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1、限制菌检查限制菌检查用的培养基应进行培养基的适应性检查,成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配置的培养基均应检查.菌种试验用菌种的传代次数不得超过5代(从菌种保藏中央获得的冷冻枯燥菌种为第0代),并采用适宜的菌种保藏技术进行保存,以保证试验菌株的生物学特性.大肠埃希菌(Escherichia coli) CMCC(B)44102 或 CVCC1570金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus) CMCC(B)26003 或 CVCC1882乙型副伤寒沙门菌(Salmonella paratyphiB ) CMCC(B)50094铜绿假单胞菌(Pseudomonas aerug
2、inosa) CMCC(B)10104生抱梭菌(Clostridium sporogenes ) CMCC(B)64941 白色念珠球菌(canidia albicans) CMCC(F)98001菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基或营养琼脂培养基上,生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中,培养1824小时；接种白色念珠球菌的新鲜培养物至改进马丁培养基中或改进马丁琼脂培养基上,培养1824小时.用0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml含菌数为10100cfu的菌悬液. 菌悬液在室温下放置应在2小时内使用,假设保存在 28c可在
3、24小时内使用.适应性检查限制菌检查用培养基的适应性检查工程包括促生长水平、抑制水平及指示水平的检查.表1限制菌检查用培养基的促生长水平、抑制水平及指示水平检查限制菌检查/口加小特性试验菌株大肠埃布国胆盐乳糖培养基4-甲基伞形酮葡.萄糖甘酸培养基 曙红亚甲基蓝琼脂培养基或麦康 矶琼月日均加基促生长水平抑制水平促生长水平+指示水平促生长水平+指示水平大肠埃布国金黄色葡萄球菌大肠埃布国大肠埃布国大肠菌群乳糖胆盐发酵培养基乳糖发酵培养基曙红亚甲基蓝琼脂培养基或麦康矶琼月日均加基促生长水平抑制水平促生长水平+指示水平促生长水平+指示水平大肠埃布国金黄色葡萄球菌大肠埃布国大肠埃布国沙门菌营养肉汤培养基四
4、硫磺酸钠凫绿培养基胆盐硫乳琼脂培养基或沙门、志 贺菌属琼脂培养基曙红亚甲基蓝琼脂培养基或麦康矶琼月日均加基三糖铁琼脂培养基促生长水平促生长水平抑制水平促生长水平+指示水平促生长水平+指示水平指示水平乙型副伤寒沙门菌 乙型副伤寒沙门菌 金黄色葡萄球菌乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌乙型副伤寒沙门菌限制菌检查/口加小特性试验菌株铜绿假单胞 菌胆盐乳糖培养基澳化十六烷基二甲俊琼脂培养基绿脓菌素测定用培养基促生长水平抑制水平促生长水平抑制水平促生长水平+指示水平铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌大肠埃布国铜绿假单胞菌金更色葡萄 球菌业硫酸盐肉汤培养基卵黄氯化钠琼脂培养基或甘露醇氯化钠琼脂培养基促生
5、长水平抑制水平促生长水平+指示水平抑制水平金黄色葡萄球菌大肠埃布国金黄色葡萄球菌大肠埃布国梭菌梭菌增菌培养基哥伦比亚琼脂培乔基促生长水平促生长水平生抱梭菌生抱梭菌白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养基沙氏葡.萄糖琼脂培养基念珠菌显色培乔基1%聚山梨酯80-玉米琼脂培养基促生长水平促生长水平+指示水平促生长水平+指示水平抑制水平促生长水平+指示水平白色念珠菌 白色念珠菌 白色念珠菌 大肠埃布国 白色念珠菌液体培养基促生长水平检查分别接种不大于100cfu的试验菌表1于被检培养基和对照培养基中,在相应限制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养.与对照培养基管比拟,被检培养基 管试验菌应生长良好.固体培养
6、基促生长水平检查取试验菌各0.1ml 含菌数50100cfu 分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上,在相应限制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养.被检培养基和对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致.培养基抑制水平检查接种不少于100cfu的试验菌表1于被检培养基中,在相应限制菌检查规定的培养温度计最长时间下培养,试验菌应不得生长.固体培养基指示水平检查取试验菌各0.1ml 含菌数50100cfu 分别涂布于被检培养基和对照培养基平板上,在相应限制菌检查规定的培养温度培养时间下培养.被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反响情况等应与对照培养基一致.液体培养基指示水平检查分别接种不大于100cfu的试验菌表1于被检培养基和对照培养基中,在相应限制菌检查规定的培养温度及最短培养时间下培养.与对照培养基管比拟,被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反响等应与对照培养基一致.限制菌检查方法的验证当建立兽药的微生物限度检查法时, 应进行限制菌检查方法的验证, 以确认所采用的方法适合于 该兽药的限制菌检查.假设兽药的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时,检查方法应重新验证.验证时,依各品种项下微生物限度标准中规定检查的限制菌选择相应验证的菌株,验证大肠菌群检查