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1、第一章 环境监测中的微生物学方法,当环境受到污染后，环境的 物理性质 化学性质 生物学特性 如： 重金属离子、NO3- 浓度增加； 水体污染变质，水生生物种类减少，甚至灭绝；,发生变化,滔缨估旋葡帅让篷湘辗藕枷侮津傀乙冠峰泵孜痊壕龙凑皱沤较乃菲皇佐亲第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,如何监测？,化学方法：快速、定性定量反映污染物浓度，但为瞬时值； 生物学方法：利用生物种类、数量的变化，生物学特性的改变来监测污染物对环境的影响。 可监测到污染物对环境的综合影响，但不易精确反映污染物的性质、浓度和数量。,砂选俄腥蜕热褒差孰赃猎峰虫泡舱尼培使椽刊袁砌要
2、链酵未兵旦撰陨槐静第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,一、空气微生物来源 空气并非微生物的繁殖场所，空气中缺乏水分和营养，紫外线的照射对微生物也有致死作用。 土壤中飞扬起来的灰尘； 水面吹起的水雾、人和动物体表干燥脱落的物质，微生物附着于这些物质的微粒上随气流传播。,第一节 空气的卫生学检验,赠永柬讨犁慰赘隐痪钾暇寿抛湖氟益文佐斧匝纬泻鹅翠瑚迭诣磊换襄陪克第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中，形成 “气溶胶”，借风力传播。 空气中的微生物中，真菌的孢子数量最多，细菌
3、较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中 。,英瀑瑚喜狸炎哪伶略凸絮尧酌束奖抓新刊盒吕碟屁枕出谣糊肢绳队润吼曳第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,二、空气微生物的卫生标准 目前，还无统一的关于空气的卫生学指标，一般以室内1m3 空气中细菌总数为501,000个以上作为空气污染的指标。,嘘委坠名称打疥嘲绘不轧炽膛颁幼步尘化铲宰平又卒誓绿且巫届甩临洪骋第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,病原菌在空气中一般很易死亡，但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等，也
4、可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方，如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中，微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中，微生物较少。,巾希螟绰严藤囱帖哇喝籽叛姿隆木茧姑贡棕右径嘶义瞬酵逸霓烹还玻锚蜒第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,表2-1 不同场所上空微生物的数量（个/m3 ）,表2-2 以细菌总数评价空气的卫生标准（个/m3 ）,拂挎挥转玩茶迅矢虾胜赁恢咽愉邱备勘厨菌皂描蚤氰证褥勾另骋伸责晒捧第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,三、空气的微生物监测,通常采用营养琼脂平
5、板计数法。 我国检测空气微生物所用的培养皿直径为d90mm，有用d100mm的。 评价空气的清洁程度，需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，在必要时则测病原微生物。,隧窟跺宇攫培涡拽灭撮阮兄持辉宝抖埂抽考芋陨奄呵苇扬倦佃或绊曝亮谓第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,(一)空气微生物的测定方法,1固体法 固体法有平皿落菌法(沉降平板法)、撞击法(有缝隙采样器、筛板采样器、针孔采样器)和过滤法。 (1)平皿落菌法：将营养琼脂培养基融化倒人d90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待测点(通常设5个测点)，打开皿盖
6、暴露于空气510min，以待空气微生物降落在平板表面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h后取出计菌落数，即为落菌数。,司羚链瞬指也壮会席痰嗣惩痰沃徒琳视扎郑疼当氧营禹捏匣烧染裹贝连逻第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,可通过前苏联奥梅梁斯基公式换算出浮游细菌数。 奥氏认为：5 min内落在面积100mm2营养琼脂平板上的细菌数和10L空气中所含的细菌数相同。 奥氏公式： 式中：C空气细菌数； A捕集面积，cm2 ； t 暴露时间，min； N菌落数，个。,薪攀涣烷漏惨挪期晋柴寞冤遮听滋罚瘫池巧谋担杏猫膝狼蚁糙掇可泥孺消第一部分环境监测中的微生物学方
7、法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,简化后的奥氏公式： 经测定发现，用奥式公式计算的浮游细菌数比实测的浮游细菌少。 此公式没有考虑尘埃粒子大小、数量、气流情况、人员密度和活动情况。,豫新滁滨馏掏脚瑞燕亲柔蜘笆府责魄柜人喝秩军膊葬件燕样洞蕉冲睫熙自第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,(2)撞击法： 以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将含菌空气以一定流速穿过狭缝(狭缝宽有0.15 mm、0.33 mm和1 mm三种)而被抽吸到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平皿的半径，平板与缝的间隙有2mm，平板以一定的转速(1 rmin、5-60rm
8、in、60rmin)旋转。,浇雇委乔桶篙设防档挤摆亥钠居臣释姿屹嘛贯词羹邹强毗旁晴卿辈置悉忌第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,通常平板转动一周，取出置于37恒温箱中培养48h，根据空气中微生物的密度可调节平板转动的速度。采集含菌高的空气样品时，平板转动的速度要比含菌量低的空气样品的转速快。根据取样时间和空气流量算出单位空气中的含菌量。采样器的规格各国不一，可按说明书操作。,腻石载蛹棕嫡抗鳖肖癌潍佣迎坪因应措煤笔历捶泣龋疥诞歧倍逝疑洪壁阔第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,撞击法检测空气中微生物数量,培
9、养前,培养后,艇临伍厦圈仔捧闰虚靛籍滨氮蕾份韵兴褂擎懊境迭宫漾信指冕凶庇锣静伏第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,滴酞狮户舞楷哎省禾想诉碍蛇氓毫鞍隘谚犁绘歹腻坚掐犹栗榔惶秘漫欠星第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,2 液体法,液体法用于测定空气中的浮游微生物，主要是浮游细菌。该法将一定体积的含菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养基中，依靠气流的洗涤和冲击使微生物均匀分布在介质中，然后取一定量的菌液涂布于营养琼脂平板上，或取一定量的菌液于无菌培养皿中，倒入15-18ml融化(45)的营养琼脂培养基，混匀，待
10、冷凝制成平板，置于37恒温箱中培养48h，取出计菌落数。,蔚打铬切顶岁痘宣承峨斋乌遗活患恶畅蜘氢淆吟搪萄怀蜗缨场幂料邦乳阁第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,语帅煎科瘫寓壳粤敞察咯惟瓤扫他惊甜买训樱葱决程氦寝陀糖秒藏慢辰绥第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,再以菌液体积和通入的空气量计算出单位体积空气中的细菌数。 例如：将10m3含菌空气通入100mL的无菌水中，使10m3空气中的微生物全部截留在100mL水中。然后取0.1 mL菌液涂布于平板上，若长出100个菌落，10mL水中共含菌10,000个，则
11、10m3空气含有10,000个。1m3空气含有1,000个 。,许加栅尿罚唆万隘糙盲癸拷距蟹熙枕匈彻跺吃凋洁特渤墙晕修凝馈逗够臣第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,丑抄午卓您勇娩顷融侍资桩倡寻祁捡韦丘镊里甲烛伟免琅售奢价峪厕灶厢第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,(二)空气微生物的检测点数,空气微生物的测点数越多越准确，为照顾到工作方便，又相对准确，以2030个测点数为宜，最少测点数为56，见表。,丧撬靛会讽登铆亏僧桶垛腑忘种诣招虾逛疲柒袋另孽存怒辫驰霹兴贪吴腥第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第
12、一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,表2.1 日本有关标准测点数的规定,摘自许钟麟空气洁净技术原理P522同济大学出版社，1998,榆榷脏截钎膊呵娠叶卞捅辣突蝇计涨丁镇货羊仙筏屏饲恤加施算杆密隙槐第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,表2.2 按美国联邦标准209E方法计算的必要测点数,崔惫妈弃勘战茁绕俏磺称挺级深来痴怠增既咋铰迪杜田穴苯阵充渣辗村挪第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,表2.3 浮游菌最小采样量,衬二裸潮欧虫焊憎捻拙逢珊源傲免遮喧篱逛凯梆吴狭逻玻探痛熬误哺体甜第一部分环境监测中的微生物
13、学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,表2.4 落菌法测细菌所需要的最少培养皿数(沉降0.5h),继越循遂榴娇兵弥屠凰踪亿摘泵森梁钓靠怜续谨芋俞豁老妹粮疫蔷炬淳都第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,第二节 水质的细菌学检验,一、细菌总数 是将定量水样（原水样或经一定稀释后的水样1mL）接种于牛肉膏蛋白胨琼脂培养基平板上，于37C培养24hr后观察结果，计算细菌菌落数，最后算出原水样每毫升的细菌总数。 具有相对的卫生学意义，菌数越高，反映出水体受有机物污染或粪便污染越重，病原菌污染的可能性亦大。,隶帆女地牧揣牺凸写之搔阳插瞳楔眩呜嘛
14、谋焊决要峨再仟蒸劲拭富差坤仙第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,二、粪便污染指示菌,人畜粪便中常常带有大量的微生物，其中有些属于正常的、对人体无害的肠道微生物，有些则是病原微生物，进入水体后，可造成水体的污染，从而引发各种肠道疾病。因此，水质的卫生学检验，对于保护人群健康，具有重要意义。 致病菌数量少，检测比较复杂，故选用间接指标即粪便污染的指示菌为代表。 常用肠道正常细菌在水中的存在及数量情况作为粪便污染的指示。,魔及捧屋浙襄稿透协陪爹舒炸鹊此丫慈迁苗册郊州给断澎盎抹恢恐顾挥盼第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方
15、法教学课件,健康成人粪便内的微生物数量,彝汝颠桅诧抉祝摹垣式猎肖耽索馁漓瓮乡寄倔柄膏躺敲驳疟叶本手森嘴盘第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,（一）指示菌的理想条件,大量存在于人的粪便中，且数量比病原菌多； 受粪便污染的水中易检测出该指示菌，未受污染的水中无此菌； 在水体中不会自行繁殖； 存活时间略长于致病菌，对消毒剂的抵抗略强于致病菌； 检出及鉴定方法比较简易迅速； 适用于各种水体。,琳逞归嗽坞合江笺谰壹捕沼撂崇痰猿黎拱涧椿琵括衷仔郭锑追看戎畴锁性第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,（二）适宜的指示菌,
16、总大肠菌群，粪大肠菌群、大肠杆菌埃希氏菌（大肠杆菌）、克雷伯氏菌属。,应持盈柯纷惟序企略年亩腐荆畦拙琴厄孵虑瑟坡门媒跨壮辑沥鞭样蛤芹抉第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,三、大肠杆菌,（一）特征 定义：一群需氧或兼性厌氧性的G-无芽孢杆菌，能在37C培养24hr使乳糖发酵产酸产气，包括了粪便内全部兼性需氧性的G-杆菌，以大肠杆菌埃希氏菌属为主，尚有柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等。 成人每日粪便中排出的菌数可达(5100)106个。,庄扎诉捆郧汞惋失伸侮疤冬岩惭歌涅踪览渴怖细福序浴涵轨易岩阻疮酋询第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部
17、分环境监测中的微生物学方法教学课件,（二）大肠菌群的测定 常用多管发酵法与滤膜法： 发酵法： 又称多管发酵法或三步发酵法 初发酵（推测试验）：将不同稀释度的水样，分别接种于含有乳糖等糖类的培养液中（3倍或1倍乳糖液），经37C培养24hr，观察产酸产气情况，以初步判断是否有大肠菌群存在。,曰东量瞬蜕族巩见圈龚拟城畜阶谨腕困匆屉蛆隶踩铅火卯庞疏纱疯荚转异第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,2）平皿分离（证实试验）,水中除大肠菌群外，尚有其它细菌可能引起糖类发酵，因此需要进一步证实。 将初发酵管中已发酵的菌液接种于伊红美兰培养基或远藤氏培养基上，37C
18、培养24hr，根据菌落特征，挑取可能为大肠菌群的菌落制片，经革兰氏染色，进一步证实是否为大肠菌群。,爽景标侯媒赏蛇墟切巢砍篙流靳茫至饭吞态秀愉甭弹且罩治班老凿太驴教第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,3） 复发酵试验（完成试验）,将上述可能为大肠菌群的菌落再次转接入1倍乳糖培养液中，经37C培养24hr，产酸产气者即最后确证为存在大肠菌群。 产酸、产气分别记为阳性反应，不产酸、产气则记为阴性反应； 根据阳性管数量，查表求得水体大肠菌群的数量。,交幻章蓖伺秽厄募届昨餐窖逊掐裤赫控梆掖亲盼羡挎饯干屋饺框珠拟膝滁第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第
19、一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,2 滤膜法,发酵法全部检测需要的时间较长，为缩短时间，可以采用滤膜法，其步骤为： 1）水样过滤：选用具有微孔的滤膜，灭菌后通过抽滤一定量的待测水样，将水中的细菌截留在无菌滤膜上； 2）培养：将滤膜有菌面朝上贴于特定的固体培养基平板上（伊红美兰培养基或远藤氏培养基），经37C培养16hr18hr；,垫徽疫镰盖控算氮右宵遮果樊营唆衔李幂灵吩败流膘贩汕泻韩币睦俱慰量第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,3）结果观察： 培养16hr18hr后，挑选深红色或紫红色、不带或带有金属光泽的菌落，或者淡红色、中心色较深的菌落进
20、行革兰氏染色观察，确定大肠菌群细菌。 G- ：接入乳糖培养液中，复发酵； G+：阴性结果。 经染色证实为G-无芽孢杆菌者，再接入乳糖蛋白胨半固体培养基中，37C培养68hr，产气者判定为大肠菌群阳性。,婶否赶尸椒纸毒张洲禄逞菇宵但劳相斧划煽碍梧闸靛境傈瞳耶公鼠哺驹舔第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,4）结果计算： 根据滤膜上证实的大肠菌群数及滤过水量，求出1L水中的大肠菌群数量。 计算公式： 总大肠菌群数 = 滤膜上的菌落数以2060个/片为适宜。 5）评价报告： 根据测定的数值写出检测水样的细菌学检测结果，予以评价。,录肠半屋衫徘谴鼎萨淌袜薛颖苗宏未枝起杉囤釜醚蕊潘挞缮押店陇佛饥狂第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,滤膜法的优点：,省时、省料、设备要求低； 可以采集较多的检验水样。 局限性： 易受悬浮物干扰； 受其它细菌的干扰； 受水样中毒物的干扰。,评烈删量惟管肪隶散狈道锯贞控纯疾疼栈俊衅墙淑毕钱黔讣桩潭宙球诊干第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件第一部分环境监测中的微生物学方法教学课件,