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1、神经生长因子对猴基底前脑神经元的保护作用【摘要】 目的观察神经生长因子(NGF)对猴基底前脑神经元 的保护作用，以探讨Alzheimer病的医治方式。方式 将6只老年恒 河猴分为2组，将其脑内的穹隆切断，阻断NGF从大脑皮层至海马 的神经通路，一组动物将能分泌人NGF的细胞微包囊移植到同侧侧 脑室内，另一组移植不能分泌NGF的细胞。结果 术后34周，隔 区免疫组织化学检查显示，对照组隔区低亲和力神经生长因子受体 (p75NGFr)阳性神经元较对侧减少53%,残余细胞呈萎缩状，而实验 组只较对侧减少7%23%；实验组的胆碱乙酰化酶免疫阳性神经元 在隔区内计数比对侧减少。37%,而对照组减少57%
2、75%；实验 组的胆碱能阳性神经元的形态正常，对照组的神经元显示萎缩；实 验组在隔区内可见胆碱能神经纤维及P75NGFr阳性神经纤维的发芽 反映，对照组无此反映。结论 神经生长因子对基底前脑神经元有必 然的保护作用。关键字：神经生长因子神经元痴呆老年性移植Abstract Objective To study the preventive effects of nerve growth factor(NGF) on basal forebrain neurons to explore the therapy for Alzheimer Six aged Rhesus monkeys were
3、divided into two groups (groupA and group B)randomly. NGF transport from cerebral cortex were blocked in all the monkeys. Group A received homopleural intraventricular implants of polymer-encapsulated cells that were modified to secrete NGF. Group B received identical implants of empty Three to four
4、 weeks after operation, the monkeys in the group B displayed extensive reductions in the number of p75NGFr receptor immunoreactive ncurons(53%) and choline acetyltransferase immunoreactive ncurons(57% to 75%)within the septum. The monkeys in group A appeared to be normal size relative to the atrophi
5、c appearance of cholinergic neurons and p75NGFr receptor immunoreactive neurons in the monkeys receiving control NGF could prevent basal forebrain neuron degeneration in aged monkeys.Key words Nerve growth factors Neurons Dementia, prescnilc Transplantation神经病理和神经化学研究表明，老年性痴呆(Alzheimer病) 患者由于脑内神经生长因
6、子(NGF)缺乏，其脑内乙酰胆碱的浓度和合 成明显降低，大脑皮质中出现老年斑，神经原纤维紊乱。由于NGF 不能通过血脑屏障，本实验将能分泌NGF的细胞微包囊植入脑室内， 通过检查移植后脑内基底前脑神经元的数量，来了解和肯定NGF对 基底前脑神经元的保护作用。材料与方式一、实验动物本组选用6只老年雌性恒河猴，年龄在2429岁之间。二、手术方式医学论文网用氯胺酮将动物麻醉后再行异氟烷全身麻醉，气管插管，将头置于定向仪架上固定。取头顶部正 中直切口，长约6 cm,牵开头皮，在右矢状窦旁用电钻磨一骨瓣， 形成一 cmX4 cm大小的骨窗。瓣形切开硬脑膜，翻向中线侧。在手 术显微镜下牵开大脑纵裂，纵行切
7、开肺胀体，从顶部打开侧脑室，在 Moron氏孔水平可见一白色束状纤维即为穹隆，用一钝性小钩将其从 底部钩起，切断。切断穹隆并肯定无出血后，当即将5根装有能分泌 人NGF的小牛肾纤维母细胞瘤细胞的多聚微包囊并排植入同侧侧脑 室内。3只猴接受可分泌人NGF的细胞（实验组），另3只猴接受的移 植细胞不能分泌NGF,作为对照组。然后复置骨瓣，逐层缝合。动 物自然苏醒Llo三、组织学检查术后34周再次将动物麻醉，经原入路开颅，去骨瓣后在 显微镜下掏出微包囊，进行组织学和神经化学检查。开胸，从左心室灌注生理盐水，至右心房流出液清亮后，继续灌注浓度为400 g/L苦 味酸固定液。开颅，完整掏出脑，置于3()
8、() g/L的高糖溶液中，冰箱 内冷冻保留。脑组织块脱水后，冰冻切片40 厚，别离进行尼氏 染色和乙酰胆碱酯酶(AchE)、胆碱乙酰化酶(ChA。、多巴胺3-羟化酶 (D0H)、3-淀粉样酶和低亲和力神经生长因子受体(p75NGFr)的免疫组 织化学染色2，结 果所有猴脑颈叶、顶叶、杏仁核和海马内的切片都可见有大量 的小淀粉样酶免疫阳性的斑块样结构，两组动物的斑块数量无不同。 术后动物脑切片尼氏染色显示，位于侧脑室孔水平可见左侧穹隆完全 被切断，致使同侧海马内的AchE阳性纤维较对侧明显减少。隔区免 疫组织化学检查显示，对照组隔区p75NGFr阳性神经元较对侧减少 53%,残余细胞呈萎缩状，而
9、实验组只较对侧减少7%23%；实验 组的ChAT免疫阳性神经元在隔区内计数比对侧减少0-37%,而对 照组则较对侧减少57%75%。实验组的胆碱能阳性神经元的形态正 常，而对照组的神经元显示萎缩。实验组在隔区内可见有胆碱能神经 纤维及P75NGFr阳性神经纤维的发芽反映，而对照组则无此反映。 有1只猴的1根微包囊被插入脑实质内，其NGF受体能阳性神经纤 维在移植物周围形成网状。虽然这些神经纤维丛来自何处尚不清楚， 但可以肯定的是，这些纤维不是来自交感神经系统，因为这些纤维较 细、迂曲，D3H免疫组织化学染色阴性。另外，在这些神经纤维丛 内，也可见很少量的神经元，但由于其量太少，不可能形成网状。
10、每 只动物脑内移植的细胞囊在移植前每24小时可分泌士ng的人NGF, 从动物脑内掏出后每24小时可分泌NGF ngo讨 论本实验表明，将能分泌人NGF的细胞囊移植到切断穹隆的 老年猴脑室内后，NGF对变性的老年灵长类动物的脑基底前脑神经 元有营养效应和趋化效应。实验用猴的年龄相当于人7587岁，对 照组可见基底前脑的胆碱能神经变性明显，移植能分泌NGF的细胞 后，有效地预防了胆碱能神经元的损伤和变性，还能诱导胆碱能神经 纤维的发芽反映，在最老猴的脑内也可观察到这种转变。结合过去咱 们在年青猴所做的实验结果，可见这种效应在任何年龄的灵长类动物 都是存在的。损伤和移植后，胆碱能神经元比神经生长因子
11、受体能神 经元对这种效应更敏感。由于NGF不能容易地通过血脑屏障，微包囊移植可能成为 一种有效的途径。因为这种微包囊可使具有营养作用的小分子双向通 过，而免疫分子却不能通过，所以异体移植时不用免疫抑制剂也可长 期存活。在移植物周围，只有很轻微的星形细胞增生，而微包囊内的 细胞却存活很好，且分泌功能存在NGF已被用于医治由于胆碱能神经元缺乏所引发的老年性 痴呆病，Olson等4对1例患者静脉注射NGF,发现其记忆能力 有所改善，而其它熟悉能力无改善。咱们以为，在NGF普遍应用于 临床之前，应当认真评价其在灵长类的效应、最佳剂量和给药途径。 咱们曾在年青猴的研究中发现，移植前后微包囊内的细胞分泌能
12、力相 当，但本实验结果表明，移植数周后，微包囊内的细胞分泌能力下降, 而此时仍对基底前脑神经元有影响，说明低水平的NGF即可成功地 预防基底前脑神经元的变性，若是这种保护作用能持续存在，就可用 这种方式来医治老年性痴呆。参考文献1 Williams L, Varon S, Peterson G, ct al. Continuous infusion of nurvc growth factor prevents basal forbrain neuronal death after fimbria formix transection. Proc Natl Acad Sei USA, 1986
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