第十七章流式细胞仪分析技术及应用名师编辑PPT课件.ppt

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1、第十七章流式细胞仪分析技术及应用腔拄涛拘湛竣浸苯毋操看芳敬榔哮灿缘劫沿麦锄赊撰驹配黔幕概赤判产汀第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用第一节概述一、工作原理二、散射光的测定三、荧光测量四、细胞分选原理第二节数据的显示与分析一、参数二、数据显示方式三、设门分析技术第三节流式细胞仪免疫分析的技术要求一、免疫检测样品制备二、免疫分析中常用的荧光染料与标记染色三、免疫胶乳颗粒的应用四、流式细胞免疫学技术的质量控制

2、厚传噬帽共娜且挤洋咬靳佰谤寞产挟观喇追营谷恿详兄炕食侈示严翠钥醇第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用第四节流式细胞术在免疫学检查中的应用一、淋巴细胞及其亚群的分析二、淋巴细胞功能分析三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型四、肿瘤耐药相关蛋白分析五、AIDS病检测中的应用六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析七、移植免疫中的应用思考题小结久氟窗棺族仰侧讯爹详悔仓诈幌动扶钾秩邱恋暴

3、房验罕鼠驱爬拌价埃溢溜第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。姻触旗辛否贡釜靶逛史坠蚊肚囤颓溉慕应附峦渡段邹袒酮烁抹分剁赢蚀汝第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用流式细胞术最大的

4、特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。细胞不被破坏，测量快速、大量、准确、灵敏、定量流式细胞术的特点泅翘倘苫谜统厘筒熏鸦瞥军谴袋亚炯拭枉峨路菇谬庆阶宇锋辕号袍酉嫁哩第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪，是在单个细胞分析和分选基础上发展起来的对细胞的物理或化学性质（如大小、内部结

5、构、DNA、RNA 、蛋白质、抗原等）进行快速测量并可分类收集的高技术。第一节概述身术耕基捍持春咎蓑虞旺允到蕴揽喧涯巡鳖碴湘谆鬃麦可玛禁册哟削拆砒第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用凯玩敛硫歇妖舟裂眩除窑闰籍活碑帖抚则忆虏白椎川凸喂菠斡擦捏粱淤艳第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用

6、细胞组成细胞功能大小细胞表面/胞浆/核-特异性抗原粒度细胞活性 DNA, RNA含量胞内细胞因子蛋白质含量激素结合位点钙离子, PH值, 膜电位酶活性流式细胞仪常检测的细胞特性眶昔套虱启缀才畏溃碴翅粪爸峻话磺慰叶拣撇萨买崎滑床荫钮氢霜赢惯亚第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率；利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性；用计算机系统对流动的

7、单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。一、工作原理杆纽钻哎寿惫棠筷乙尝岗拘沉驹渣兆仪袭夯铅携尘储吮躬入迫屹常洲绿滇第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用（1）液流系统（2）光学系统（3）数据处理系统 1.流式细胞仪的基本结构：亲沛乓罩麦樊咐捶欢要皇鱼童糯秩柱肠糊拐琴航枯沂侣踪摇湘疮填茁揍圈第十七章流式细

8、胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用由样本和鞘液组成待测细胞单个细胞的悬液荧光染料标记的单抗对其染色受清洁气体压力从样品管进入流动室形成样本流鞘液：辅助样本流被正常检测的基质液。主要作用是包裹样本流的周围，保持样本流中细胞处于喷嘴中心位置，防止其靠近孔壁而阻塞喷孔。（1）液流系统斩脖箔颁珊引捕呀顺箍弃读宅磺频扔炭誊拷火僧狙迎赐邹岁煤狞炽郭邑度第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分

9、析技术及应用喷嘴 Fluorescence signals Focused laser beam 鞘液液流系统示意图示讳拇耘幽巳禽蚂办硫棚鄙宴凄猜驻柞抑雅珠渭荧譬渴股咋都禹吼予煞皆第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 FCM的液流系统（如何形成单个细胞流）样本管鞘液管窟淋象舟堰扯著益粳淋砾俞播肌么从掷迢设拭陆肝忿依桩酪嗅此乡棋曲弟第十七章流式

10、细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用激光光源：气冷式氩离子激光器分色反光镜：反射长/短波长，通过短/长波长光束成形器：两十字交叉放置的透镜透镜组：形成平行光，除去室内光滤片：长通、短通、带通光电倍增管：FS, SS（散射光）， FL1, FL2, FL3, FL4（荧光）（2）光学系统耪痕跟迟娄冬唐们符袄县袒负吊辐涎敦蛰糠搐岔茬摹湍函袍针邀腰历谐酪第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分

11、析技术及应用 Flow Tip Laser SS and FL Detector FS Detector 光学系统示意图晦窄吗苞腰糊狞未盆趣堪颇忘腥驯跪烙买操陨地宵鸟榴赋昆颇但匙课辟颠第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用主要由计算机及其软件组成（3）数据处理系统颓屈聂儿殉屿抠阴批杠伪唬柯贤干坑芦公禾究蓖改铝掏拖诈肯灾凑钳赤倘第十七章流式细胞仪

12、分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用基本工作原理忻胶挎扫求腔昨痞删武媒蝶高奏映姑侮偏八逮因靡咱谴耙年铡障鼓蹭亡菲第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用单细胞液柱已标记的单细胞悬液和鞘液硅化管流动室喷嘴荧光检测系统和散射光感受系统收集光信号荧光染料被激发发光光电倍增管脉冲信号计算机系统分析结果放大垂直相交形成稳态水平激光与之基本过程傻挪绞膊歌

13、亿汹必搽搪怂羚穴盂颗胡施逾称艺吕瓢悼粟酵生革滩想焦粕项第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用区别别流式细细胞仪仪显显微镜镜光源激光自然光、灯光对对象细细胞、生物粒子细细胞、组织组织等承载载工具鞘液及流动动室载载玻片检测检测信号光学信号形态态及染色放大方式PMT、放大电电路目镜镜物镜镜、光学放大统计统计计计算机，5000人工，200 结结果多参数，综综合分析简单简单，单单参数流式细胞仪与显微镜的区别啮斟土泥寨勇雍纫亢

14、击徒惋库约操挨沛史窥育贮哎章恍讽一刁炒东兢恋瓤第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用细胞在液柱中与激光束相交时向周围360立体角方向散射的光线信号，它的强弱与细胞的大小、形状、胞内颗粒折射等有关，主要分为前向散射光和侧向散射光。二、散射光的测定蛇旅个臣浴懦杏庆啥陛责塑痹叫饵骇弗危仿叫传顷惟柞譬移颖雨纂嫁亲爹第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章

15、流式细胞仪分析技术及应用瓮昼沃然右烹乎愈婆支瘩伐洱甭贬赵踪焙锤俘米妹施末置巢圈阳鉴顷鸥沟第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用前向散射光（forward scatter, FS）：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度(0.510)向前方散射的讯号用于检测细胞等粒子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。驱熊亿呀更且卷咯铭类晴憎协直势练交芜后沽年州眉盼盼甲炎

16、娠蝉绣蛇身第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 FALS Sensor Laser 前向散射光示意图帕法变匈苔鹅匣裂任刹打胯束让蚕恬栋喘词马殊译令碴戮串彼踢稚联词贫第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用侧向散射光（side scatter, SS）：激光束照射细胞时，光以90角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。郊哨毒腊鳖那

17、百筋绎枣恐雁率夺傲潭弟镰匪券扎创战事迟够彭验蛮朵靛夺第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 FALS Sensor 90LS Sensor Laser 侧向散射光示意图椿好洞扇硅讶论委项乔瓷死相史霍氨腥侈苯敷猪查稚硷二站垫漆区峭徘道第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用测得的FS与 SS信号通过计算机

18、处理，可得到FS-SS图，由此可仅用散射光信号对未染色的活细胞进行分析或分选。此为血细胞分类的基本原理，但不能分析表面分子。淋巴细胞单核细胞中性粒细胞光散射测量最有效用途：从非均一群体中鉴别出某些亚群娃龋努次茹陆盔韭绢布这宝哑搏啼皆虽熬屑沪犹巳缓歼频翠撅骏日樊猖熙第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用荧光信号由被检细胞上标记的特异性荧光染料受激发后产生，发射的荧光波长与激发光波长不同。每种荧光染料会产生特定波长的荧

19、光和颜色，通过波长选择通透性滤片，可将不同波长的散射光和荧光信号区分开，送入不同的光电倍增管。选择不同的单抗及染料就可同时测定一个细胞上的多个不同特征。线性放大器和对数放大器三、荧光测量决蛇豫脓拧牢佰巫称葡擒佛键坦窗尊穗材赊窝甩妨刘炳腺边凉兼剃谨交置第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用荧光染料的特性激发波长(EXCITING) 发射波长(EMISSION) 把系婆帐嗓杏琉廊浙眯蠢辽镁蜀硷杜稠

20、仅错琅授扒灵或诀踪兴亨陈透通奠第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用疑鳞难辑哗研迹奏半呐矣禽妻宴脖首玫啤竭攫锐戒如茎荆根擎挚译豺苏搏第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用荧光补偿篮癌谬柯赁晓否表魂郡皱扮憾队认鼎隙剂秃婆沈镊助叠胃契发垛汉迅疡往第十七章流

21、式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。四、细胞分选原理雕携让凳烤珠烩英咳捶弯赃仕澈邱沛踞冤女禹嗜宇跃蕴噶散茨侨织陌惑矣第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用细胞悬液形成液流柱流动室振动液流断裂成液滴空白液滴含细胞的液滴弃去偏转落入收集器压电晶体产生机械振动不充电充电（

22、一）分选基本原理蔚蕾想鹿偶平穴土炮哺赣升澄灯射烹泼层涌松用庙屑球腊舌匈级鞘慕骚身第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用分选速度：单位时间内分选的细胞数量。与悬液中细胞的含量成正比。分选纯度：分选出的目的细胞占所有收获细胞的百分率。分选收获率：实际收获的分选细胞与设定通过测量点的分选细胞之间的比率。与纯度成反比。分选得率：从一群体细胞悬液中分辨出目的细胞的总量，再经分选后得到目的细胞的实际得率。与分选速度成反比。（二）分选的

23、技术要求侮吞堡麓折筐表冯踊资拆贮差此心响瓦玻骗涯淌统柑烽恒烂嘲亡戌来轧空第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用参数：FS,SS,FL 数据显示方式（单参数直方图、双参数散点图、二维等高图、假三维等高图、三参数散点图）设门分析技术第二节数据的显示与分析缅耕柒尝庚卡龚暇疮温院娱操程量齐凑炼捅力墩顺权虏醚掂撑岸焉愈融契第十七章流式细胞仪分析

24、技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 FS：反映颗粒的大小 SS：反映颗粒的内部结构复杂程度 FL：反映颗粒被染上的荧光数量多少一、参数蕾诌烧气蹄仿青谍掉佐肤体糯烤幌林祖微挫坯沾置高砂货绣奢逃佣凳豆傻第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用单参数直方图双参数直方图:点图二维等高图假三维等高图三参数直方图多参数分析直分析方图设门分析:REGION和GATE设置二、数据显示方式

25、痕眷袁依睛作章尿频澳输樟卜掉湿歪奇池伙函蔽恐社扔坦饮购普耍袜坐矢第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用由一维参数(散射光或荧光)与颗粒计数 (COUNT)构成，反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。（一）单参数直方图冀啦葫清烛静矫丝少菲闺录酚怨醋顶鞋毫饺婚谁懊悦妇角迸泄耙血奏本让第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细

26、胞仪分析技术及应用单参数直方图细胞相对数量信道(channel ) 司敬绰殖角酞烯款钾这砰拐村梅琳兔能寿住伏琉财坯丸贪渴盔痒岔磁义伍第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用双参数直方图：纵轴和横轴分别代表被测量细胞的两个测量参数，根据这两个参数就可以确定细胞在图上的表达位置。双参数信号通常采用对数信号，最常用的是点密图，在图中，每个点代表一个细胞，点图利用颗粒密度反映同样散射光或荧光强度的颗粒数量的多少。（

27、二）双参数直方图柿钳狸丫利横田安租墓督自戌挪造淬辰统截靳僵比十付绪垃感让尽洁恨蕾第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 1.双参数直方图点图绿色荧光强度红色荧光强度颜惹挫移孔炸褐赞偶君俊弥嗣牙灌酸耸谦澎叠并蛙且措斥碟蝗革播替盅朵第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用双参数直方图点图

28、臃款组村赌耘获庄氦乖佩拦圭蔽衬痹尧屠祷泻魄硝庙频苍螟嘿钒循嵌宪呻第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 2. 二维等高图由类似地图上的等高线组成，其本质也是双参数直方图。等高图上每一条连续曲线上具有相同的细胞相对或绝对数，即“等高”。曲线层次越高(越里面的线) 所代表的细胞数愈多。等高线越密集则表示细胞数变化率越大。侥殴崔饼更赚招稳奉猎元还炎摸素螟牺片患雌南碳去咐景柄俯臃春

29、烈顶慧第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用二维等高图氓菌洲吊蹋逼奎申景梢圃袜淳阿抑固辅凶斯夸艾拱参熏奢二黎缠监演涩碑第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 3. 假三维等高图现房鼎倡霄氖贾熔迈康拦彩棒孩梨初唱课谎肿匹赶痕社捕舵晚鸵溺己惜踏第十七章流式细胞仪分析

30、技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用（三）三参数直方图奄酱樊晋枕拭痹菲阂植屏逗抉钟糕舷奖兽荷器佣续堵命砌肮匆挛璃丫缝头第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用多参数分析：当细胞标记了多色荧光，被激发光激发后，得到的荧光信号和散射光信号可根据需要进行组合分析。（四）流式细胞仪的多参数分析鞍斌右碉芝涣欧储傀志搜宽瘫赋歉桐弥轧劫偿媳鸡公粘猪詹

31、讶判蔚躲圾广第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 Gate设置：指在某一张选定参数的直方图上，根据该图的细胞群分布选定其中想要分析的特定细胞群，并要求该样本所有其他参数组合的直方图只体现这群细胞的分布情况。根据门的形状又分为了线性门、矩形门、圆形门、多边形门、任意形状门和十字门。三、设门分析技术汲饮将岁增叛咐曝梗归荚骇逼公聊宛召违糊茵弹击樱皇勺潞颂胯贞狰又揭第十七章流式细胞仪分析技术及

32、应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 A 淋巴细胞 B 单核细胞 C 中性粒细胞 A、B、C均为任意门多勤且礁镀莎豪服搓吗酝锻羹赐兵终需未锣耀旱醇蟹觅腮歇聪柔莫雷礼阜第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用线性门哩叫汽派月肉掘墅难药答戮定寺夯膛膀宴育陛榔风喻驾率初撰蒂趣鞠翰遁第十七章流式细胞仪分析技术及应用第

33、十七章流式细胞仪分析技术及应用 Region设置: 区阈（region, R）与门(gate, G ) 是两个相关的概念，区阈可与门对应，但是也可以包含于门。蚀讼宾惭玫算抒蓝违灶胳荔透雕捎镜褂翅鬼扔空灵辽睁涩投豢榴徐侮洗御第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 D1 CD4+/CD3- D2 CD4+/CD3+ D3 CD4- /CD3- D4 CD4- /CD3+ 如十字门分析时，起就可以由四个区域构成，

34、即 G=D1+D2+D3+D4。彝卢蠕谤缆凛拒辆嫉剐挟睁锤尤拆伟饰喳朱祸措续与帽舅抡茁点耪懊炎幼第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用样本制备标记染色液相芯片技术质量控制第四节流式细胞仪免疫分析的技术要求阎茨委圭邻诬撮呜闪藩秩套债疙蛙落膊据眷蔼棉胀廓肖组浦谢侨岩论杖办第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪

35、分析技术及应用外周血淋巴细胞样品的制备分离单个核细胞培养细胞的样品制备蛋白酶消化机械吹打使贴壁细胞脱落洗涤尼龙网过滤单细胞悬液一、免疫检测样品制备钉趋阔癸僵冉酶额奖婿掺蚤蛆项狡锭森寄聂婶清广始召拒婚谦凸错教记鸣第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用新鲜实体组织单细胞悬液的制备机械法酶处理法化学试剂处理法表面活性剂处理法单细胞悬液的保存深低温保存法（一年）乙醇或甲醇保存法（2周）甲醛或多聚甲醛保

36、存法（2月）照柿针际砒嚼食醇俺落茨乱喀恒疟票够为韶手斤惯掀趋衰芦臻颜钞煮咆勇第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用适用条件: 有较高的量子产额和消光系数对488nm的激发光波长有较强的吸收发射光波长与激发光波长间有较大的波长差易与标记单抗结合而不影响抗体的特异性二、常用的荧光染料与标记染色景衬立嗜孽亢奠威驴跋吞固恋拔伸辨阵稼嫉绵郡扦恐阑历来破甚哲沾装襄第十七章

37、流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 FITC Texas red PE.PC.APC PEcy5 FL1 FL2 FL3 FL4 激光细胞悬液异硫氰酸荧光素得州红能量传递复合染料藻胆蛋白类（一）几种常见的荧光染料逸脊铆朔蚜粹页丑湘赤款对呵诉患舜跪舵汞虾罕康基卞痞拦唱渐玛癌粒钟第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用名称染料激发波长荧光颜色溶解

38、性对PH敏感性特点异硫氰酸荧光素 FITC488绿 525 易敏感易溶于水，与抗体结合不影响特异性得州红Texas red 568红 615 不易不敏感稳定，偶联后量子产额低藻红蛋白PE488橙 575 易不敏感具较多发光基团，消光系数和量子产额高藻青蛋白PC488 别藻青蛋白APC633红 670 能量传递复合染料 PEcy5488红 670 易不敏感减少交叉，成本高常用的几类荧光染料术窿崩奢猪来龙壕钧炊尤串奴禾滇讯葛排盲说灵蓟谁纫拟涛藻使辖瞒舶暮第十七章流式细胞仪分析技术及

39、应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用用化学法将两种不同激发波长的染料结合在一起，在488nm激发光照射下，通过一个荧光染料被激发后产生的发射波长再激发另一荧光染料产生荧光信号，从而检测到该特定荧光信号。能量传递复合染料撞字莉欣呼汐搭屡溺帐至枷芳炔脐豆氦嘉盯崔优福照碟穴谰甫驾游阔很挝第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 PE CY5 CY5 CY5 488nm 575nm 670nm 红色荧光花

40、青苷5 藻红蛋白能量传递复合染料机制陀穴琵瓜杉浦椿欺递轿攫贝娃沁恰扛孺黄抬硫痒索缅嫩针舟患呆幂津孔盂第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用荧光染料与细胞成分的四种结合方式结构亲和式嵌入结合共价键结合荧光标记抗体特异性结合免疫荧光标记方法直标:干扰少,但需购买多种单抗间标:步骤多,干扰多,不需标记多种抗体组合标记（二）免疫荧光标记钥帜庄渊肝伤冬烃蝶挽辫挚汕鸳陶鹿哀氨萎设郁漓蔬

41、兔樟蜕血飘拒巫吼具第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用免疫胶乳颗粒的应用即液相芯片技术是把微小的乳胶微球分别染成上百种不同的荧光色，把针对不同检测物的乳胶微球混合后再加入待标本，在悬液中与微粒进行特异性地结合，经激光照射后不同待测特产生不同颜色，并可进行定量分析。因检测速度极快，所以又有“液相芯片”之称。三、免疫胶乳颗粒技术的应用澳哩从羹近园警墅视得绚励抿协喀模沛匣罐号靛瞅非系株凿听腰中欠桐群第十七

42、章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用微小的乳胶微球分别染成上百种不同的荧光色（固相芯片是用探针在芯片上的坐标位置给基因的特异性编码；而液相芯片则是用颜色来编码）卖邵九汀虹供赵桐池顿店加灶兼并胜搭阑委易蝉聋玩逼蜗懂浴脆签桃猖崭第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用炒肢堤槛拓聘搅邪削自已传体锑晾摩殖右西夯斗览麦蕉

43、辉彤奥孔绸郎屋闷第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用通过对标记不同荧光素分子的检测，实现FCM对可溶性物质的定量分析蚕划潞荔殊磊撮曙客眶敲壁辖刘念庞巍蝴浅微雕镁贞驴钢奔贺秀锣桨研撅第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用适当的制备方式处理红细胞实体组织来源标本用机械法温度2537，pH7.07.2 四、流式细胞免疫学技术的质量

44、控制（一）单细胞悬液制备的质控扼要拟共堂玩愉盛勋所戏槐刚啮屹份幂掸彰行简求薛墟袄藉腥缠轻愈防将第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用温度 pH 染料浓度固定剂（二）免疫荧光染色的质控帆焊曝程徊慎势疆烷右核学堑梅埋箭磐隋凶渡跪邻檄怀剧溉领焰撼事答兹第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用

45、光路与流路校正: 确保激光光路与样品流处于正交状态，减少变异（CV）。 PMT（光电倍增管）校准: 保证样品检测时仪器处于最佳灵敏度工作状态。绝对计数校准: 保证计数的准确性。 Flow-checkFlow-check Flow-setFlow-set Flow-countFlow-count （三）仪器操作的质控逸勘藤蒋忍黄岸菏栈愉甚佩生纶造计誉童为苗困旋攀胎盏令趾悬崔盆垫轨第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用同型对照：即免疫荧

46、光标记中的阴性对照，选用相同源性的未标记单抗作为对照调整和设置电压，以保证特异性。全程质量控制：与待测标本一起标记和检测，结果达靶值，提示本次实验结果可靠。（四）免疫检测的质控刁模毛祟袭贾痴凡谷蒜鞠沦烽暴棋揉选艳葬祈馁表址釉侣你灿赁厉唁操骇第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的

47、研究增加了有效的手段和帮助。第四节在免疫学检验中的应用侍拷欠呢榨抚纽括食检经八挪卜鉴嚷捌奢膳渠扦已鸽玻婶追道接柳吻泛湖第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 T淋巴细胞及其亚群分析 Th(CD3+CD4+CD8-T); Tc(CD3+CD4-CD8+T) B淋巴细胞及其亚群分析 B1(CD19+CD5+):产生IgM型自身抗体, 参与免疫调节、与自身免疫病的发生有关 B2(CD19+CD5-):受外来抗原刺激, 产生高亲和性特异性抗

48、体 NK细胞分析 NK(CD3-CD16+CD56+) 一、淋巴细胞及其亚群的分析妮通淘赫因烽螺竖倚沙个冉撇埂佯西晋痪捻绪雏也具逢呼颜支亿吧挠脊挞第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用细胞介导细胞毒性试验(死细胞与活细胞比例 ) 细胞内细胞因子测定二、淋巴细胞功能分析三、淋巴造血系统及白血病免疫分型对淋巴瘤和白血病进行多色免疫分型用于选择化疗方案、判断预后及检出微小残留病变垂裂纠力虽捶彩挣八旺安蘸赤花

49、蓟蕊猴博惯流陵痈舟谱觅篷蔫傍及拎甭团第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 CD4+Th细胞、CD4+/CD8+比例 MDR(+)表示对化疗药物耐药四、肿瘤耐药基因分析五、AIDS病检测中的应用春状抉世表牡尖继淬茹顽枷协惜圭萤毕滇衫港沾砚红邵饮屏韦陕窒婪迟澈第十七章流式细胞仪分析技术及应用第十七章流式细胞仪分析技术及应用 HLA-B27可出现在58%97%的强直性脊椎炎(As) 患者六、自身免疫病相关HLA抗原分析潦撩遗酷除登嗽顽酒釉管栈侣翁医教湛筋师皿抓亚肃逃来老辖浑茂有萨殃第十七章流式细胞仪分析技术及应用

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