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1、生物化学与分子生物学专业优秀论文 人泛素基因原核表达载体的构建、表达及鉴定关键词：泛素基因 基因克隆 原核表达 酶活性 分子生物学 mRNA序列摘要：泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。
2、本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-U
3、b。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。正文内容 泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白
4、的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(
5、Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，
6、这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭
7、桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，
8、转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分
9、子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-
10、1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以
11、非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯
12、化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预
13、期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。
14、本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-U
15、b。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、
16、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列
17、设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表
18、达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目
19、的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ec
20、oli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技
21、术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，
22、利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方
23、式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一
24、步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白
25、相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。泛素(Ubiquitin，Ub)是一个由76个氨基酸组成的高度保守的多肽链。它在细胞中以非共价键方式或通过共价键与蛋白质牢固结合。主要功能是参与蛋白质降解，通过介导蛋白降解、改变蛋白的细胞定位、改变蛋白的酶活性、改变蛋白与蛋白的相互作用等方式影响其所结合蛋白的功能与活性。而蛋白质降解异常又与许多疾病的发生密切相关。随着医学分子生物学技术的进步，人们已经从分子机制上认识和讨论它们之间的关系。近年来泛素及其类似物已经成为了分子生物学的研究热点之一。 本试验根据
26、GenBank中已发表的人泛素基因mRNA序列，借助Primer5.0设计了六对寡核苷酸引物，运用引物搭桥法合成目的序列Ub。在克隆出人泛素基因(Ub)的基础上，构建原核表达载体pGEX-4T-Ub并对Ub基因进行了原核表达和纯化，为进一步研究其功能奠定了基础。研究结果如下： 1根据GenBank(登陆号：M17524)中公布的人泛素基因(Ub)序列设计特异性引物，用引物搭桥法进行PCR扩增，获得228bp的DNA片段。 2利用定向克隆的方法，以pGEX-4T-1为载体，利用BamH 和Sal 酶切位点，将纯化的基因Ub克隆至pGEX-4T-1中，构建了原核表达载体pGEX-4T-Ub。经酶切
27、鉴定筛选出阳性克隆，进一步的序列分析确认了其中Ub序列的正确性。 3将原核表达质粒pGEX-4T-Ub，转化至Ecoli BL21(DE3)pLysS感受态细胞中，经IPTG诱导后SDS-PAGE分析，在约35 kD处出现了与预期目的蛋白相一致的外源蛋白带。 4Western blot分析重组蛋白，在目的蛋白相应位置出现了特异性的染色条带，这表明所表达的重组蛋白是人泛素蛋白。特别提醒：正文内容由PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 。如还不能显示，可以联系我q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服
28、务周到，包您通过。 垐垯櫃换烫梯葺铑?endstreamendobj2x滌甸?*U躆跦?l,墀VGi?o嫅#4K錶c&伣嘰呐q虻U節鉡c姥?BL偤7.X哖?驳疗g讍l/5蔍7sQIvs疖?SJ%JvI雓1傀7鑥伍妰遠Y魥 靤/W鐼E霯q聊湝ECu?knb?.:?澍羈7坋:;俐hEan2P6?!八帊/=櫕貵Wp?U脞姦%?qj?颬儼噃IV壂G邊?V忣鏕裚?靈模?慞擭昄X?;萕屄P,枍U霩R嚵蝆RC珵墂锬襵)焟滫?ob#噡滴覇羘幥d?讫E鼠U閥?甅Y_HT軷糣Q渿拜&应U躨?淊Nv祌|揜JJ9B9?_+.|莭?桌O姺?踱:R?截d襛jLk崌?謹6m図?b2頔?YU?拰泅?E稛擈?cH B?pR枣渹
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