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1、人胰岛素样生长因子结合蛋白-5（IGF-BP5）ELISA 试剂盒（用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内）本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人IGF-BP5单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IGF-BP5与单抗结合，加入生物素化的抗人IGF-BP5，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合，加入底物工作液显蓝色，最后加终止液硫酸，在450nm处测0D值,IGF-BP5 浓度与0D值成正比，可通过绘制标准曲线求出标本中IGF-BP5浓度。酶标板(Coated Wells )96孔酶标抗体工作液（Enzyme Conjugate ）
2、12ml10 x 标本稀释液(Sample Buffer )12ml20 x浓缩洗涤液(Wash Buffer )50ml标准品(Standards ) : 2.4ng/ 瓶2瓶底物工作液（TMB Solution ）12ml第一抗体工作液（Biotinylated Antibody12ml终止液(Stop Solution )12ml1.收集标本：血清、血浆（EDTA、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测，2-8 'C保存48小时；更长时间须冷冻（-20 C或-70 C）保存，避免反复冻融。腹水1 : 10000倍稀释。尿液、唾液、支气管液、细胞培养上清1: 5倍稀释。血清
3、、血浆至少做1 : 20倍稀释。2.标准品液配制：使用前加入0.3ml蒸馏水混匀，配成 8000pg/ml的溶液。设标准管 8管，每管加入标本稀释液300ul。在第一管中加入 8000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul，移至第二管。如此反复作对倍稀释，从第七管中吸出300ul弃去。第八管为空白对照3. 10 X标本稀释液用蒸馏水作 1:10倍稀释（示例：1ml浓稀释液+9ml蒸馏水）。4. 洗涤液：用重蒸水1:20稀释（示例：1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水）1. 加样：每孔各加入标准品或待测样品100ul，将反应板充分混匀后置 37 C 120分钟2. 洗板：用
4、洗涤液将反应板充分洗涤4-6次，向滤纸上印干。3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。将反应板充分混匀后置 37 C 60分钟。4. 洗板：同前。5. 每孔加酶标抗体工作液 100ul。将反应板置37 C 30分钟。6. 洗板：同前。7. 每孔加入底物工作液100ul，置37 C暗处反应15分钟。8. 每孔加入100ul终止液混匀。9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。2. 以标准品 4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 pg/ml 为横坐标，OD 值为纵坐标, 在坐标纸上作图，画出标准曲线。1.2.3.OD值在该曲线图上查出相应IGF-BP5含量，再乘上稀释倍数即可。1.2.灵敏度:特异性:重复性:最小的IGF-BP5检测浓度小于30pg/ml。 可同时检测重组或天然的人 板内、板见变异系数均小于IGF-BP5。不与人其它细胞因子有交叉反应。10%。以上标准孔及待测样品均建议做复孔， 洗涤过程很关键。洗涤不充分将导致精确度误差及每次测定应同时做标准曲线。OD值错误地升高。3. 板条开封后剩余板条要再封好，保持板条干燥4. 本试剂盒宜置4°C冰箱保存。5.本试剂盒仅用于科研，不能用于临床诊断!上海西唐生物科技有限公司电话：021-5522987255229873技术咨询: