《多糖的分子量与分子量分布测定.docx》由会员分享，可在线阅读，更多相关《多糖的分子量与分子量分布测定.docx（2页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程1?目的：建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。2. 依据：中华人民共和国药典2000年版二部。3. 范围：适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。4. 职责：QC 检验员对本标准的实施负责。5. 程序：5.1. 对仪器的一般要求：色谱柱为测多糖专用凝胶柱（按所测样品的分子量大小选择特定排阻范用的凝胶柱）。检测器为示差折光检测器。5.2. 系统适用性试验：按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数（ n） 和供试品在该分析状态下的分配系数（ Kd） 应达到规定的要求。r tR 一 to式中 tR 为供试品峰的保
2、留时间；t（）为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保留时间。tT 为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。5.3. 测定法：5.3.1. 系统校正：根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品（常用的为葡聚糖）分别用流动相制成每lml中约含10mg的标准溶液，分别取上述标准溶 液25 Ml,注入液相色谱仪，记录色谱图。由 GPC专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程：lgMw=a+bt r式中 Mw 为标样的已知重均分子量；tR 为标样的保留时间。5.3.2. 样品测量：取供试品溶液25小注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算分子量：Mn= S RIj/ S (Rlj/Mj)Mw= S ( RljMj) / 工 RhD =M w/M n式中 Mn 为数均分子量；RI?为为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高；Mi 为样品 i 级分的分子量，即供试品在保留时间i 的分子量。5.4. 结果处理：时间 采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各 点的分子量( 片段数据) 和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。