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1、新型查耳酮衍生物MW-95t实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及机理研究目的:基于前期本课题组抗炎活性筛选结果,进一步研究新型查耳酮衍生物MW-抗炎作用及防治多发性硬化的作用机理,为开发具有自主知识产权新型查耳酮衍生物MW-9候选药物提供科学依据。方法:1.体外研究部分，构建小鼠巨噬细胞株Raw264.7炎症细胞模型和原代巨噬细胞模型，MTT法检测MW-9寸炎症细胞细胞毒性作用；采用Griss方法检测MW-9对炎症细胞模型NO产生的影响;Westernblot法测定MW-9寸NF-kB信号通路磷酸化状态水平。2 .体内实验，采用MOG35-5环导实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE模型,Knoz评分法
2、评价治疗作用，HE染色法观察小鼠脊髓病理损伤程度；ELISA法检测细胞培养上清中IL-17A、IFN-g和TGF-b产生浓度；基因芯片和q-PCR法检测EAE、鼠脊髓组织中细胞因子和趋化因子mRN的表达情况。流式细胞术检测淋巴细胞表面标志（CD25CD44CD11bGr1）及T细胞亚群细胞（Th17、Th1细胞和Treg细胞）比例。3 .体外Th17分化实验，采用免疫磁珠阴性选择分选CD4+T细胞细胞。在Th17极化条件下，诱导初始T细胞向Th17细胞分化，流式细胞术检测Th17细胞（IL-17A）表达水平。4 果:1.体外实验结果显示，新型查耳酮衍生物MW-9著才制NO的产生，其CC50/s
3、ub环口IC50分另I为11.24mg/ml和5.37mg/ml,Westernblot法检测发现MW-电物干预显著抑制NF-kB磷酸化水平。2.与模型组比较，新型查耳酮衍生物MW-瓠著P1低EAE、鼠的临床评分，改善脊髓病灶的病理损伤和炎症浸润;ELISA法检测结果显示，MW-9药物干预组小鼠淋巴细胞培养上清IFN-g和IL-17A低于模型组,其中IL-17A差异具有显著性意义(P<0.05)流式细胞术结果显示，MW-9药物干预显著降低CD11b+GU+/sup冲性粒细月6比例(P<0.05)，显著下调Th17细胞(CD4+IL-17A+)表达水平(P<0.05)，然而对T
4、h1细胞(CD4+IFN-g(10)和Treg细胞(CD4+Foxp3+比例无明显的影响(P>0.05)。3 .基因芯片结果显示，于模型组相比，MW-9干预组小鼠脊髓组织中的细胞因子以及趋化因子都有明显的下调；荧光定量PCR佥证结果显示，于模型组相比,MW-9干预组小鼠脊髓组织的炎症因子和趋化因子的表达低于模型组小鼠，其中转录因子STAT1STAT及趋化因子CCR差异具有显著性意义(P<0.05)。4 .MW-9药物干预显著抑制初始T细胞向炎症性Th17细胞分化，差异有显著性意义(P<0.05)。结论:1.新型查耳酮衍生物MW-9M有显著的抗炎作用，具作用机制可能与抑制NF-kB通路磷酸化有关。2.新型查耳酮衍生物MW-9M有显著抗多发性硬化作用，其作用机制可能与抑制炎症性Th17细胞分化和下调趋化因子的表达有关。