,伤寒、副伤寒,链球菌伯氏疏螺旋体（莱姆病）,水痘,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,66,Relative levels of antibody,用于IgM抗体检测的血清标本要在初次接触病人时马上采集，以及出疹后28天内

35、采集用于病毒分离的标本,需出疹天内采集咽拭子或尿液,麻疹病毒感染体液免疫过程,必要日期:最后接种日期出疹日期出生日期,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,67,流行时间：春季合适的气候条件，呈规律性季节发作 传播途径：主要靠气溶胶来传播。上呼吸道黏膜和鼻咽淋巴组织是病毒进入机体的入口 所致疾病：国际疾病分类委员会将风疹分为两种：风疹和先天性风疹综合症 大多数婴幼儿或成年人风疹病毒的感染属于一过性和无明显症状 的亚临床感染 孕妇如在妊娠早期感染风疹病毒，所生的新生儿可患先天性心脏 畸形、耳聋、发育障碍等称为先天性风疹综合症（CRS）,风疹病毒,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文

36、波,68,该图示意了典型风疹病毒感染的免疫反应,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,69,临床标本血清,急性期单份血,急性期，恢复期双份血,ELISA IgM,对临床标本进行病毒监测的流程图-血清标本,ELISA IgG,(+),近期风疹感染,(),近期无风疹病毒感染如果采集血清是出疹5天内的，需再采集第2份血标本重新检测,恢复期病人血清中风疹IgG抗体滴度比急性期有4倍或4倍以上升高或急性期抗体阴性而恢复期抗体阳转。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,70,对临床标本进行病毒监测的流程图-病原学标本直接对临床标本进行RT-PCR或rRT-PCR病毒分离及其鉴定,临床标本

37、鼻咽拭子,病毒分离（Vero/SLAM 细胞）,盲传2代，共培养3代,检测核酸进行鉴定收获病毒冻存到70c将保存的病毒运送到国家实验室进行序列分析,RNA 提取 RT-PCR或荧光定量RT-PCR,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,71,胎儿和新生儿的病毒感染的试验,近年由于超声波的形态学检查、获得胎儿标本技术的改进和分子生物学技术的发展，使围产期的病毒学诊断已有了较大的进步。只需极少量标本即可检测到病毒的核酸或抗体因为IgM抗体不能通过胎盘，如果发现胎儿或新生儿有IgM抗体可证明其为先天感染（怀孕20周后胎儿有产生IgM的能力）。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,7

38、2,用于诊断胎儿和新生儿病毒感染的试验,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,73,小RNA病毒科（Picornaviridae）,人肠道病毒,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,74,Courtesy of Linda M. Stannard, University of Cape Town, S.A.h,30nm二十面体对称无包膜,人肠道病毒的毒粒结构,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,75,手足口病(HFMD),病原: 手足口病可由多种肠道病毒所引起，其中包括 CoxA5,A10, A16, A19, EV71,以及部分埃可病毒和柯萨奇B组病毒, 以CoxA

39、16 和 EV71最为常见 传播途径: 粪-口途径传播: 唾液与粪便; 呼吸道传播: 空气飞沫; 接触传播 疱疹液中含大量病毒，疱疹破溃后病毒排出。 HFMD为全球性传染病，在全球广泛分布，无明显的地域分布, 但 近年EV71在东南亚一带流行, 引起较多的重症和死亡病例。,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,76,经水传播的病原体的感染途径,主要研究内容-1,针对 脊灰病毒、NPEV、轮状病毒、诺如病毒,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,77,7.分子流行病学在病毒病诊断中的应用通过鉴定病毒的分子特征对流行病学方法进行补充,特别是无流行病学资料时.确认/鉴别病毒的来源确定

40、病毒的传播途径提供评估控制策略效果的方法辅助分析不寻常的或严重的病例，例如SSPE,MIE,CRS。评估病毒的传播模式提供评估控制策略效果的有效指标。帮助建立诊断方法帮助抗病毒制剂的研制（中和抗体）发展疫苗（筛选毒株，和中和位点）,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,78,Major Global Measles D5 Virus Transmission Pathways 2006-08*,Suspected transmission pathways,Transmission pathways with Epi links,Acknowledgement:Data provide

41、d by WHO Measles/Rubella Laboratory Network and Measles surveillance programmes,Key,D5,*As of August 2008,78,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,79,Potential virus transmission patterns!,79,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,80,专项参考实验室,地区参考实验室,国家/亚国家实验室,2005年全球实验室网络共监测 120,000 份大便标本,全球脊灰消除的实验室网络,N = 145 个实验室,8. 国家麻疹、脊灰和HFMD

42、实验室网络和研究领域,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,81,麻疹实验室网络,31 Provincial labs331 Prefecture Labs,154 Sub-National Labs,166,Measles Strain Banks,166 countries,10 Sub-National Labs,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,82,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,83,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,84,传染病诊断技术国产化和产业化的必要性-许文波,85,基于症候群的实验室监测流程,5类症候群，包括：呼吸道症候群腹泻症候群发热伴出疹症候群发热伴出血症候群脑炎脑膜炎症候群,确定临床症候群和标本采集原则与规范,选择哨点医院,病例信息采集,标本采集、运输和保存,标本检测,核酸检测,免疫学检测,病原分离,基因组信息,数据集成和信息分析,样本、毒种库管理,监测数据分析利用,其他分析,谢谢,