实验室常用培养基.doc

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1、实验用培养基配制 1 牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌培养）牛肉膏 3g，蛋白胨 10g , NaCI 5g，水 1000mL ,pH7.4 7.62. 高氏 1 号培养基 （ 用于放线菌培养 ）可溶性淀粉 20g , KNO 3 1g , NaCI 0.5g , K 2 HPO 4- 3H 2 O 0.5g , MgSO4 7H 2 O 0.5g, , FeSO4 -7H 2 O 0.01g，水 1000mL ,pH7.4 7.6。配制时注意，可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中。3 马丁氏（ Martin ）培 养基 （用于从土壤中分离真菌）K 2 HPO 4 1g , MgSO 4

2、 -7H 2 O 0.5g，蛋白胨 5g，葡萄糖 10g , 1/3000 孟 加拉红水溶液 100mL,水900mL，自然 pH ,121 C 湿热灭菌 30min 。待培养基融化后冷却5560 C时加入链霉素（链霉素含量为 30卩g/mL）.4. 马铃薯培养基 （PDA）（ 用于霉菌或酵母菌培养 ）马铃薯 （ 去皮 ）200g, 蔗糖 （ 或葡萄糖 ） 20g, 水 1000mL配制方法如下 : 将马铃署去皮 , 切成约 2cm 2 的小块 , 放入 1500mL 的烧 杯中煮沸 30min, 注意用玻棒搅拌以防糊底 , 然后用双层纱布过滤 , 取其滤液 加糖 , 再补足至 1000mL,

3、 自然 pH. 霉菌用蔗糖 , 酵母菌用葡萄糖 .5. 察氏培养基 （ 蔗糖硝酸钠培养基 ）（ 用于霉菌培养 ）蔗糖 30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 7H 2 O 0.5g, KCI 0.5g, FeSO4 7H2 O 0.1g, 水 1000mL, pH7.0 7.26. HayfIik 培 养基 （ 用于支原体培养 ）牛心消化液 （ 或浸出液 ）1000mL, 蛋白胨 10g, NaCI 5g, 琼脂 15g, pH7.8 8.0,分装每瓶 70mL, 121 C 湿热灭菌15min,待冷却至 80 C左右，每70mL中加入马血清 20mL,25%

4、 鲜酵母浸出液 10mL, 15 醋酸铊水溶液 2.5mL, 青霉素G 钾盐水溶液 （20 万单位以上 ）0.5mL, 以上混合后倾注平板 . 注意 : 醋酸铊 是极毒的药品 , 需特别注意安全操作 .7 麦氏 （McCLary） 培 养基 （ 醋酸钠培养基 ）葡萄糖 0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏 0.25g ，醋酸钠 0.82g, 琼脂 l.5g ，蒸馏水 lOOmL。溶解后分装试管， 115 C湿热灭菌15min 。8 葡萄糖蛋白胨水培养基 （ 用于 V.P 反应和甲基红试验 ）蛋白胨 0.5g ，葡萄糖 0.5g ， K 2 HPO 4 0.2g ，水 100mL, pH7.

5、2, 1l5 C 湿热灭菌 20min 。9 蛋白胨水培养基 （ 用于吲哚试验 ）蛋白胨 10g, NaCI 5g,水 1000mL ,pH7.2 7.4, 121 C 湿热灭菌 20min。10 糖发酵培养基 （ 用于细菌糖发酵试验 ）蛋白胨 0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ，水 100mL ，溴麝香草酚蓝 （ 质量 分数 1% 水溶液 ） 0.3mL ，糖类 lg 。分别称取蛋白胨和 NaCl 溶于热水中， 调 pH 至 7.4 ，再加入溴麝香草酚蓝 （ 先用少量质量分数 95% 乙醇溶解后， 再加水配成质量分数 1% 水溶液 ） ，加入糖类， 分装试管，

6、 装量 4 5cm 高， 并倒放入一杜氏小管 （ 管口向下，管内充满培养液 ） 。115 C 湿热灭菌20min 。灭菌时注意适当延长煮沸时间，尽量把冷空气排尽以使杜氏小管内不 残存气泡。 常用的糖类， 如葡萄糖、 蔗糖、甘露糖、麦芽糖、 乳糖、半乳糖等 （ 后 两种糖的用量常加大为质量分数 1.5%） 。11. RCM 培 养基 （ 强化梭菌培养基 ） （ 用于厌氧菌培养 ）酵母膏 3g ，牛肉膏 l0g ，蛋白胨 10g ，可溶性淀粉 lg ，葡萄糖 5g, 半胱氨 酸盐酸盐 0.5g ， NaCl 3g ， NaAc 3g, 水 l000mL, pH8.5 ，刃天青 3mg/L, l2l

7、 C 湿热灭菌 30min 。12. TYA 培 养基 （ 用于厌氧菌培养 ）葡萄糖 40g ，牛肉膏 2g ，酵母膏 2g ，胰蛋白胨 （bacto-typetone）6g ，醋酸 铵 3g, KH 2 PO 4 0.5g , MgSO 4 7H 2 O 0.2g , FeSO 4 7H 2 O 0.01g，水 1000mL, pH6.5, 121 C湿热灭菌 30min。13 玉米醪培养基 （ 用于厌氧菌培养 ）玉米粉65g，自来水1000mL，混匀，煮 10min成糊状，自然 pH, 121 C湿 热灭菌 30min 。14 中性红培养基 （ 用于厌氧菌培养 ）葡萄糖 40g ，胰蛋白胨

8、 6g ，酵母膏 2g ，牛肉膏 2g ，醋酸铵 3g ， KH 2 PO4 5g ,中性红 0.2g, MgSO 4 7H 2 O 0.2g , FeSO 4 7H 2 O 0.01g,水 1000ml, pH6.2, 121 C湿热灭菌 30min。15 CaCO3 明胶麦芽汁培养基 （ 用于厌氧菌培养 ）麦芽汁 （6 波美 ）1000mL ，水 1000mL ， CaCO 3 10g, 明胶 10g ，pH6.8,121 C湿热灭菌 30min 。16 BCG 牛乳培养基 （ 用于乳酸发酵 ）（A） 溶液：脱脂乳粉 100g ，水 500mL ，加入质量分数 1.6% 溴甲酚绿 （B.C

9、.G）乙醇溶液 1mL ，80 C 灭菌 20min 。（B） 溶液：酵母膏20min 。10g ，水 500mL ，琼脂 20g , pH6.8, 121 C 湿热灭菌以无菌操作趁热将（A） 、 （B） 溶液混合均匀后倒平板。17 乳酸菌培养基（ 用于乳酸发酵 ）牛肉膏 5g ，酵母膏 5g ，蛋白胨 10g ，葡萄糖 10g ，乳糖 5g, NaCl 5g ，水 1000mL, pH6.8, 121 C湿热灭菌 20min。18 酒精发酵培养基 （ 用于酒精发酵 ）蔗糖 10g, MgSO 4 -7H 2 O 0.5g, NH 4 NO 3 0.5g,质量分数 20% 豆芽汁 2mL,KH

10、 2 PO 4 0.5g ，水 100mL ，自然 pH 。19. 柯索夫培养基 （ 用于钩端螺旋体培养 ）CaCl 0.02g, KH 2 PO优质蛋白胨 0.4g, NaCl 0.7g, KCl 0.02g, Na HCO 3 0.01g4 0.09g, NaH 2 PO 4 0.48g, 蒸馏水 500 mL ，无菌兔血清 40mL 。制法：除兔血清外的其余各成分混合，加热溶解，调pH至7.2, 121 C湿热灭菌 20min ，待冷却后，加入无菌兔血清，制成 8% 血清溶液，然后分装试管（510mL/管）,56 C水浴灭活lh后备用。20 豆芽汁培养基黄豆芽500g，加水1000mL，

11、煮沸lh，过滤后补足水分，121 C湿热灭菌后存放备用，此即质量分数为 50% 的豆芽汁， 用于细菌培养：质量分数 10% 豆芽汁 200mL ，葡萄糖 （ 或蔗糖 ）50g ，水800mL, pH7.2 7.4 。用于霉菌或酵母菌培养： 质量分数 10% 豆芽汁 200mL ，糖 50g ，水 800mL ， 自然 pH 。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。21 LB（Luria Bertani） 培养基 （ 细菌培养，常在分子生物学中应用 ）双蒸馏水 950mL ，胰蛋白胨 l0g, NaCl l0g ，酵母提取物 （bacto- yeast extract）5g ，用 lmol/L NaOH

12、（ 约 l mL） 调节 pH 值至 7.0 ，加双蒸馏水至总 体积为1L ,121 C湿热灭菌 30min。含氨苄青霉素 LB培养基：待LB培养基灭菌后冷至 50 C左右加入抗生素， 至终浓度为 80 100mg/L 。22 复红亚硫酸钠培养基 （ 远藤氏培养基 ） （ 用于水体中大肠菌群测定 ）蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母浸膏 5g ，琼脂 20g ，乳糖 10g, K 2 HPO 4 0.5g ，无水亚硫酸钠 5g, 5% 碱性复红乙醇溶液 20mL ，蒸馏水 1000mL 。制作过程：先将蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和琼脂加入到 900mL 水中，加热 溶解，再加入 K 2

13、PO 4 ，溶解后补充水至 l000mL ，调 pH 至 7.2 7.4 。 随后加入乳糖，混匀溶解后，于115 C湿热灭菌20min。再称取亚硫酸钠至一无菌空试管中，用少许无菌水使其溶解，在水浴中煮沸10min 后，立即滴加于 20mL 质量分数 5% 碱性复红乙醇溶液中，直至深红色转变为淡粉红色为 止。将此混合液全部加入到上述已灭菌的并仍保持融化状态的培养基中，混匀后立即倒平板，待凝固后存放冰箱备用，若颜色由淡红变为深红，则不能再用。23 乳糖蛋白胨半固体培养基 （ 用于水体中大肠菌群测定 ） 蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母膏 5g ，乳糖 10g ，琼脂 5g ，蒸馏水1000

14、mL , pH7.2 7.4，分装试管 （IOmL/ 管）,115 C湿热灭菌 20min。24 乳糖蛋白胨培养液 （ 用于多管发酵法检测水体中大肠菌群 ）蛋白胨 10g ，牛肉膏 3g ，乳糖 5g ， NaCI 5g ，蒸馏水 I000mL ，质量分数1.6% 溴甲酚紫乙醇溶液 ImL 。调 pH 至 7.2 ，分装试管 （I0mL/ 管 ） ，并放 入倒置杜氏小管，I15 C湿热灭菌20min 。25 三倍浓乳糖蛋白胨培养液 （ 用于水体中大肠菌群测定 ）将乳糖蛋白胨培养液中各营养成分以扩大 3 倍加入到 I000mL 水中，制法同 上，分装于放有倒置杜氏小管的试管中， 每管 5mL ，

15、 1I5 C 湿热灭菌 20min 。26 伊红美蓝培养基 （EMB 培养基 ）（ 用于水体中大肠菌群测定和细菌转导 ）蛋白胨 I0g, 乳糖 10g, K 2 HPO 4 2g ，琼脂 25g, 质量分数 2%/ 伊红 Y（ 曙红 ） 水溶液 20mL, 质量分数 0.5% 美蓝 （ 亚甲蓝 ） 水溶液 I3mL ， pH7.4 。制作过程： 先将蛋白胨、 乳糖、 K 2 HPO 4 和琼脂混匀， 加热溶解后， 调 pH 至 7.4, 1I5 C 湿热灭菌 20min ，然后加入已分别灭菌的伊红液和美蓝液，充分混 匀，防止产生气泡。待培养基冷却到 50 C 左右倒平皿。如培养基太热会产生 过

16、多的凝集水， 可在平板凝固后倒置存于冰箱备用。 在细菌转导实验中用半乳糖 代替乳糖，其余成分不变。27 加倍肉汤培养基（ 用于细菌转导)牛肉膏 6g ，蛋白胨20g, NaCL 10g ，水 1000mL, pH7.4 7.6 。28 半固体素琼脂（ 用于细菌转导 ）琼脂1g ，水 100mL, 121 C 湿热灭菌30min 。29 豆饼斜面培养基 （ 用于产蛋白酶霉菌菌株筛选 ）豆饼 100g 加水 5 6 倍，煮出滤汁 100mL ，汁内加入 KH 2 PO 4 质量分 数为 0.1%, MgSO 4 质量分数为 0.05%, （NH 4 ） 2 SO 4 质量分数为 0.05% ，可

17、溶性淀粉质量分数为 2%, pH6 ，琼脂质量分数为 2% 2.5% 。30 酪素培养基 （ 用于蛋白酶菌株筛选 ） 分别配制 A 液和 B 液。A液：称取 Na 2 HPO 4 7H 2 O 1.07g。干酪素4g，加适量蒸馏水，并加热溶解。B 液：称取 KH 2 PO 4 0.36g ，加水溶解。A 、 B 液混合后，加入酪素水解液 0.3 mL, 加琼脂 20g ，最后用蒸馏水定容 至 1000mL 。酪素水解液的配制： 1g 酪蛋白溶于碱性缓冲液中，加入质量分数 1% 的枯草 芽孢杆菌蛋白酶 25mL加水至100mL, 30 C水解lh 。用于配制培养基时，其用量为 1000mL 培养

18、基中加入 100mL 以上水解液。31 细菌基本培养基 （ 用于筛选营养缺陷型 ）Na 2 HPO 4 7H 2 O 1g , MgSO 4 7H 2 O 0.2g ,葡萄糖 5g , NaCI 5g , K 2 HPO 4 Ig，水 lOOOmL, pH7.0, 1I 5 C 湿热灭菌 30min。32. YEPD 培 养基 （ 用于酵母原生质体融合 ）酵母粉 10g, 蛋白胨 20g ，葡萄糖 20g ，蒸馏水 1000mL, pH6.0 ，115 C 湿热灭菌 20min 。33. YEPD 高渗培养基 （ 用于酵母原生质体融合 ）在 YEPD 培养基中加入 0.6moI/L 的 NaC

19、L ，质量分数 3% 琼脂。34. YNB 基本培养基 （ 用于酵母原生质体融合 ）质量分数 0.67% 酵母氮碱基 （YNB, 不含氨基酸， Difco）, 质量分数 2% 葡萄 糖，质量分数 3% 琼脂， pH6.2 。另一配方为： 葡萄糖 10g （NH 4 ） 2 SO 4 1g ，K 2 HPO 4 0.125g , KHPO 4 0.875g, KI O.OOOIg , MgSO 4 -7H 2 O 0.5g, CaCI2 2H 2 O O.lg, NaCI0.1g ，维量元素母液lmL,维生素母液lmL（母液均按常规 配制），水 1000mL, pH5.8 6.0。35. YNB

20、 高渗基本培养基 （ 用于原生质体融合）在 YNB 基本培养基中加入 0.6moI/LNaCI 。36 酚红半固体柱状培养基 （ 用于检查氧与菌生长的关系 ）蛋白胨 1g ，葡萄糖 10g, 玉米浆 10g ，琼脂 7g, 水 1000mL ，pH7.2 。在调好 pH 后，加入质量分数 1.6% 酚红溶液数滴，至培养基变为深红色，分装 于大试管中，装量约为试管高度的 1/2 ，1I5 C 灭菌 20min 。细菌在此培养 基中利用葡萄糖生长产酸， 使酚红从红色变成黄色， 在不同部位生长的细菌， 可 使培养基的相应部位颜色改变。 但注意培养时间太长， 酸可扩散以致不能正确判 断结果。以上各种培养基均可配制成固体或半固体状态， 只需改变琼脂用量即可， 前者质 量分数为1.5%2.0%，后者质量分数为0.3%0.8% 。