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1、细菌的染色和细菌细胞构造的观察,目的要求 染色原理 实验材料 实验程序 思考题,目的要求,无菌操作 微生物涂片 掌握细菌的芽孢染色（枯草杆菌） 熟炼显微镜使用,实验材料,涂片染色用的细菌培养物 芽孢染色（枯草杆菌）24-48h的斜面培养物。 5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水溶液 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸等。,细菌的芽孢染色原理,细菌的芽孢具有厚而致密的壁，透性低，不易着色，若用一般染色法只能使菌体着色而芽孢不着色（芽孢呈无色透明状）。芽孢染色法就是根据芽孢既难以染色而一旦染上色后又难以脱色这一特点而设计的。所有的芽孢染色法都基于同一个原则：除了用着色力强的染料外，还需要加热，以促进芽孢着
2、色。当染芽孢时，菌体也会着色，然后水洗，芽孢染上的颜色难以渗出，而菌体会脱色。然后用对比度强的染料对菌体复染，使菌体和芽孢呈现出不同的颜色，因而能更明显地衬托出芽孢，便于观察。 Schaeffer与Fulton氏染色法 ，改良的Schaeffer和Fulton氏染色法,芽孢染色的方法和步骤,1.涂片、干燥、固定：待涂片晾干后在酒精灯火焰上通过23次。 2.染色： 加染色液：加5%孔雀绿水溶液于涂片处（染料以铺满涂片为度），然后将涂片放在铜板上，用酒精灯火焰加热至染液冒蒸汽时开始计算时间，约维持5-10min。加热过程中要随时添加染色液，切勿让标本干涸。（加热时温度不能太高）。 水洗：待玻片冷却
3、后 ，用水轻轻地冲洗，直至流出的水中无染色液为止。 复染：用蕃红液染色1-2min。 3.水洗、晾干或吸干。 4.镜检： 观察：芽孢（菌体）颜色、形状、着生位置、芽孢囊特征等。,简约流程 涂片干燥固定5%孔雀绿水溶液，加热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干）冷却水洗番红液染色1-2min水洗晾干或吸干镜检记录 录像演示,思 考 题,芽孢染色法蕃红为什么用水溶液？ 芽孢染色法为什么使用孔雀绿？,实 验 2-2,结 束,染色简约流程,荚膜染色 制片干燥（空气中晾干或用冷风吹干复红染色液染色3-5min水洗干燥（晾干）涂苯胺黑（薄层）风干镜检记录 芽孢染色 涂片干燥固定5%孔雀绿水溶液，加热至染液冒蒸汽，约维持5min（勿干）冷却水洗番红液染色1-2min 水洗晾干或吸干镜检记录,