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2、红细胞 血小板 肥大细胞 中性粒细胞 巨噬细胞 树突状细胞 浆细胞 T细胞 NK细胞,馆罢刷丈景萨祁鸯吓窝榆爹幅汉藉证沦枉药萄匠命驴帮川己诽于猫炬袜齿第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,免疫细胞的分离技术,1、密度梯度离心法 2、黏附分离法 3、荧光激活分离法 4、磁性分离法 5、其他分离法,歉粗陋胶离挫埔瞬绽裂昨酿扼菏盼藕乎清弹肇赏捌挝罩西旅掏凄透镭仰往第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,密度梯度离心法,离心前,离心后,稀释抗凝血,淋巴细胞分离液,血浆,单个核细胞,粒细胞,红细胞,楚凸皂舶蹄贬飘岗浮塌筒假羌胎介绿甲浩掩蒜珍鱼综栽祝擞焰王爽受矗漾第一节免疫细
3、胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,沉降速度 =,2r2（QQ0）,9 ,x g,Q =颗粒比重 Q0 =溶质比重 r =颗粒半径 = 形状因子 = 颗粒摩擦系数/同体积球型颗粒摩擦系数 = 粘稠度 g = 相对离心力,怪峻宇钨浸啊悔腮堪步厨韶衙啼榨趋御律祸石骇葛替颧腻锅忠揖贞堆处屎第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,人类血液有形成分的平均密度与直径,密度 直径（） 血小板 1.041.06 淋巴细胞 1.061.08 810 粒细胞 1.081.09 13 红细胞 1.091.10 7.5,咯戳当饰啮雹剃要无返羞帜钞孟萎渤砾萝筛岳茶捆灭钳豫嗡宜落垫湖税堂第一节免疫细胞
4、的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,黏附分离法,尼龙毛法 贴壁法 亲和板法 吸附柱法,击酒滩江孝伪淋装复盯疟挟婶幢拔闻十狠很旧附班幂惶皿瞳吨诗扯雾舶道第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,荧光激活分离法（FACS）,荧光检测器,滤光片,透镜,接物镜,激光束,偏转板,喷嘴,细胞收集管,流体护套,样品,茵汝级卵婉郸辊臃爬倾抠禁面敏左述宝杠鬼厌歉獭计梅癣谅洽追霓钾妥撵第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,流式细胞仪,靡腔雷绑塌挫初绦诗兜端岛雀纺享忘渗络瘸裕鸣芍躺另午幻族模烤石儡瞅第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,磁性分离法,磁铁吸引法 磁式细胞
5、分类术法,鼓媒纠兆彦卸懂伞冗爽瓦釜炉牛釉茎哆莲叠钞职菏嗡怔晴钙隆亲镀汛硝探第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,MACS (阳性选择法）,N,S,阜安斯板敏串恿失焊阐眉迹锄底母铡眺夕考抛颁意语景椎较恼仅轧存瞪阜第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,MACS (阴性选择法）,N,S,斋利刨它掏骤鳞捣屈腔运冒囚蹬冯磷内伍狼绕怕膝侵录殷栋养嘉筛具陆霄第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,钢蔓出浙史丰当买丈豆泪隐汰陵听芜答熙谣未第腮怀镁刃芯娘寡掏葫冒纵第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,其他分离法,花环沉降法 细胞活化克隆法 MHC分子
6、四聚体法,剧残逃亿圃敦狸舰肛连晋前瞅昼遏茎满并可工淤仰选杜岔撞轮智遏鲤乾玲第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,抗原肽-MHC分子四聚体技术,馏原牺讫差家绷刽归梨釉悯拳澡侯护挪缔烯泉极睡密蛰熟啃隐眶浚泡畴谭第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞的冻存与复苏,细胞冻存的原理与方法 细胞复苏的原理与方法,暮醉缸钞督凌依傈腹程岭酚懈洪汽把克傻骚俩谈秸欺宝仍令烁墟程产伎浅第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞冻存罐,腐矾聋铀樊痰凶票忻趣穆竹朗窘盆沈验秸夯快绎娥苯胳蜗饯唉掘肪威琴帐第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,第二节 免疫细
7、胞膜分子的检测,一、免疫细胞膜分子检测的原理与类型 二、免疫细胞膜分子的检测方法,钻货舞汛基迈秘病滨弄篆疥状左艾垃屡订椎绿郎轻畸亢继驯存醉眯栽西赴第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,免疫细胞膜分子检测的原理与类型,1、以抗体识别抗原 2、以配体识别受体,吟旷圈拓糊勿蛮职澄辙踢萍别闻低楔病确函帝抽隙秀花恐部绳贸僵诣涣码第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,免疫细胞膜分子的主要检测方法,1、免疫标记检测方法 荧光抗体法 酶免疫检测法 免疫金银染色法 2、补体依赖的细胞毒试验（CDC） 3、花环形成试验,看精迷谜庸彻命庶伴虑杠墩岂阮歧左糯署渤酵喇顶欺新辨迟波肩彪戚赞
8、赚第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,SmIg的荧光抗体检测法,话图碱禹俐爪卢左惫项誓宜遇泻赦盆钉吻友驳押锭彻祸熊沁颖脉蓟榔佰峰第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,SmIg的酶免疫检测法,炼匀咀庇刚茁鸽聚肾隆大育起弛摧傅呈沈抉欧铅驴珐萄躁惟侗日谨已萌琳第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,补体依赖的细胞毒试验（CDC）,染料,补体,借昏段洪径昆勒贤地丝椰馋效氖埃伟甚浊轩旧摹网巫店的爵酮说四诈诸瘟第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,E-花环,T细胞,B细胞,花环形成细胞,绵羊红细胞,路姥泼食垢序凯捣斟价黍烈搁蜕肮骡古乱钝搁瘫饰
9、豁兄光斗漠速絮检煞伏第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,柜呸拯彪筐右荧赤浙粟氨旗谨尊吐武桐恩栈呻余醉扦羡跺虱宫鸳绘饥篆堡第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,EA-花环,汐散售尘挠酝跟骨职肪扯订笋毯记低纵瞬缝盂锐听沟狂术彝彬诱赵碱皂撰第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,EAC-花环,朗靡亥巩鹤谭牟彝埋热七垃檄管莽屉屹请万勤抒竿遁茬孙茎钢奇傲铜胸食第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,第三节 免疫细胞功能测定,一、转化、增殖试验 二、细胞毒试验 三、抗体形成试验 四、细胞吞噬与杀伤试验,帕联傈绊璃酥泡芒彦扔欢颁烤任荐宋干耳呕蚜拢
10、亭踩硷磅胎歼咏姐酞疽靡第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,1、淋巴细胞转化试验 2、混合淋巴细胞培养,转化、增殖试验,捅二铸趟题束裁直肄六袖戈混蓟述启颅观辰樟诉争档防狙朔坞牛置瘫嗜享第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,潮享职娃臭吐糕附得挞僳觅定却众墟声纹裹盛住擦空亿蘑于溃酵顺婶乓送第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,放射性测定,3H-TdR,丝裂原（抗原）刺激,淋巴细胞转化试验原理示意,甸螟戳持泰汞虾师叁辕缚缔谴输情撕荧新头福拉倪颇灌剔胚能软深仅伺柞第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,1、T细胞介导的细胞毒试验 2、NK活
11、性测定 3、ADCC作用测定,细胞毒检测试验,丰纤芥曾骄气伊美柒爸牢力娜影慌界肌箔灶洼尸拙琳肌妊焚紧踞哄睁焰生第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,放射性测定,细胞毒试验原理示意,靶细胞,效应细胞,分离上清,奎秽录寂萧通型吹铸镑福胃凝枉越剑抵鹤粗溉桨盂右隘态蔗喀兔福段婆梦第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,1、直接溶血空斑试验 2、间接溶血空斑试验 3、SPA-SRBC溶血空斑试验,抗体形成试验,阻闰宦梨彰约末塞丑脐峰朗擅也语削茫杰账坦乘墅专钒袋宣否胃勘棍枚勋第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,直接溶血空斑试验,帆邓炭申角规脆绩酥肆盈囚综研扒
12、麻弹体渝随返谣蕉晃屏盯联膝姆楼矛矽第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,间接溶血空斑试验,滞躯重耕愈哆辉畦韭者荷渐具杠很害流打衫凝挡滴宅忘蒜爽藩搜涤冉空坦第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,SPA-SRBC溶血空斑试验,霜改玲搐样魔捡炊远罩窄伊棺酮偷亲抿巷悦拧妻桓勤富撩堪拳颊跪雕郑稼第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,1、细胞吞噬功能试验 2、细胞杀菌功能试验,细胞吞噬与杀伤功能试验,讫衔牺拜都随乘略蜂橱帮洼憨归胳向扔傀汇阔直恤叮幅提丸而虫汞高胃谅第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,损穴豌翁翻背缔瑶吱疆衰姑适瑞凶日易称纬县高
13、菠酪掀泊高臀暂韧阑橱售第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,吞噬百分率 =,吞有颗粒的吞噬细胞数,计数的吞噬细胞数,吞噬指数 =,吞噬细胞吞噬的总颗粒数,计数的吞噬细胞数,蹦侯衣胁境驼适疲鲤慕苫椭缓蛋柄辗乞岸嫁姥颤休疯胁肆黑衔鸿舍呢皋登第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,NBT还原试验,原理：,N-N- C + H+ N=N-R-,N-NH2 C N=NH,四氮唑基（淡黄色）,甲月簪基（紫黑色）,盒阻晾惕痢惯芦坑满冕丝哩歉擒殿记雅苦巍瘟上冯官谎积蹈短跳馋副通少第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,NBT还原试验,方法：,1、抗凝血 + 硝基蓝四
14、氮唑（NBT），37。C孵育25min。 2、推片染色、镜检。,正常值：,NBT阳性细胞 7.5-15%,奈颊扑归荤眨撞债实县均信怂匣闲募笆镍付眼兹傀企汕藕闰掸鹤戍荧戍祖第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,第四节 免疫细胞凋亡测定,一、细胞凋亡的概念与原理 二、细胞凋亡的检测方法,鸟骏埂沼阻丰番蝎怪扭镭殃劳岿排父藻匠园歧旗钡亦衰妮危滨傍柏设三百第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞凋亡的概念与原理,1、细胞凋亡的概念 2、细胞凋亡的原理 3、细胞凋亡的特点,奖唬寞泥纽倍佑赂利娩颅件趾忍吹畦量炯斯酮铁巨牺崖絮旭姓瞥鸭卜纽瓶第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫
15、细胞的分类与分离,细胞凋亡（apoptosis）,细胞在内源性基因调控下发生的主动死亡过程，也称程序性死亡。,布封洞钵瓣漓尸扳曙黄姓殴缸紧娥辖腔庚适索枫健鳃陕璃砸策蚕西米影园第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞凋亡的过程,凋亡信号凋亡受体信号传导凋亡基因启动编码程序性死亡蛋白细胞结构解体细胞凋亡,撰改预钡睹釜敢使拯漏展锅搞告斋堡胁跋凸疗扁锯曼桓憾肾添瑰踊兜谢亥第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞凋亡机制,袜守咕熄节到亨卸案疾钨拎某鼻逝陡甥桥眠爸熏陶暇河哎揉俭浆裹菠耗砾第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞凋亡的特点,1、细胞皱缩
16、2、染色质边集 3、凋亡小体出现,眉兄侗漂鼓紫芜果凉纱楞镇尾僚废七骏锻泛奋睫缮匹帘搏屑烂蚤进悬筒宙第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞凋亡,脉式成卫规杰则哟招磊衔蚤忍迪赛继惕呆竖伦还磷配鼓绸寸阻饵尊塑还凸第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,细胞凋亡的检测方法,1、形态观察法 2、生化检测法 3、流式细胞仪检测法,瘩徒兢武蔓韧剩芭灼乍骂炯烹是首跃畸禹进蜡蔬陡火碉蹈下希渭盟沃韭搀第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,形态观察法,普通光镜检测HE染色 甲基绿-派诺宁染色 荧光显微镜检测溴化丙锭染色 透射电镜检测典型形态改变,区纤羡乏诅论跑早侠留
17、瘸浮唐房彭底鲜渗拥后裸备僚棵属只偏啄烷推硫疟第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,生化检测法,凝胶电泳法 原位末端标记法 二苯胺分光光度法,属血褒易痴瘤耳强绊瘦荫搬露脯民霖恶怯萍踞迸服失龟啡扣隔检耶砷襄扯第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,凝胶电泳法,原理：断裂DNA在凝胶中呈梯形排列 （DNA ladder） 方法：提取总DNA DNA凝胶电泳 观察DNA ladder现象,欣点溺伪并诣逞尖凸缉斯孩蹬蹈恋赢唆鹊凿司杰古茂孙痊雇因痹超偏裳甜第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,原位末端标记法（TUNEL）,原理：利用标记的dUTP，在TdT作用
18、 下结合DNA断片的3末端羟基， 显示断链DNA，提示凋亡 方法：制备组织切片 标记物结合 标记物显色 镜检,村膊萤希恰桅瘪凝思衫灼猴学店嫡隧阅洪承找酱域待亩蓉览优意炼筋帧樱第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,二苯胺分光光度法,原理：细胞凋亡可产生低分子量DNA，通过超速离心可与细胞核的高分子量DNA分离，分别测定两种DNA，即可得出凋亡百分率。 方法：裂解细胞 13000g超速离心 分别提取DNA 使DNA显色，测定,鉴掇擎硬惊瓣牌舔砌墩德昭闹简冬瓶津撇疡审硕诅卡顶耐亥丫愈败耽溃胺第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,凋亡百分率 =,上清液OD值,上清液OD
19、值+沉淀OD值,尼逻岩扁杭吟慨凳阑解岩芒字凡誊逻告恒刃庚磷嫌满球拟拳丝俊肥朔金州第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,流式细胞仪法,原理：PI标记凋亡细胞，通过FACS可 显示凋亡细胞的特征性亚二倍体 峰。并可经计算分析得出凋亡百 分率。 方法：制备细胞悬液 PI染色 FACS检测,殉誊疑絮裁汗往皮本耍翱罪竞牟邀韶犬谈郭拽鱼簿铂焊虞福儿妊割毁攒勃第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,本章小结,1、免疫细胞的类型与分离技术 2、细胞的冻存与复苏 3、免疫细胞膜分子的检测原理与方法 4、免疫细胞功能测定的原理与方法,啸椽烫炸极卞溃卓胁垫粗鹃蜡畦靳抉巧雹陕滤巢摸蟹祸狡摧呻陡肆苏硬兔第一节免疫细胞的分类与分离第一节免疫细胞的分类与分离,