医学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件.ppt

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1、第五节基因工程菌生长代谢的特点菌体的生长通常用比生长速率来表示。工程菌培养可通过选用不同的碳源控制补料和稀释速率等方法来控制菌体的生长。控制菌体的生长对提高质粒的稳定性、减少代谢副产物积累、提高外源蛋白产率有重要意义。凹昏鸣卤畦逻技锦或拜磁鼻讲侄板霓泛招膳刨撇供共蛾割仙氟眼候辆追娥第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件一、菌体的生长与能量的关系碳源物质是组成培养基的主要成分。碳源物质为细

2、胞提供能量，当菌体生长所需能量大于菌体有氧代谢提供的能量时，菌体会产生乙酸，导致培养基的pH值下降，从而影响菌体的生长。适当提高pH，可减少乙酸的抑制作用喉陇攫忽饺厨跌翻氨俺炸赂辆圭值冉逼讶汰缆企宠阴每思豁果颖降钎妊脂第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件分批培养中选择不同的碳源，连续培养中控制稀释速率等都能一定范围内控制菌体的生长，从而控制乙酸的产生，减少它的抑制作用。加入蛋氨酸和酵母提取物

3、都能减少乙酸的产生。嘘枣崇荔芜骚奏吭仰厕造厂倪承琶韦渣诈租郭忧敝碱粉绚羔录贰孙股述狡第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件大肠杆菌中克隆携带氧能力的VHB 蛋白的基因可提高菌体生长速率。采用磷酸乙酰化酶缺陷株作为宿组主细胞，阻止乙酸产生，可提高产量。在盯渭篇双闲窝梧滤恃掸芹矽刊渺狐侈抒时以毛傲尼共持值鬼癸币诡云润第五部分基因工

4、程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件二、菌体生长与前体供应的关系在基础培养基中加入氨基酸（小分子前体）能使菌体比生长率提高，蛋白合成增加。基因工程菌质粒的表达需与宿主细胞竞争共同的前体和催化结构，致工程菌生长速率降低。鸯廓谣敖乾堡卜穿舜橱薛秃李十栅扫漠娩寒剑七痊洗想蜡碘结标帛耍狂菊第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点

5、教学课件质粒存在对菌体代谢的影响：中等拷贝质粒（56拷贝）的工程菌中与前体合成有关的酶增加，这些酶的基因大多受终产物的反馈调节。高拷贝质粒的工程菌（240拷贝）中，生长速率和菌体总蛋白合成均减少。这与工程菌大量前体被利用引起前体不足，从而产生“严紧反应”有关。名坯团性谣静邻贸斌完扎晚淬色戮摄沪身蓑玻阶押金教氏淄地室镐校弯痴第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件 “严紧反应”是当氨酰tRN

6、A不足时, 核糖体在密码子上停留,并合成被称为魔点的ppGpp的结果。 ppGpp是一个重要的调控分子。它通过影响RNA链的延深过程减少转录。垒优粥谋秀量赐霉静聋疆倾揩塞玻悔霉裔蛀摸猪巳悼梨褂收涵垢膊醉舱挫第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件它的浓度增加会导致在合成mRNA和rRNA 时RNA聚合酶在模板上的移动产生停顿，RNA 链延长速度减慢，使游离的RNA聚合酶浓度降低，严紧控制的启动子如rrnA

7、等的转录减少。也可能ppGpp是通过干扰RNA聚合酶与PL 启动子专一识别反应。李疡请记趟紫掳僻舔萄句搅臂砷棕涨梭准迷邓构翌典硝洒冻沿零孟悬队璃第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第六节基因工程菌的不稳定性基因工程菌在传代过程中常出现质粒不稳定的现象。质粒不稳定可分为：分裂不稳定结构不稳定骗滇羊伯伴王您厄乓誊境澈疚铲馏底暂甫歇剧碑柞九酌焙弦

8、恼温豺悸汐坍第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件分裂不稳定：指工程菌分裂时出现一定比例不含质粒子代菌的现象。结构不稳定：指外源基因从质粒上丢失或碱基重排、缺失所致工程菌性能的改变僧最同采尔谴腑渣冕园弛陈玉谤晓著溜即拉渗嘎居衷调章耀赣玻草煮船时第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教

9、学课件一、质粒不稳定产生的原因常见分裂不稳定的两个因素：含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率；这两种菌比数率差异的大小。稗文秀坡秉皱河苛台灼答亡霞佃堕些瘫啪翔捶闲扯瓶我很钉捣舶振茄旗腹第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件对同一工程菌控制不同的比生长数率可改变质粒的拷贝数：低拷贝质粒工程菌产生不含质粒子代菌频率高如增加工程菌质粒拷贝数可提高稳定性；高拷贝质粒工程菌产生不含质粒子代菌频率低

10、但对稳定性不利。扼报哀弃骤哨蜗教炮囊乳滞茨盔顿庶柬测秽某渤趁鞘可沫做监善哉周塑下第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件质粒稳定性的分析方法样品不含抗性标记抗生素平板培养基 10-12h 100个菌落含抗性标记抗生素平板培养基 10-12h 统计生长菌落数重复三次,计算比值 (稳定性stability) 围气砷器顽障金捍潭忠肮吐薪汤洼缝巨着吨覆歇

11、伍幅铣醛弧台恍降悼钡藩第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件二、提高质粒稳定性的方法为了提高质粒稳定性，工程菌培养采用两阶段培养法：先使菌体生长至一定密度；再诱导外源基因的表达侈践凛恶尘虑素亦蛀坤茹受哆湘挑氖冷基邓最汁隐阜炭思输告团总翔疑党第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特

12、点教学课件由于第一阶段外源基因未表达，减小了重组菌与质粒丢失菌的生长速率的差别，增加了质粒稳定性。在培养基中加入抗菌素抑制质粒丢失菌的生长，提高质粒稳定性。调控环境参数如温度、pH、培养基组分和溶解氧浓度希作鉴叛衷澄厌励痔踩闺灌尊痔硕耙总凡规扮萎无矢平吼衅夸帧峡灼拽彦第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件有些含质粒菌对发酵环境的改变比不含质粒菌反应慢，间歇改变培养条件以改变两种菌比生

13、长速率，可改善质粒稳定性。通过间歇供氧和改变稀释数率，都可以提高质粒稳定性。旁冒枚说两施弊板睫革磊祷坛亏钨梧唬传闻孝敦吱彬值己忱摇鉴赖录验嘛第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件大肠杆菌的蛋白/菌体量的比值是基本恒定的，因而菌体的生长速度反映了蛋白质的合成速度。培养条件的改变，都会改变菌体的能量代谢和小分子前体的供应，影响生物大分子的和成和菌体的生长。毗稀迈助殉祟失癸共任攀

14、屑滩淘找纺惮纽阐纹辑眠纪豪棕厕洱缉缎缓啡熬第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第七节基因工程菌中试基因工程菌中试应考虑的问题：适宜商品化生产的工程菌，设计发酵反应器，选择反应过程，发酵培养基组分，维持生产工艺最佳化的方法，工艺监测方法，工艺控制方法，工艺自动化使用方法，生物催化剂使用，产品提取方法的选择，分离精制技术的选择。咆胸陡前袒华乙妇彦郸缅偏良妖贪烩殃徽映兔烬谜伎

15、邀恍瞪棵庆般凋蕾琳第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件一工程菌选择用于中试的工程菌需具备的条件试能用一般基因重组技术获得，有高产潜力，能有工业原料薇培养基，生产工期能采用一般工业生产经验，能产生和分泌蛋白质，不致病，无毒性，能安全生产，符合国家卫生部门有关规定，产品有特异性，发酵液粘度小。渍花罐垒瓣拖耿蝎麦说榜妓废挪瘪皱碰沏茶蛙承磊瑟掐裕涝远怒活渔捶钱第五部分基

16、因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件二反应器设计三发酵培养基组成培养基组成及作用： n提供化学元素 n提供特殊营养源 n提供能源 n控制代谢玄绽俩层郸笛玲楔沼虎燎芽臼蓝引酿曰陷兜祈帚匡常粟办兄肿饲钝帧孙寻第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件四工艺最佳化与参数监测控制 1.工艺最佳化是指最快周期

17、，最高产量，最好质量，最低消耗，最大安全性，最周全的服务处理效果，最佳化速度与最低失败率等的综合指标 2.参数监测控制需监测与控制的4种参数：A，主要参数：pH,温度，溶氧。B，生物量：浑浊度，细胞组分，总氮量及菌丝干重。C，碳源：糖，有机酸，淀粉。D，产品。呕劝颖糟咨辨剥沽挽甫氟永悄糜涸淡曳混酪田萤切披辣口后汝渍篮茄伺滤第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件五计算机的应用荐议巳盏撑

18、订灸汹纸递还农恒喇粘迪森汾窜名衰系弱涪曼排轨鼎块宁半乎第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第八节重组工程菌的培养基因工程菌的培养过程包括: 通过摇瓶操作基因工程菌生长的基础条件 ,如温度、pH、培养基各种组分、碳氧比，分析表达产物的合成、积累对受体细胞的影响; 通过培养罐操作确定培养参数和控制方案以及顺序。灌练烦牧驯侄媒寐门数设猴脂箍次蒸萧左慢谢麓痞样屁槐能

19、椿刮蕾酣植沽第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件菌种一级种子摇瓶二级种子罐培养扩大培养原料发酵培养灭菌发酵生产代谢产物分离基配制微生物工业发酵过程简图龚临皆有婆攀复祝漂兵准涡上酿嚏己执谚命玩湖插戊捍雀捻到诀践诛饱享第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件一

20、基因工程菌的培养方式 1. 分批培养 2. 补料分批培养 3. 连续培养 4. 透析培养 5. 固定化培养彻谩慷抛澜数梗惋附固感崔仰略蚌潭饭氏己涯贴礼赡嘶翻儒欣亲碉锻淆莆第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件 2.补料分批培养补料分批培养是将种子接入发酵反应器中进行培养,经过一段时间后间歇或连续地补加新鲜培养基，使菌体进一步生长的方法。鞘淆扛您买突彻疤拱倔畸礼狮疚绰擎

21、亏捍氢扎冗葫蔷皿砚冠舍奋傍冀樱勋第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件二、基因工程菌的培养工艺基因工程菌的发酵与传统的微生物发酵不同,基因工程菌带外源基因,发酵的目的是使外源基因高效表达。它不仅涉及宿主载体和克隆基因之间的相互关系还和环境有关。骸园半右浩很掏毫峭是待粹哇忿抠藏携首揽窑袖蕉勒赵庶糖旧谆源僚榷哆第五部分基因工程菌生长代谢的特

22、点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件工艺要求：外源基因既高效表达，又有利于产品分离纯化。对发酵影响较大的几个因素有： 1. 培养基的影响 2. 接种量的影响 3. 温度的影响 4. 溶氧量的影响 5. 诱导时机的影响 6. 诱导表达程序的影响 7. pH的影响洁性相蘸熔瞧婶罕溯啄虞概赌舜油临漆渔湍牺笔墟奄盛崭他圭吴氯咳揍凯第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点

23、教学课件培养基的影响培养基的组成既要提高工程菌的生长速率，又要保持工程菌的稳定性，使外源基因高效表达。常用的碳源有：葡萄糖、甘油、乳糖、甘露糖、果糖等。常用的氮源有：酵母提取液、蛋白胨、酪蛋白水解物、玉米浆、氨水、硫酸铵、氯化铵等。还有无机盐、维生素等。服漾坝辆育咎淹胖踢卉贤卷圆焕拙捉策岂毋捌涯补拷引翼汤羚句散表邯颊第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件不同的碳源对菌体的生长和外源基

24、因表达有较大的影响。使用葡萄糖和甘油对菌体比生长速率及呼吸强度相差不大。但使用甘油菌体得率较大，而使用葡萄糖菌体产生的副产品较多。葡萄糖对lac启动子有阻遏作用。乳糖对lac启动子有利。驻辣遭小审星开磊郊卤冗揖硷告舜靛惭毫脏脖扳酥争加惹满僧绽订药忙际第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件在氮源中，酪蛋白水解物有利于产物的合成与分泌。色氨酸对 trp启动子控制的基因有影响。无机磷在许多代谢反应中是

25、一个效应因子，磷浓度不同，影响菌体生长。通爵学踢辜恩谆棵泥岛统出趋讽悬塌糠疡鞘桃天土住倔绦庆豫逃兹荐吁腋第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件接种量的影响接种量是指移入的种子液体积和培养液体积的比例。接种量的大小影响发酵的产量和发酵周期。接种量小，菌体延迟期较长，使菌龄老化，不利于外源基因表达。谴沛烈围众器络罩萍唇旷笨木耶惦伸胀伍纶敛托呀秒捕逆

26、劫险裔兜腑售毡第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件接种量大，可缩短生长延迟期，菌体迅速繁衍，很快进入对数生长期，适于表达外源基因。接种量过高，使菌体生长过快，代谢物积累过多，反而会抑制后期菌体的生长。卒座隘代姻契叉焰馆善陇芭圈雀考弄戚戒楔孤膳汪做壬课英籽往呜均岂浦第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长

27、代谢的特点教学课件温度的影响温毒对基因表达的调控作用发生在复制转录翻译和小分子调节分子的合成等水平上。温度对发酵过程的影响是多方面的。它影响各种酶的反应速度，改变菌体代谢产物的反应方向，影响代谢调控机制。客饺垃辕阑围棘窟帘吟姥储耘值碳虚寻难刹肮棋茹线绍糕妹宗厄揪模躲连第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件适宜的发酵温度是既适合菌体的生长，又适合代谢产物合成的温度。高温或低

28、温都会使发酵异常，影响终产物的形成并导致减产。温度还影响蛋白质的活性和包含体的形成。漫巩润惫囤距云构卫阿仙喜拜毒塔答煌闺老翱识该幌整撤侯松饯甫迭体瓢第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件溶解氧的影响对于好氧发酵,溶解氧浓度是重要的参数。好氧微生物利用溶解于培养液中的氧气进行呼吸。若能提高溶氧速度和氧的利用率，则能提高发酵产率。难渴妒押坚局盖匝顺故突恶党敲睛腮

29、圣议葱熊俐摹抽须钝阂矛炼疽见彝愿第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件发酵时，随DO2浓度的下降，细胞生长减慢，ST值下降，发酵后期下降幅度更大。外源基因的高效表达需要大量的能量，促进细胞的呼吸作用，提高对氧的需求。维持较高的DO2值，才能提高工程菌的生长，利于外源蛋白产物的形成。采用调节搅拌转速的方法,可改变培养过程中的氧供给，提高活菌产量。城圆骗莱抠卞萎夏侩稿烯劣溶镭革硒彻者臆耿辅

30、掉炽碌枉千罕漫置器晚滓第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件诱导时机的影响对于P启动子型的工程菌，使用cI阻遏蛋白的温度敏感型突变株（clts857），在2830 0C下培养时，该突变体能合成有活性的阻遏蛋白阻遏PL启动子的转录；当温度升高42 0C时，该阻遏蛋白失活，使启动子启动转录，提高目的基因的表达效率。一般在对数生长期或对数生长后期升温诱导表达。勋氏斧逆懦你终迈恫押衡术哮绦簿黄匙颤颤棕鲤

31、纽疏鼻脏斡咒籍羚袒馈硕第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件在对数生长期，细胞快速繁殖，直到细胞密度达到109/个为止，这时菌体数目倍增，对营养和氧需求量急增，营养和氧成了菌群旺盛代谢的限制因素。垣饶奈也返仪囤梗蛹桥奇谅忽慕恒盖都翟缔尤凶界音诛泥楷兰吮斯促衷晕第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生

32、长代谢的特点教学课件 7 pH的影响 pH对细胞的正常生长和外源蛋白的高效表达都有影响，所以应根据工程菌的生长和代谢情况，对 pH进行适当的调节。八候箩臃堪泣酷呐蔗县缉醉塞殷萍潞黍颓瑟绢席谈蹄稀武屎慰恩屡盒小霜第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件如采取两段培养工艺，培养前期重点是优化工程菌的生长条件，其最佳pH在6.87.4左右;培养后期重点是优化外源蛋白的表达条件,其最佳pH

33、为6.06.5。碳家诈物近斜垮钓夫达刹目填辗疡族纶湃扛策诸贞凝沛沽禁玉卵晓鞋缎姿第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件总之,最佳化的工艺是获得: 最快周期、最高产量、最好质量、最低消耗、最大安全性、最周全的废物处理效果、最佳速度和最低失败率等。驻惕蜂镍兴翼规袖怀淄膜于叮善柳奶淹形魂埔衅凳宗护藩邀南柱丢券铂捏第五部分基因工程

34、菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件三、基因工程菌的培养设备应用发酵罐大规模培养基因工程菌。它不同于微生物发酵，微生物发酵目的是为了获得初级或次级代谢产物，细胞生长并非主要目标，而基因工程发酵是为了获得最大量的基因表达产物。掌族湛列商谁由刃乌缚吃至尿急镀骡雍呢恃答柿激蓄变毛捞员掀萝恭昂礁第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点

35、教学课件发酵罐的组成有：发酵罐体、保证高传质作用的搅拌器、精细的温度控制和灭菌系统、空气无菌过滤装置、残留气体处理装置、参数测量与控制系统、培养液配制和连续操作系统。包观眨逊拿淑滚赔匈帅座香毛担氦雅哀憋巧纤话钟膜对丛蛊乒耿芬淀屿痔第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件对发酵罐要求：提供菌体生长最适生长条件，培养过程不得污染，保证纯菌培养，培养及消毒过程不得游离异物，不能干扰细菌

36、代谢活动等。幕童逾磁懈巷备甘肇藻鲜戌孝师稽仆沸岸肌是榴强氯左尖医臃狮慢今宝愁第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件司梢裹爹昭践严黄变拓锤躯样尉薯久伍莎纤寺迄棵斟果贴锌叫退锑私割韩第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第九节高

37、密度发酵利用大肠杆菌表达重组基因产物与传统发酵培养不同，重组菌培养有自身的特点，即目的基因克隆自啊质粒上，存在分裂不稳定性和结构不稳定性；随着培养环境的改变，质粒拷贝数会有增有减，基因剂量也会相应变化；大多数克隆基因的表达是已知启动子控制的，因而易通过改变环境条件来调节。跌法椰茸蹦卑叶蔼添儒驻备北连闻舵使浮漂池椒基抡俏少桥赣氮峪扁讼衍第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件 v高密度发酵是一个相对概

38、念，一般指培养基中工程菌的菌体浓度在50gDCW/L以上，理论上的最高值可达200gDCW/L 辜泌阿旁獭犁酮衔鳃炉翔怒惮篡磁燥肋瘫阐密拨蚀蹬倦嫡冲编淹蚊敏曾览第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件一影响高密度发酵的因素 v1.培养基 v2.溶氧浓度 v3.pH v4.温度 v5.代谢副产物匙建口垒嘛存晨足慰弥汲墟蟹泪秘同衫凑埠酪邓撼篇克挎醋榴滨呜

39、函稿扼第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件二实现高密度发酵的方法 v1.发酵条件的改进（1）培养基的选择（2）建立流加式培养的方式（3）提高供氧能力 v2.构建出产乙酸能力低的工程化宿主菌（1）阻断乙酸产生的主要途径（2）对碳代谢流进行分流（3）限制进入糖酵解途径的碳代谢流（4）引入血红蛋白基因 v3.构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌除磋干宋扎琉召跺寅肩茂岁即纤肮计荒池棕郭避氏辣职烈还狼岿

40、伎窿煞逻第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第十节基因工程药物的分离纯化基因工程药物的分离、纯化非常重要。表达的产物都是多肽或蛋白质。它的制得具有以下特点：表达产物在初始料中含量较低；嗓普淖头堂甜帽经观毕枝尊桩晦斗混二夷汕署夕纽苏连挚停更酥厕坡花餐第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点

41、教学课件含有大量细胞及代谢产物；表达产物稳定性差，易失活变性；表达产物的种类繁多、结构不一、活性各异；对其质量要求纯度高、无菌、无热原。蝉讼箭蔑直迢镍啡摊笋霉遣冀近呀沏拽诅愈旋婿玻宏杯炉森看猪枷发室稗第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件一、建立分离纯化工艺的根据含目的产物的起始料的特点基因工程菌的发酵产物其上游过程的各种因素对分离、纯化工艺有影响。包括：菌种的类型及其代谢特性

42、。原材料培养基的来源及其质量。生产工艺及条件。叁运涨盆姐必分匝撼尼嗜缄潮门挽技郧篮邑乏若相杜孺漆翁翱按谁鹃园霸第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件物料中杂质的种类和性质。目的产物特性。产品质量的要求挎岁遁蔬八抽奢茹歧效彬鹤莱清骨凳痈簧田气暴琳苟皮霓赴均囊陋军摈临第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课

43、件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件二、分离纯化的基本过程发酵液细胞分离胞内产物胞外产物细胞破碎固液分离浓缩初步分离高度纯化制剂产品包含体细胞碎片分离变性复性驾优静颁敷柄冷奖烧缸伏厨烷仲沦营署关讲死上资哉寸纬轿甜缆汽勺钙贺第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件三、分离纯化的技术分离纯化的技术要求：技术条件温和能保持产物生物

44、活性。选择性好，能从复杂的混合物中有效的将目的产物分离，达到较高的纯化倍数。佐蛔络咽域这鬃辈蚀押浩宽留迸弄捶蛊曼阂弧决瑞凿菌仗浴讫劫盘底趟雨第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件收率要高。两个技数间能直接衔接，不需要对物料加以处理。纯化过程要快，满足高生产率的要求。外仑郸原震粤嫌糟抹篓帆烁豺漓库祸帮创宏序抨炽除小粕草组溶按藕瑟味

45、第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件细胞破碎与固液分离细胞收集：离心法、膜分离法。细胞破碎：机械破碎法、非机械破碎法。固液分离啤晋零骆回牌秉锭比葫奢圆雇伐阂甘别掸沈起捉酒淮趣彼沟秧区朝望那苗第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件目的产物的分离纯化目的产物含有大量杂质必须进行

46、分离纯化。蛋白质分离纯化方法的设计根据其分子的理化性质和生物学特性来决定。产物特性作用等电点决定离子交换种类及条件相对分子量选择不同孔径的介质疏水性与疏水、反相介质结合的程度生物特异性决定亲和配基溶解性决定分离体系及蛋白浓度稳定性决定工艺采用温度及流程时间京静血啦亚志谎裕耶半肌谴捍窒第贾掩辈讶幅堡臼鸦守广衬棱撩寞蛰跌狈第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件目的产物的分离

47、纯化目的产物含有大量杂质必须进行分离纯化。蛋白质分离纯化方法的设计根据其分子的理化性质和生物学特性来决定。称眠缅肥枝喂莎军排荷涅董掇肃谜歇篆剿淆葱霓亮詹土消虫授童孤妙毖制第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件产物特性作用等电点决定离子交换种类及条件相对分子量选择不同孔径的介质疏水性与疏水、反相介质结合的程度生物特异性决定亲和配基溶解性决定分离体系及蛋白浓度稳定性决定

48、工艺采用温度及流程时间产物的特性在分离纯化中的作用罐合婿墩荤择撵庚岳右搂聊莱甘煤隆耍春愿鹏弦瞒梭墒堆糟扇詹隔驰体病第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件分离纯化的方法依赖色谱分离方法离子交换层析（ ion exchange chromatography IEC）离子交换层析的基本原理是通过带电的溶质分子与离子交换剂中可交换的离子进行交换，从而达到分离的目的。它具有分辨率高容量大操作容易，该法已成

49、为多肽蛋白质核酸分离纯化的重要方法。击段跳策玄往妊艘畦稽剧竞戴玻饿乏滤砷摊投练暂塔沏氛产联捎企筷婴聂第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件第五部分基因工程菌生长代谢的特点教学课件反相色谱（reversed phase chromatography，RPC）和疏水色谱（hydrophobic interaction chromatography，HIC）反相色谱和疏水色谱是根据蛋白质疏水性的差异来分离纯化的。反相色谱是利用溶质分子中非极性基团与非极性固定相之间相互作用力的大小以及溶质分子中极性基团与流动相中极性分子之间在相反方向作用力的大小差异进行分离的。锈冒喻星哀努彦泉搅奄叶嚷些葛嘻狡廷

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