第六章红细胞血型1(教案).docx

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1、昆明医科大学教案课程名称：法医物证学授课对象：法医学专业五年级本科生一、 讲授题目：第一节概论；第二节ABOto型二、讲授时数：3学时三、 讲授人：景强 职称：教授四、本课目的、要求1 .掌握血型抗原、抗体的分类及特点；2 .熟悉红细胞凝集过程及促进因素；3 .掌握ABO血型系统的普通表型；4 .熟悉ABO血型系统的主要变异体；5 .了解ABO血型抗原的发育及其生成途径；6 .了解ABH血型物质在人体内的分布情况；7 . 了解ABO血型的人群分布；8 .掌握ABO血型的检测方法。五、本章节重点、难点重点1 .血型抗原、抗体的分类及特点2 .ABO血型系统的普通表型；3 .ABO血型系统的主要变

2、异体;4 .ABO血型的检测方法。难点：1 .ABO血型系统的主要亚型；2 .ABO血型系统的主要变异体;3 .ABO血型系统的遗传；4 .ABO血型抗原的生成途径。六、教学方法：传统式、提问式、直观教学式、自学式等方法结合。七、使用教具：多媒体八、思考题:1 .ABO血型系统的普通表型是哪些？依据什么分型?2 .ABO血型系统有哪些主要亚型和主要变异体？3 .什么是CIS AB,获得性B?4 .ABO血型抗体有何特点？5 .ABH血型物质的区别与联系。6 .可以根据新生儿的ABOfc型进行亲子鉴定吗？7 .ABO血型如何检测？8 .根据性质的不同，血型抗原、抗体如何分类？9 .红细胞凝集的促

3、进因素有哪些？九：要求参考书目及章节:人类血型遗传学，赵桐茂编著，科学出版社出版十、讲课内容及时数安排时间：5min多媒体幻灯片时间： 15min多媒体幻灯片第一节概论引言人类的血液都是一样的吗？有无种类之分？有无个体特异性？这 些问题，在今天看来，是不难回答的；但在人类进入本世纪以前，这 些问题却未能找到满意的答案。在发现血型之前的输血治疗实践中， 有的病人输入血液后反应良好，有的却由此而送掉了性命。即使在有 血缘关系的同一家庭成员之间输血， 也不时导致这种不幸事故的发生。 这究竟是怎么一回事呢？于是乎有人开始着手人血的异同研究，当抽 取不同人的血液进行混合时，发现有些人的血液相互混合后融合

4、得很 好，而有些人的血液相互混合后却出现了凝集现象。由此看来，人类 的血液并不完全相同，有着类型的区别。(Blood could also sortpeople into several kinds.)血型(blood group)是人类血液由遗传控制的个体性状之一，是 血液的遗传标记(genetic marker)。红细胞血型是指红细胞表面抗原 由遗传所决定的个体差异(RBC blood group is decided by the red blood cells surface antigen between two individuals.)。由于血型具有个体特异性和终身不变的特征，作

5、为人类遗传标记在法医学个 体识别和亲子鉴定具有重要的意义。血型在临床输血、器官移植及人 类学研究中也是重要的指标。一、 血型的命名传统的红细胞血型命名没有统一规定，由发现者根据具体情况命名，如ABO系统是依据抗原的种类确定名称，Rh系统是根据免疫动 物命名，Lewis、Duffy等是根据首次发现含有抗体的患者的姓氏命名 的。国际输血学会(ISBT)经过20多年的努力，建议对红细胞血型 系统使用数字命名二、红细胞血型抗原 (RBC blood group antigens)红细胞膜由蛋白质、多糖与脂质组成，含 50%勺蛋白质，40%勺脂 质，不足10%勺糖。以蛋白质与脂质作为载体，多糖作为侧链。

6、脂质中的磷脂 (60%-50%、胆固醇(25%-30%和糖鞘月旨(5%-10%构成 双层类脂结构。蛋白质中有嵌入双层类脂的膜蛋白和存在于膜内面的“骨架蛋白” (specrin 及 actin )。红细胞血型抗原根据化学结构可分为3类：1 .ABH Lewis与P抗原等是糖脂质(Glucolipid ),型特异性决定于 寡糖的结构；Rh及Kell抗原等是膜内镶嵌蛋白，型特异性决定于蛋 白质的结构；2 .MN与Ss抗原分别为血型糖蛋白(glycophorin ) A(PAS1及2)及 血型糖蛋白B (PAS3,是膜内中性唾液酸糖蛋白，可被蛋白水解酶或 神经氨酸酶破坏，型特异性与蛋白和寡糖的结构均有

7、关；3 .分泌型个体的体液与分泌液中的 A、B H及Lewis抗原等属于水 溶性糖蛋白(Water-soluble glycoprotein) ,型特异性决定于寡糖的 结构。类似的血型抗原还广泛存在于哺乳类、两栖类、鱼类、植物果实 和种子以及某些微生物中。如高等的灵长类动物(如猩猩、长臂猿以 及猴)有类似人类的A、B物质，大肠杆菌O86有类B型物质；肺炎 双球菌14型含类A物质。时间： 15min多媒体幻灯片三、红细胞血型抗体 (RBC blood group antibody)抗体属于血清蛋白的丫球蛋白中，统称为免疫球蛋白 (immunoglobulin , Ig),分为 IgG、IgM、I

8、gA、IgD 及 IgE 5 大类。 免疫球蛋白的基本结构由4条多肽链组成，2条轻链，2条重链，一 条重链与一条轻链由二硫键连结，二条重链间也由二硫键连结，形成 Y字型。4条多肽链的氨基末端是高度可变区，为抗原结合部位，其余 部分为恒定区，决定了抗体蛋白自身性质。血型抗体根据产生的机制可分为“天然”抗体和“免疫”抗体两 类。天然抗体(Natural Antibody)指的是没有经过确切的抗原刺激而存在于人血清中的抗体，也称作“规则”抗体 (This antibody exists in humanserum even there has no exact antigenic stimulati

9、on.) 。 如人体内的抗A抗体与抗B抗体即属于此类，分别存在于 B型和A 型人血清中。免疫抗体(Immunity Resistant)是指有明确抗原刺激或经过人工免疫而产生的抗体，也称作“不规则”抗体，如抗M抗体等(This antibody exists in human serum when there has exact antigenic stimulation. )。血型抗体根据血清学反应特点不同又分为“寒冷”抗体与“温暖”抗 体。“寒冷”抗体(Cold antibodies)的最适反应温度为420 C ,可在盐水介质中与红细胞发生 凝集反应(Agglutination React

10、ion) ,故 又称盐水抗体或完全抗体(Complete Antibody)，一般多为IgM类。“温 暖”抗体(Warm antibodies) 的最适反应温度为37 C,需要加入其 他试剂才可出现可见的凝集反应，因而又称为不完全抗体(Incomplet e Antibody)。不完全抗体在盐水中虽不出现凝集，但已与红细胞上的 抗原决定簇发生了特异性结合，此时再加入完全抗体也不会出现凝集反应，因其阻断了后者与红细胞的结合，所以也称遮断抗体或封闭抗体(Blocking Antibody )。时间： 15min四、红细胞血型检测 (RBC blood group testing )多媒体幻灯片红细

11、胞血型的检测通常应用凝集反应(agglutination ),即在颗 粒性抗原悬液中加入对应的抗体，抗体与抗原决定族特异结合，使颗 粒性抗原集聚成团块的现象。红细胞与对应的抗体发生的凝集反应称 作红细胞凝集反应。(一)红细胞的凝集反应(agglutination )可以分为两个步骤，即红细胞抗原与抗体的特异性结合(致敏)和结合了抗体的红细胞形成网状团块(凝集)。(Agglutination can be Divided into two steps, one step is Red blood cell antigen and antibody combined specificity:Sen

12、sitization, second step isthe coalition form lumps of mesh: Agglutination) 1.致敏 Sensitization抗体的特异性结合部位与抗原决定族结构互补，由离子间相反电 荷、氢键、疏水键等的作用而发生结合。此种结合是可逆的，增加抗 原与抗体的浓度、维持合适的pH值、降低反应介质的离子强度等可增 加抗原-抗体复合物的产量。2.凝集 Agglutination致敏的红细胞是否产生凝集，取决于抗体的性质、抗原决定族的 部位与数目及红细胞动电位的大小。IgM抗体由5个亚单位构成，理 论上有10个抗原结合部位，两个抗原结合部位间的

13、最大距离为 30 nm 可以在普通的介质(如盐水)中使红细胞发生凝集。IgG抗体有2个抗原结合部位，其间距离为14 nm通常在普通的介质可使红细胞致敏， 但难以产生凝集现象。ABO抗原在红细胞上数量丰富且其抗原决定族为糖脂的寡糖部 位，突出于红细胞的表面，使IgG抗体在普通的介质中引发红细胞的 凝集反应。Rh抗原为膜内镶嵌蛋白，位于细胞膜内且在红细胞上抗原 数量较少，盐水介质中IgG类抗体难以引发红细胞凝集反应。在正常情况下，红细胞膜表面的 N-乙酰-神经氨酸残基电离，使 红细胞表面携带负电荷。由于同性相斥，使红细胞在介质中相互分离， 呈悬浮状态，细胞间距保持约为 25nm。红细胞膜表面携带的

14、负电荷可 吸引介质中的正离子，在红细胞周围形成一正离子团，由红细胞表面的负电荷与正离子团外自由正离子间形成的电位差称为红细胞的动电 位(zeta potential )。动电位的大小取决于红细胞表面荷负电荷的程 度与介质中的离子浓度，也决定了红细胞间距，与凝集反应的发生有 密切关系。时间： 15min（二）红细胞凝集反应的促进因素Red cell contributing factors of agglutination多媒体幻灯片1.缩小红细胞的间距（Narrow the distance between red blood cells）通过降低红细胞的动电位和物理加压的方法可以缩小红细胞

15、的间距。降低红细胞的动电位：蛋白水解酶ProteolyticEnzyme如胰蛋白酶、菠箜蛋白酶等）或神经氨酸酶处理红细胞，裂解红细胞表面的神经氨酸，减小 红细胞表面的负电荷数量，达到降低红细胞的动电位的目的； 反应体系中加 牛血清白蛋白BSA（Bovine Serum Albumin）,可 降低介质中离子的介电常数并中和红细胞表面的神经氨酸，达到降低红细胞动电位的目的； 低离子强度溶液Negative ion solution （如7%0萄糖溶液、 10姗糖溶液等）作为反应介质，可以减少红细胞吸引的阳离 子数量，达到降低红细胞的动电位的目的。离心Centrifuge 含有红细胞和抗体的反应溶液

16、经12000r/min离心3min,离心力对致敏红细胞施加物理压力，可减小红细胞 的间距，促进凝集。2.在抗体间搭桥 Bridge between antibodies应用抗球蛋白实验法，在含有红细胞和抗体的反应溶液中加 入与抗体对应的第二抗体（抗球蛋白抗体），连接已致敏红细胞上 的抗体，间接使红细胞形成网状团块（凝集）。时间：5min抗人球蛋白试验又称Coombs式验，是检测不完全抗体的抗原 抗体反应的经典方法。间接抗球蛋白试验则用于检测红细胞在体 外与抗体的反应，用以测定某些红细胞的血型、鉴定不规则抗体 及作输血前的配型等。间接抗球蛋白试验的原理为待分型检测的 红细胞与抗血清反应，相应血型

17、抗体使红细胞致敏。然后加入抗 人球蛋白血清，抗人球蛋白抗体与致敏红细胞上的血型抗体发生 抗原抗体反应，如同在致敏红细胞间搭桥，使红细胞出现可见 凝集，证明待测红细胞上具有与抗血型抗体相对应的抗原。阴性 结果则证明待测红细胞上没有与血型抗体相对应的抗原，综合红 细胞的反应结果，判断红细胞的血型。十一、课堂总结：血型是人类血液由遗传控制的个体性状之一，是血液的遗传标记。 红细胞血型是指红细胞表面抗原由遗传所决定的个体差异。由于血型具 有个体特异性和终身不变的特征，作为人类遗传标记在法医学个体识别 和亲子鉴定具有重要的意义。血型抗原和抗体根据结构、性质不同可以 不同种类，分布于人体不同组织器官。AB

18、O型由于检测方法简单，可以测定 ABHS原和抗A、抗B抗体, 两种结果互相印证，可减少错判的机会；ABH血型物质抗原性强、稳定, 在体内的广泛分布。因此，ABO型在临床医学、法医学、人类学等领 域均具有重要意义。通过本章节的学习，同学们要求掌握ABO血型的分型、主要亚型、变异体，ABHW质的生成、遗传，ABO血型系统抗原、抗 体的特性与分布，检测方法，并为今后其它血型系统的学习打下良好基 础。十二、课后预习内容安排H抗原与分泌型十三、课后辅导内容的准备1、血型抗原、抗体分类；2、红细胞凝集的促进因素；3、ABOB型物质生成的遗传途径；4、ABHB质的结构差异与联系；5、ABOB型的主要亚型及主要变异体的遗传基础;6、ABHM型物质的人体分布及结构差异；