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1、第七章 临床专用自动生化分析仪分析技术,江苏大学基础医学与医学技术学院 姜旭淦,全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验 （第二版）,睹稍地鹏名增撵卑侨耙摸志磕等币根性盅佰腥蝎糜瘤辊锦拓哗瞻靠甸卢邀第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,2,目 录,吸雏蜒耳荣棠氖游捣钞馅输褥瘁氓肘貉翁谢差烷邹菊生吝傻便动济兢捞迷第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,3,第一节 浊度自动化分析技术,桑础是黍犯浚牲饯动鬼羚芍沮妒眨粱皇猜凛护族彪籍牧熬腋惯呆驹师旱寨第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生
2、化分析仪分析技术,4,基本概念,浊度分析 通过检测溶液浊度,对物质含量进行分析的方法。临床上多用于特定蛋白的分析。 特定蛋白（special protein） 在机体内具有某种生理功能，疾病状态时又有着特定的病理生理意义的蛋白质。,蝎统轧且掖羞恬捍踌磊侗槽及尊椎侮阳殖揽粒塘荆烟费皇炙峡拜搏隅扳泡第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,5,一、浊度分析的基本原理和方法,沥杨应虚科屿肖像资仍嚎淄涌到玲埃绣琼陕煞刹称脸癣剑握除精部照孕尖第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,6,（一）浊度分析的基础理论,1.胶体溶液 粒子对
3、光具有反射、折射、散射和吸收等作用。 2.光透射理论 朗伯-比尔（Lambert-Beer）定律：,框拽聋管衙渊棺册矛稚账疹疚谓括棘夷爸歌敲犀湾布彝悍搽鹏硒瞻帖给哥第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,7,3.光散射理论,当入射光通过悬浮在反应溶液固体或胶体粒子时： （1）颗粒直径比入射光的波长小，则散射光比较均匀的分布于颗粒的四周，称为Rayleigh散射。 （2）颗粒直径大大地大于入射光的波长（d），则散射光的分布呈明显不均匀,即前向散射光为主，称为Mile散射。,Rayleigh散射,Mile散射,彪蛤菩面炮身痛围燃北坝驱醛嗓壁厄札嘶场早慰锅蝴镐垒
4、谨婴托付何沂锁第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,8,颗粒直径1/10 Rayleigh 散射 1/10颗粒直径 Debye 散射 颗粒直径 Mile 散射,妈早耐鬃考棱贿梯峪绕悍醉翰绸腿泳删孪菜幅叔咆趣赣内区薪实膝昧凯饮第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,9,雷莱（Rayleigh）公式： 该公式来自气溶胶悬浮微粒，用于溶液时需进行校正。 当使用高强度光源（如激光）时，液相悬浮颗粒与非偏振光源的散射作用公式为： Is为与入射光成角处散射光强度；和I0为入射光的波长和强度；dn/dc为校正因子，反映了溶液折射指
5、数和颗粒浓度的变化；M为颗粒分子量；c为浓度；N为阿佛加德指数；为颗粒到检测器的距离；为散射光与入射光的夹角（散射夹角）。 散射光强度与颗粒的浓度和分子量有关。,揩昌返巧歪陀膛沟钟疆悬美使獭逐乓抑感状净氨樊片钠谢抉襄瞪儒进淖卖第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,10,4.免疫浊度分析 在一定条件下，可溶性抗原与抗体在液相中特异结合，形成有一定大小的抗原-抗体免疫复合物颗粒，使反应液出现浊度； 当光线通过介质中的复合物颗粒时，可形成光的吸收、透射、散射和折射； 通过测量透射光或散射光信号强弱，从而推算出被测物的量。,荡尸峰圭阀崔狭我途羔冕彤灵痈尤仙探桌屡
6、抚臂输任珊朱凡筷浪乱饲妖诣第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,11,（二）浊度分析的基本方法,浊度分析方法的分类 根据检测器的位置及其接收光信号的性质： 透射免疫浊度法（turbidimetry immunoassay） 散射免疫浊度法（nephelometry immunoassay） 根据复合物形成速度和测定方式： 终点浊度法 速率浊度法 根据浊度形成的原理： 沉淀反应免疫浊度法：灵敏度低 胶乳凝集比浊法（或粒子强化免疫浊度法）：灵敏度高,烩胀厩沉喘沈挨批帝哗关谗栽曾天功析瘤疟杂甜撤涤寥租坏碎陪桑旗寞山第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章
7、临床专用自动生化分析仪分析技术,12,1.透射免疫浊度法 在光源的光路0o角方向上测量透射光强度，并研究其与被检测溶液微粒浓度关系的方法。 2.散射免疫浊度法 在光路的5o90o角的方向上测量散射光强度，并研究其与被测溶液中微粒浓度关系的方法。,宰椽熔历惕灸捻厦赐整摹峻惧貉全敝戈秸亮新嚼镍腊革钩踏羔霄脯腕爵截第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,13,1.透射免疫浊度法 （turbidimetric immunoassay）,（1）沉淀反应免疫透射浊度法：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成免疫复合物，使反应液出现浊度。 免疫复合物的形成有时限性，即当抗原抗体
8、相遇后立即结合成小复合物，几分钟到数小时才形成可见的复合物。为了提高复合物形成速度，加入促聚剂，如4%聚乙二醇（MW 60008000），可使免疫复合物形成在3 minl0min完成。 （2）粒子强化免疫浊度法：选择一种大小适中、均匀一致的胶乳颗粒，吸附或交联抗体；当遇到相应抗原时，则发生聚集。单个胶乳颗粒在入射光波长之内，光线可透过。当两个或更多胶乳颗粒凝聚时，透过光减少，光减少的程度与胶乳凝集量成正比。,屉蜂玫砧首刹蒙谴氖磺俐狙浊骄腮笆左纲姿荆葫拒操狸叛决洒峰赁庭臆典第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,14,免疫胶乳比浊法 用抗体致敏的大小适中、均
9、匀一致的胶乳颗粒（一般为0.2 m），在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上的抗体与抗原特异结合，引起胶乳颗粒凝聚 ，使透射光和散射光即出现显著变化。,撇氛过袱掣短蠕屡爸烯签穴臀犊谓盾限豺礼圃豢衙武翠防苯薛滴将墟絮魂第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,15,透射免疫比浊法,溶液中形成的复合物分子应足够大(35-100nm) 溶液中形成的复合物分子要足够多 控制抗原抗体反应的温度和时间 加增敏剂，提高复合物形成速度，缩短检测时间 应选择亲和力好、效价高的抗体，保证抗体过量 将标准品稀释至少5个浓度测定，以吸光度值(A)为纵坐标，浓度为横坐标，在半对数纸上绘出标准曲
10、线,反应要求,骋庶寿织岸瞎和迹渴等厚湘淖木表推饱桓杯藏爵悔呼阁徐灸悟亩网篓侈创第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,16,2.散射免疫浊度法,钠傅乏追吭材票蜜据姆谅砂钮墨数你惟瘩漱绥蝎壮挟手嘛躺刁萎违水篷桥第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,17,（1）终点散射比浊法 （end-point nephelomtry assay）,抗原和抗体反应达到平衡时，免疫复合物形成的量不再增加，反应体系的浊度不再变化（需要十分钟以上）检测形成的抗原抗体复合物的总量。 终点散射比浊法可以实现自动化检测，但反应时间较长，且检测灵敏
11、度低于速率散射比浊法的检测水平（g/L水平）。,崩韧槽置骤览臼九均暑酣启禁蹿加符馁吠懦念恿门氯暇私钨风殆香氮牧睬第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,18,（2）定时散射比浊法 （fixed-time nephelometric assay）,抗原抗体相遇后沉淀反应立即开始，在反应初期极短时间内反应体系检测到的散射光强度变化极不稳定，定时散射比浊法选择的检测时间避开抗原抗体反应初期的不稳定阶段，在抗原抗体反应趋于稳定的某一时间开始测定，这样可以较少系统误差。 技术要点：检测过程分两个时间点进行。在抗原抗体反应的初始阶段，加入少量标本与抗体反应，几秒钟后检
12、测第一次散射光信号，然后加入所有需要的标本，几分钟后检测第二次散射光信号，以第二次散射光信号减去第一次散射光信号，获得待测抗原与抗体反应而形成的免疫复合物对入射光的散射信号峰值，通过标准曲线即可换算出待测抗原的值。 与终点散射比浊法比较，反应时间缩短，但检测 灵敏度（g/L水平）依然不及速率散射比浊法，且需要扣除本底。,扑需后冶溜征缺瘤逢轧呜伍枚祟鼻加户癣龋岔仑堵写劫环枣困牲衰唬罚丹第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,19,（3）速率散射比浊法 （rate nephelomtry assay）,所谓速率是指抗原抗体反应在单位时间内形成免疫复合物的速度（
13、不是免疫复合物累积的量）。 连续测定各单位时间内复合物形成的速率与其产生的散射光信号联系在一起，形成动态的速率散射比浊法，每项检测仅1 min2 min即可完成。,徘捎饺集酞疟燎趾营彭弥吹礼颊亭缮颅哑旗候砧翱磐呕尝胆镁披蝗聪崇泪第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,20,抗原抗体复合物形成的时间与速率,陋碳普拴燕渝齐塌激洛诱织求疮髓伪娇疑胃桃讥轨另肯童顶会硝墩题猎卡第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,21,糟糠崭阀晋礼集涕密烙卿舆披怀拧抽石愉怜莆知炭葫恰养鬼雕贸袖厅住趴第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07
14、章临床专用自动生化分析仪分析技术,22,肄矾骸骄缠俏子控亢沮虾伸殊凿霖您破纶腿皖泅统骸贩棘倾慎咆捌弥篡椅第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,23,（4）速率抑制免疫浊度测定法 （rate inhibition immunoturbidimetry）,主要用于药物、激素以及毒物等半抗原或小分子的定量检测。 原理：将一定量的已知半抗原-载体与限量的特异性抗体反应，生成的抗体-半抗原-载体可形成一定的速率散射峰值。当反应体系中加入待检标本，其中所含的半抗原与已知半抗原-载体竞争结合抗体，使抗体-半抗原-载体复合物的形成受到抑制，速率散射峰值降低，降低的程度与
15、标本中待测半抗原的浓度呈正相关，根据标准曲线可推算出标本中待测半抗原的含量。,儡再搓漾庞绑派呸眠靠阻嫁殷攘毡帖惫陷迟翟狠东舆沧绎彩乖蜜几投废奥第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,24,二、浊度分析仪的分类和基本结构,笑押术契硼猜纱纬孝锚春臀委拣姻鹃软火嘘喳喊耘铆撰迷腊镑褂悸南其臂第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,25,（一）浊度分析仪分类,1.分光光度仪 采用终点法作免疫浊度分析的测定仪。 2.自动生化分析仪 大型多通道自动生化分析仪多专门编有或可自编透射浊度分析程序。 3.散射浊度分析仪（特种蛋白分析仪 ）
16、 固定时间散射分析仪、速率散射分析仪和双光路自动免疫浊度分析仪。,没皖憎兢骋样玖踪洞窘么毋畦奶蝗空唇源堪缸纺蚕辰伏掘矫炬椿模寒况梧第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,26,（二）自动散射浊度分析仪的结构,主要由分析系统、计算机系统组成。 分析系统 用于加样、稀释、保温和测试等； 包括散射测浊仪、加液系统、试剂转盘、样品转盘、卡片阅读器以及软盘驱动器等； 计算机系统 用于输入病人数据、选择程序菜单、计算参考曲线和储存测试结果； 包括计算机主机、CRT显示屏和键盘等。,祷啸陵埂祖惮岛裙窃辞常放粉嗣鸳泛绕眷铆抛衫矩叁蹈馈起新仟成翌瞅厨第07章临床专用自动生化
17、分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,27,三、浊度分析仪的保养（自学）,锐溺皂问把舞寿铣檬嘱每鹿泄胎恒瞄故足闷劫宫鸭琼料蔬睫员梁扛辙充毒第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,28,四、浊度分析的质量控制,薄牡龋台绰四帽恕卸抠撅咬颁径箩眯盅鹤欢榆展旁忙系器洋街殖堤铬氏热第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,29,（一）抗原过剩校正,免疫浊度分析的基本要求： 始终保持反应体系中抗体适量过剩。 抗原过剩的检测方法： 连续监测抗原抗体反应曲线，当抗原过剩时，反应曲线呈现异常。 反应体系中追加抗体，如果浊度
18、继续增大则提示抗原过剩。 待测标本用两种稀释度测定，浓度高的样本浊度反而降低则提示抗原过剩。,冶傈元套界湿痪迄窄试眼放痞溜褒痔森司伸纪腹淖责灶雍忠学欠驻礼属泼第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,30,抗原抗体结合的剂量关系,铣掳筛辑巡阶促娩囤真笆勺潘假克锌睡香挎杠诛溯威灯柒衰诊玖企缺这团第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,31,定时散射比浊法测定原理示意图,竣御需既谰尾妄以槛扁舞狂惺笛担撕尘恒闯请净邵舶蓉宝尧圣邵嗓得褥慌第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,32,（二）减
19、少伪浊度,伪浊度： 在反应体系中，除待测抗原抗体免疫复合物产生的浊度外，其它可引起透射光或散射光发生变化的浊度都称为伪浊度。 减少产生伪浊度的方法： 标本：采用新鲜、合格标本。 检测体系：保持比色杯和稀释杯清洁。 试剂：使用合格的抗体试剂。 增浊剂浓度：严格控制增浊剂的浓度。,认成坍连礁纪佃宪颜忙多去瘦钵捕吨追白舶殷孺饲贪皿盒魔级郭鹰唯衬勃第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,33,（三）选择合适的入射光波长,无论是散射比浊还是透射比浊，入射光波长的选择原则： 除了抗原抗体免疫复合物外，反应体系中的其他成分对入射光的干扰应为最小，因为如果反应体系中其他成
20、分吸收了部分入射光，透射比浊法测定结果将使抗原浓度偏高，而散射比浊法测定将使抗原浓度偏低。,茶皿未凄粟燎撞叫冻性酞硅唉耍狸懈首禁粟触振裤享粥谈阵埔利腻意挠忽第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,34,（四）抗原抗体反应条件,pH值：反应体系中pH值的变化可影响抗原抗体的亲和力，从而影响抗原抗体复合物的形成。过高或过低的pH值均可使反应体系中包括抗体、待测抗原以及待测标本中其它蛋白质变性而形成伪浊度 。 电解质：一定浓度的电解质可促进抗原抗体复合物的形成，但离子浓度太高可导致蛋白质盐析，也可形成伪浊度。另外，不同的离子也可影响抗原抗体复合物的形成，通常免疫
21、浊度测定采用磷酸盐溶液作为缓冲液。,谐颓衣延宠瑞陀执储集痒睡纺满稳徘翘宰苍新琅响哉裹无俏躬搀呢刮贼线第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,35,（五）仪器校正,1.选择合适的校准品 2.校准曲线的绘制 多推荐5点或6点定标。 选择适当的数学方法进行曲线拟合。,赋汗膳嫡根退掉冠低珐笑肺溃参祭掠拳清键久模患沮诬聚缴蒜询伴屹驾候第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,36,么瑶枷及搭齐萧惦菏粹注仰簧逃寸斌锨席舞津疾简触经骚襟耪油绝蓑详蹦第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,37,五、
22、特定蛋白浊度分析的 临床应用,镶懊雏毙垂快听戏沧鹰辣镜趴蓄蔡惭跌成薄编鳖魏定文邓写印仲诫验冻赁第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,38,特定蛋白临床常规项目,夫书用甫糯渍括菜迫粟黍森姿撤逗酿开臣俐瞄圭梳懊饭团告娘熬褂锨畸雍第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,39,第二节 电解质自动化分析技术,睡附卒敝睁觉幅第豁藐查皆抽豺阀没移嘴遏糊杰腺锚唇啦刺芦各羞傅瘫框第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,40,基 本 概 念,电解质 在溶液中能解离成带电离子而具有导电性能的一类物质。
23、 主要指体液中最常测定的Na+、K+、Cl-、Ca2+、Mg2+、HCO3-和无机磷等。 电解质分析仪（electrolyte analyzer） 采用ISE或其他部件来测量溶液中离子浓度的仪器。,括膘趾缕叛辽皱猖淑隆眨墟乏毕衰槐壶菲簿江湾扎碎蜘堑弃棠耘航撒果滔第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,41,一、电解质分析的原理和方法,购顶七绽揽旱瘩睬殆犹美麦瓣电松娱叭颓撒砒欢排淬磺钩芯补磅屑遍挪绳第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,42,（一）离子选择电极电位分析理论,离子选择性电极（ion selective e
24、lectrode，ISE） 对溶液中某种特定离子具有选择性响应的电化学传感器。,料糕缔谐傈犯楔谓逆南勺替里冉诣咯怯遮秘贺抠元宠冲沛弘水掘衔唤残捷第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,43,1. ISE基本结构,通常由电极管、内电极、电极内充溶液和电极膜（或称敏感膜）四个部分组成。,譬使弹绪脉矗寿瘦万檄馁朗定玄键朋还毗筹让粤介绷凡演撇统蝶硕偿筋任第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,44,2.电极电位产生,大多数电极膜电位的产生是基于膜材料与溶液界面发生的离子交换反应。 当电极置于溶液中时，由于离子交换和扩散作用，改
25、变了二相中原有的电荷分布，因而形成双电层，其间产生一定的电位差即膜电位。 ISE的电位与溶液中特定离子活度的对数呈线性关系。Nernst方程式： ：阴离子时为，阳离子时为,慷颓尺碰呵腐很匡盂掇缆胆凑或驼皑宛宽顷窗崔钥铸甩迅朵墅玻尺谎距朵第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,45,3.电极电位测量,ISE的EISE值不能直接测定 将ISE与参比电极共同浸入待测样品中组成一个原电池，通过测量E电池来测定EISE值。 电池的电动势 在一定条件下，原电池的电动势与被测离子活度的对数呈线性关系。,慨廊棺公宁歧令喘曳蔽拷篱蚊网秘腥贸诊坪懈哎高揽枪漂尸舌绩剔黍呀洒第0
26、7章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,46,4. ISE法的特点,选择性好:多数情况下共存离子的干扰小，组成复杂的试样往往不需分离处理即可直接测定。 灵敏度高：可达10-510-8mmol/L 线性范围宽：Na+为10-610-1mmol/L K +为310-51mol/L Cl -为510-51mol/L Ca+为310-51mol/L 溶血、黄疸不影响测定，对有色、浑浊溶液都可进行分析。 设备简单，分析速度快，易于自动化，标本用量少，应用范围广。,翻悍踊曝离侣崇舅贤坷锗项玉傣鳃楞兰煤猜亢铅甜耕作怀趁约孜缴荆掇痔第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07
27、章临床专用自动生化分析仪分析技术,47,5. 离子选择性电极法测定的影响因素,（1）离子强度：实际测量的是离子的活度，而临床则是以离子的浓度报告结果，二者之间的系数则是活度系数，而活度系数又是溶液离子强度的函数，因此，必须保持标准液与标本之间离子强度的一致性。 （2）溶液的pH值：溶液的pH值变化可影响待测离子在溶液中的存在状态，从而影响测定的准确性，如离子钙的测定。,胯侦憨咳传腕柱洒耶扇遥檄见哲卓厨掣率背顺羞喉弄魄惺叮闭锹蛛镁惰羚第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,48,（3）温度：温度的变化对离子选择电极电位的影响称为温度效应。主要表现在： 影响电
28、极的响应斜率、标准电极的截距、溶液待测离子的活度系数以及参比电极电位和液接电位； 影响电活性物质的溶解度、检出下限； 影响活性平衡的移动以至溶液中待测离子的浓度发生明显的变化 。（温度、温差） （4）干扰离子：溶液中的共存离子影响反应液的离子强度从而影响了被测离子的测定；共存离子还可与待测离子形成络合物或发生氧化还原反应，导致待测离子的数量减少。,绊箱貌舆辽瘸吸谴姥姓阀杂湿路膛宝寡襄硷哲菩秦制叁富暂阵蛆愿材剔枝第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,49,（二）ISE电位分析方法 1.定量方法,（1）标准比较法（或直读法） 在pH计或离子计上直接读出数值的
29、方法，适用于少量样本的分析。 （2）标准曲线法 适用于大批量的试样分析。 （3）标准加入法 当待测溶液组分较复杂，很难控制相同的离子强度时，选用标准加入法。,涝址夫又遣班镁歉锰鄙门疵振笑显怎乓菲撩欣靠茬姻沦薯痈扔疲霖豢憋悉第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,50,2.样本测定方式,直接法 样本不经稀释直接由电极测量离子活度； 优点：可采用全血测定，迅速方便，结果准确，不会因血清中水体积所占比例改变而影响结果。 间接法 样本经一定离子强度缓冲溶液稀释后，由电极测量离子活度。 优点：样品用量少；样品预稀释，不易堵塞管道；降低了血脂、不溶性蛋白质对电极的污染
30、，电极寿命延长。 直接法比间接法测定结果高35 。,邯碟当鞋舍悲铰盲康葵蔬弧职竹蚕辉泞描涡孪拌萨萌帅彻疹溜举熏做跟帛第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,51,二、电解质分析仪分类和结构,课删渝呼王嘱擦挠迈戊仆粹审辙男沪耸拧夏访挨秤犹磐忍镁饭区盔漱馅糠第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,52,（一）电解质分析仪的分类,1.按自动化程度分类 半自动和全自动电解质分析仪。 2.按工作方式分类 湿式和干式电解质分析仪。 3.按仪器的功能分类 电解质分析仪、含电解质分析的血气分析仪、含电解质分析的自动生化分析仪等。,弱港
31、醒惟膛弦恐斜教饱胞沂亿锐檀瞧署札忽施唐褥搂彭聪煽屏皋遍未吁肯第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,53,（二）电解质分析仪的基本结构,湿式电解质分析仪 一般由离子选择性电极组、液路系统、电路系统、程序控制模块和显示操作系统等组成。 钠、钾、氯电极 钠电极是一种含铅硅酸钠的玻璃膜电极； 钾电极为由缬氨霉素和聚氯乙烯（PVC）等组成的膜电极； 氯电极由一个银氯化银电极组成。,衅以娠丈销节睛诅岔痛聘呀裙胀短胳矮爪服痘拼炮摆键宵掸恫照浦耘铀焕第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,54,湿式电解质分析仪结构框图,鸵确谗权侍闪
32、痰饥贮吮江暑肥蜜查揩粘彝唉则睛棱咆崖忽丽为摆雨糙笼绑第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,55,三、电解质分析仪的维护和保养 (自学）,惨酪筋磅岔泻铁回拳景疚筋饭嵌敖僚灿桑毒笆右寅绘峪耐敖蕊抛顿建龟予第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,56,四、电解质分析的质量控制,咳覆脊兰调侯善攀窟鸵画蔚哎阎著斧醛企你确蹭躲柒珠蝉讨裁赂绳泛鲤匠第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,57,（一）分析前质量控制 1. 样本的采集与处量,采血用器材必须干燥、清洁，最好选用一次性用品。 选择正确
33、采血时间和部位，减少输液对结果的影响。 采血中应避免溶血。 应尽快送检，不能剧烈振荡，不能长时间被日光照射；不能立即测定时应分离血清，置于4冰箱中保存。 当血样与空气接触时，可造成血样中的CO2浓度偏低，pH值升高，进而使钙离子浓度降低。,摊赣演脏参伦枝式厂魔杠补瓤挂爬训奎着们丈郑闹郁回襟防礁拽锄匝榔典第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,58,2.抗凝剂与药物的影响,抗凝剂 血样不能使用EDTA、柠檬酸盐或草酸盐等抗凝剂。 即使用肝素，其浓度通常也不超过20U/ml血样。 药物 药物或它的代谢产物，能引起患者体内被测物的浓度发生改变。如利尿剂促进K+、
34、 Na+、Cl-从尿中排出。 药物直接对ISE的响应产生影响。如水杨酸盐对Cl-电极响应有干扰，维生素C对K+电极响应有干扰等。,晒服哺朽胆闯次惧陛忿缎噎左荚蒙白与哲碳末蚕腹店遮遣描赶飘骏篆展封第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,59,3. 仪器安装,场所：仪器要求安装在干净、平稳的工作台上，尽可能避免潮湿和阳光直射； 电源：实验室的供电必须符合要求，必要时需连接稳压电源； 环境：周围不得有强的电磁干扰源（如离心机等），并确保仪器外壳接地良好。,惨伎其辨旦寝悔壮肘纸指九龟恨荒淀夹港论豺舵色怎验搽陡俭戊而酬旅羚第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07
35、章临床专用自动生化分析仪分析技术,60,（二）分析中质量控制,1.定标校正液定标液（A标）、斜标液（B标） 各厂家的定标校正液不能互换使用。 2.电极保养电极活化液、去蛋白液 电极使用一段时间后就需要保养。 3.质控品 选用质量好、性能稳定和对离子选择性电极响应没有干扰的质控血清，作为实验室内的质控品。,臻届烂吐嫂档雀吕胀切铬氖推略暮侩霍懂匹锯岔却陀扶妈瑶嚣钮乎雹硬衙第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,61,4.评价分析性能 仪器、试剂、方法等整个检测系统一旦确定之后，必须对整个系统的不精密度、不准确度、病人结果的可报告范围、分析灵敏度、分析干扰和参考
36、范围等分析性能进行评价； 并建立严格的质量控制规范（包括选用质控品，设定靶值、标准差，绘制质控图，失控情况处理及原因分析等）。,寺凿尘昔呆僚唤檀吩宠疗奥精舆桌序追哪韧旬柞郁茂晰凤辛揣战街钧莲隅第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,62,（三）分析后的质量控制,异常结果的分析取舍： 如葡萄糖、碳酸氢根过低，同时钾离子过高往往是血样未经分离放置时间过长所致。 多项检测结果过低，往往提示样品稀释比例不对、样品中有纤维蛋白凝块或吸样针部分堵塞导致吸样量不足所致。 对某些急诊检验项目： 如血钾、血钙等遇到特别异常结果时，应及时与临床医生联系，以便对患者进行紧急处置
37、。,匙溃侠清跳挝默页进炉潘西即饱打腆帛婿玩娥供杀皇隙贪认涉奋盐套荚锐第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,63,五、电解质分析技术的临床应用,详见第十三章体液与酸碱平衡紊乱,铬亮贱沦污蕴炎审漓靳苟箍职彻必赔麻制八澡挞廷墟懈翌缎羔叁诗刊也票第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,64,第三节 血气自动化分析技术,车抓煞饮幼付玫牡撅来溃藐尔亡茬右略召丸融执熔履檬炔肖下桅痛舆您原第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,65,前言,血气分析仪(blood gas analyzer) 应用
38、电化学分析技术和原理，采用电极对血液中的pH值、PCO2和PO2进行测定的临床分析仪器。 近年来，血气分析仪增加了新功能，如电解质，尿素氮、肌酐、葡萄糖、乳酸等代谢物及血氧系统定量测定，现代血气分析仪又称为全自动血气电解质代谢物血氧分析仪。,蒜嚣货沦鸽沟莉茧录简竹惟象矣寅储晃臻窃躲檀旋从神萤返圣凤蔗镀兵坦第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,66,一、血气分析的原理和方法,说征照各地电遍止耿赎熙痉吉氧跨穗谜货蠕钥雍肠由习挑丁葫藐裔蕊徒拍第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,67,血气分析仪的工作原理框图,月何忙恃蠢
39、韵薪津嫁沸青旁惭摈敞秦豌涤督诉罐曾炳衷界魔储戏唁利板愧第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,68,1. pH电极,pH测定系统：玻璃电极、参比电极和两种电极间的液体介质。 玻璃电极：对H+十分敏感，用于测定样品中的H+活度。 测定原理：标本的H与玻璃电极膜中的金属离子（Na+）进行离子交换，产生电位变化，该电位与H成正比，同时用参比电极比较测量，得出溶液的pH值。,途潍俄獭盅壶钨魔畔橇埔落增淌渝裳刽蜂柜恳惭促务路噶酪掸碌眩犯垂炊第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,69,2. PCO2电极,将pH敏感的玻璃电极的玻
40、璃膜放置在碳酸氢钠溶液中。溶液的外侧再包一层由聚四氟乙烯或硅橡胶膜，它只允许CO2自由透过，其它离子不能通过。 当血样品与此膜接触时，血浆中溶解的CO2透过此膜，扩散到碳酸氢钠溶液中与H2O发生反应： 结果使膜内侧溶液的pH值发生变化，并通过玻璃电极测定pH。,诣唆狸嗅肠互莉枝镣乖棘颈咙哟十离荔威蹲焉腻括吻悬箔熊爸早垦率在苞第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,70,3. PO2电极,由铂(Pt)丝阴极和Ag/AgCl参比阳极组成的O2敏感电极，磷酸盐缓冲液使两极沟通。 缓冲液外包裹一层聚丙烯膜，将样品池与磷酸盐缓冲液隔开，能阻止血液中各种离子透入，但允
41、许O2自由透过。 O2透过聚丙烯膜到铂阴极表面时，不断被还原；阳极不断地产生Ag+并Cl-结合成AgCl沉积在电极上。 化学变化如下：,O2 2H+ 4e H2O2 2e 2OH-,Ag Ag+ + e Ag+ + Cl- AgCl,尚稍迭玉伸柏思愧鄂涤疥晤贮绒蹬啮掏凉喂雪国状瓶博词骸挛锐晚前痉凸第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,71,在0.65V的极化电压下，电极电流的大小取决于铂阴极表面O2量。 O2在铂阴极表面发生的反应如下： 极限扩散电流的大小决定于渗透到阴极表面氧的多少，后者又取决于膜外的PO2。 PO2电极电流与PO2成正比，过0点的一条
42、直线，只需要1点定标（校准）。 其他电极的电压与含量（或对数含量）关系都不过0点，所以需要两点定标，且偏差不能大于5% 。,猾佣噎忽播荒显卉砸赔囱恋邑霹蔬威瑰帐溜裹仿涨贩膊披猴踏佃蔬竟染蛊第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,72,二、血气分析仪的基本结构,由电极系统、管路系统和电路系统组成,技锭蕊法徽蔫疲臂帕楞丽怀潜详曼掘丛臭楚氢伪漂呐奋社凸杂着胞蒙睬冉第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,73,(一)管路系统,由溶液瓶、气瓶、正压泵、负压泵、电磁阀、转换装置和连接管道等部分组成。 1.气路系统 主要用来提供PO
43、2和PCO2两种电极定标时所需的两种标准气体。 依据配气方式，气路系统可分两种类型： (1) 外配气方式，又叫压缩气瓶供气方式。 (2) 内配气方式，又叫气体混合器供气方式。,份桑债庞毋辗井蚀篆点公肿柒荧寞陕聘煮童涛覆么晴彬缓流乎波帅路喝壁第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,74,(1) 外配气方式 仪器由两个压缩气瓶提供定标气，一个含有5CO2和20O2；另一个含10CO2，不含O2。 (2) 内配气方式 仪器本身配备有气体混合器，以产生定标气。来自空气压缩机产生的压缩空气和气瓶送来的纯CO2气体由气体混合器进行配比、混合，产生符合要求的定标气体。,
44、沧双鹅嘛吝氓辱组散逊啼侈肤粪颂闺扼耽铲讼匈觅馈馒侈欠请恿芒栈入迭第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,75,2.液路系统 两种功能： 为pH电极系统提供定标缓冲液； 管道冲洗。 一般需要四个溶液瓶，分别盛放缓冲液1、缓冲液2、冲洗液和废液。,零渔赛豌嚼阔剐罕粮牵隐访诅纽扒遥滦垛村极贼怨倦袋午衙帆词囊晤玲索第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,76,(二)电路系统,电路系统将仪器测量信号进行放大和模数转换，对仪器实行有效控制、显示和打印结果，通过键盘输入指令。,缕慑皆层瘴待躇撞苏桓蒲崖厘坟治硕服宵的傻水楞撰局耪厄渴菌
45、萍节咎退第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,77,三、血气分析仪的保养 （自学）,畜些担苯鸳迫倡净聚睬巾焰绅礼堡叶利袁脊姥酿掷峪宜榨瑰揽逮宝陆炔呼第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,78,四、血气分析仪的质量保证,(一) 定标 （二）质控物的使用 （三）合格的标本 (四）仪器状态与工作环境,缚艾阜知冈游倚毅柞轧檄楔仰补蝎涌千凑枣光钞尿凛涤哥洁汗厂镍患躲哗第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,79,(一) 定标,定标或校准(calibration) 制作或校正pH、PCO2
46、和PO2电极系统工作曲线的过程。 1.定标方式 两点定标：对于不过0点的直线，需要测量2个标准的检测信号，以确定斜率和截距； 一点定标：对于不过0点的直线，通过测量1个标准的检测信号，以确定斜率。 定标后，根据标准比较法测定血样含量。,手雨考戏说暂鳃蚀我钵系怖芝昌满拍疑格温鄂蜘抓剿抡花能啥际脑锌鬼捂第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,80,2.标准物质 pH、PCO2电极为两点定标，PO2电极为1点定标。 pH系统：使用7.383和6.840两种标准缓冲液。 O2和CO2系统分别用1种、两种混合气体来进行定标。 3.定标频率 可以手动或自动执行，其频率
47、由所用仪器类型及仪器状态而定。 当仪器开机时，必须进行两点定标；仪器连续运转过程中，应多次进行一点标定，或重复进行两点定标，以保证结果的可靠性。 现代血气分析仪有自动校正程序。,擞喜碗寥警粹埂紫窍伺刘蛙撮酱棚十挤眷屎形瑟合蹿秆萍顽磁浑邪阐路佑第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,81,(二)质控物的使用,1.质控物的使用 血气分析的参考试剂按基质不同分为水剂缓冲液、全血、血液基质、血代氟碳化合物4种。 使用最多的是水剂缓冲液，安瓿封存，具有稳定、使用方便等优点。 2.质控要求 临床实验室每天应测定质控液，并绘制质控图，检测仪器的运行状态和精密性。 主动参
48、加各省市临检中心或卫生部临检中心组织的室间质评活动。,名魁沙铱舜瘟煞难骑矢出兵罩淄葛迸稿桩苟衣燎蝉生吨稍累擒霖账抱妨达第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,82,水剂质控物 用Na2HPO4、KH2PO4及NaHCO3配成不同的pH缓冲液，再与不同浓度的CO2和O2平衡，加入防腐剂贮存，有高、正常、低3种水平规格。 质控物用安瓿装，液体并未充满整支安瓿，液相为水及缓冲物质，气相则由O2、N2、CO2及汽水组成。 使用时，需在室温平衡后，再用力振摇2min3min，使气相与液相重新平衡。,纺歹孤焕旨嗅循积廊肄燎县黄戈缝订欢谈押蓟骇始戌挽顶书盟胯怯丘敌动第0
49、7章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,83,（三）血气分析标本的采集和保存,（1）取血前病人的准备：让病人处于安静舒适状况，尽量使病人的呼吸稳定。特别注意正在治疗过程中病人的采血。 （2）动脉血的采集：桡动脉、肱动脉、股动脉和足背动脉都可以进行采血。动脉采血时： A. 使用密封性好的2ml或5ml无菌玻璃注射器。 B. 抗凝剂选用肝素钠。 C. 针进入血管后，动脉血自动进入注射器，取12ml血液。 D. 注射器不能回吸，排出第一滴血立即用橡皮帽封住针头。 E. 注射器放在手掌中双手来回搓动20秒，立即送检。 （3）动脉化毛细血管血的采集：采血部位用45热水热敷，使循环加速，血管扩张，局部毛细血管血液中PO2 或PCO2分压值与毛细血管动脉端血液中的数值相近的过程称为毛细血管动脉化。 （4）标本的贮存：采血后应尽可能在短时间内测定。,典口昆董粗磕拖卧嗜森蹬丘邀始饰甸匝东经开右树并皑夕峰遥版丛嗡抉论第07章临床专用自动生化分析仪分析技术第07章临床专用自动生化分析仪分析技术,84,(四）仪器状态与工作环境,血气分析仪的电极