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1、关于pEASY T载体摘自小木虫 科学卫士 论坛发言pEASY-T1、T3 从 Invitrogen 的 pCRII 而来，pEASY-T5 zero 来自 Invitrogen 的 pCR4topo zero ， Invitrogen 已经换了抗生素，不用 Amp + Kan ， 新一代 载体用 Kan + Zeocin （ 博来霉素）。 根据我们院校使用 pEASY-T or B 的结果， 发现两个问题 : 1） 白斑常常只能在一种抗生素中生长，而另一种抗生素中不长， 这些克隆是 M13 不能测序的污染质粒；如果 Kan 里生长，你可以试一试用 T7 去测序，然后将序列拿到 NCBI 网上
2、 Blast 或者与 Transgen 的网页上的所有 载体进行比对（ Alignment ，可以下载 Genecode 的 Sequencher 4 或 5 demo 版本来做比对，非常好用， 100 个序列一眨眼就完成） ，你可能会发现他 们的污染是怎么来的、什么载体污染。Transgen （ 全式金）的 pEASY-T5 克隆区两侧测出来的序列与他们网上提供的序 列是完全不一样的，实际测出来的序列是 pCR4blunt zero （美国英骏公司）的 克隆区序列，不知为什么要隐瞒，可其余序列 1 00%与之相同啊？！另外， pEASY-T5 zero 中，用了 ccdB 基因，可 ccdB
3、 本身在载体的 UV5 Promoter 下不能抑制空载体生长 （蓝斑）， Invitrogen 只是炒了个 ccdB 自杀基因的概念， 买了专利使用权限，有苦说不出，不好向股民交待。不信你拿 Invitrogen 的 pCR4topo zero, 或 pCRblunt zero, 用她的载体 1ul, 用 T4 DNA 连接酶连接 （Vector 1 ul ， 10XT4 buffer 1 ul, H2O 7 ul, T4 DNA ligase 1 ul, 22 度， 2 小 时），然后转化感受态， IPTG + X-gal 显示蓝白斑。你会发现大量蓝斑，因为载 体自连， LacZa 表达了
4、，与 LacZa 融合的 ccdB 也应该表达了，但不能压制空载体(蓝斑菌落)。这种情况下，Invitrogen 还在打什么“ Zero Background 岂不是有些欺骗科学界的意味？ Transgen 的快速克隆试剂盒用的是英骏的第 一代拓扑异构酶技术，里面会有不少于10%的空载体， Invitrogen 用 Hind3 酶切后加识别接头，全式金只是改成 EcoR1 酶切后加接头。所以，我们用全式金 的载体试用装，用 T4 连接酶自连过，居然有很多白斑，知道为什么吗？ 要想 零背景，您可以：1) 不用IPTG和X-Gal,自然就全是白斑，-零背景了；2) Not in-frame wit
5、h LacZa, 让T载体自连也不会与 LacZa的读码框一致；3) Delete LacZa ORF ( did as Tiangen Biotech VT204，there is no LacZaopen reading frame, but UV5 promoter and Lac I binding site are still there. So, if Tiangen s VT204 user instruction is conducted, it s Eco47 IR gene could not be expressed, How does Tiangen call it zero back ground vector? Fraud?).