《中国药典》2010年版(二部)化学药品修订课件-文档资料.ppt

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1、主要内容,2010年版药典（二部）的特点,2010年版与2005年版二部增修订情况比较表,其中，由于未找到样品而未修订的品种有345个，占保留上版品种17.5%,例：注射用盐酸阿糖胞苷,二部各类品种的增修订情况,化学药中由于未找到样品而未修订的品种有306个，占保留上版品种21.8%,2010年版与2005年版药典主要项目收载情况比对表,本版药典未收载2005年版药典（二部）中的品种名单,药 典 品 种 的 遴 选 原 则,汇报内容,凡例的增修订情况,2005年版 名称及编排，项目与要求，检验方法和限度，标准品、对照品，计量，精确度，试剂、试液、指示剂，动物实验，说明书、包装、标签。,2010

2、年版 总则、正文、附录、名称及编排，项目与要求，检验方法和限度，标准品、对照品，计量，精确度，试剂、试液、指示剂，动物实验，说明书、包装、标签。,凡例的增修订情况,总 则 一、中华人民共和国药典简称中国药典，依据中华人民共和国药品管理法组织制定和颁布实施。 中国药典由一部、二部、三部及其增补本组成，内容分别包括凡例、正文和附录。 本部为中国药典二部。 二、国家药品标准由凡例与正文及其引用的附录共同构成。本部药典收载的凡例、附录对药典以外的其他化学药品国家标准具同等效力。 五、正文中引用的药品系指本版药典收载的品种，其质量应符合相应的规定。,凡例的增修订情况,总 则 六、正文所设各项规定是针对符

3、合药品生产质量管理规范的产品而言。任何违反GMP或有未经批准添加物质所生产的药品，即使符合中国药典或按照中国药典没有检出其添加物质或相关杂质，亦不能认为其符合规定。 七、中国药典的英文名称为Pharmacopeia of the Peoples Republic of China；英文简称为Chinese Pharmacopoeia；英文缩写为Ch. P.。,凡例的增修订情况,正 文 八、正文系根据药物自身的理化与生物学特性，按照批准的处方来源、生产工艺、贮藏条件等所制定的、用以检测药品质量是否达到用药要求并衡量其质量是否稳定均一的技术规定。 附 录 十、附录主要收载制剂通则、通用检测方法和指

4、导原则。制剂通则系按照药物剂型分类，针对剂型特点所规定的基本技术要求；通用检测方法系各正文品种进行相同检查项目的检测时所应采用的统一的设备、程序、方法及限度；指导原则系为执行药典、考察药品质量、起草与复核药品标准等所制定的指导性规定。,凡例的增修订情况,项目与要求 十七、（第二段）对于生产过程中引入的有机溶剂，应在后续的生产环节予以有效去除。除正文已明确列有“残留溶剂”检查的品种必须依法进行该项检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在正文中列有此项检查的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按本版药典附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的限度规定。,汇报内容,各

5、论的增修订情况,各论的增修订情况（1）：名称与性状 各论的增修订情况（2）：鉴别 各论的增修订情况（3）：安全性检查 各论的增修订情况（4）：有效性检查 各论的增修订情况（5）：含量测定,各论的增修订情况（1）：名称与性状,药品通用名称 （原料药） 按照INN规范了药品通用名称：如胸腺法新（曾用名为胸腺肽1） 根据药物结构式区分了通用名称 ：2005版“樟脑”，2010版分为樟脑（天然）和樟脑（合成）两个品种，前者为光学纯（右旋），后者为消旋体。,各论的增修订情况（1）：名称与性状,药品通用名称 （制剂） 规范并真正反映药品的组成和剂型特点，明确了剂型的亚类，与制剂通则一致。 将胶丸统一修改为

6、软胶囊 硫糖铝片改硫糖铝咀嚼片。 替硝唑注射液（均为大容量规格）改名为替硝唑氯化钠注射液 把甲硝唑注射液中大容量规格改名为甲硝唑氯化钠注射液 （明确了处方组成，增加渗透压检查，使归类更科学合理）,各论的增修订情况（1）：名称与性状,结构式： 对于光学纯原料药，明确立体构型。 英文名 与INN一致,各论的增修订情况（1）：名称与性状,含量限度 （原料药） 为了能正确反映药品的含量，一般应换算成干燥品或无水物计的含量。 按检查项下所规定的“干燥失重”或“水分”，分别写成（1）“按干燥品计算”或（2）“按无水物计算”； 如含挥发性有机溶剂且有机溶剂量明显影响含量结果时，也写明扣除， （3）“按无水物

7、与无溶剂物计算”，但所含挥发性有机溶剂如已包括在干燥失重之内，则仅写明“按干燥品计算”而不再扣除溶剂。,各论的增修订情况（1）：名称与性状,性状 （原料药） 色：样品的色泽应按照白色、类白色、微黄色、淡黄色、浅黄色、黄色这样的顺序排列（以黄色举例），如果两个色阶相邻，可用“或”来描述，如类白色或微黄色结晶性粉末。如果色阶之间相隔两个以上，应采用“至”来描述，如类白色至淡黄色结晶性粉末。 引湿性：更多品种中增加了对引湿性的描述（中国药典2005年版二部附录XIX J“药物引湿性指导原则）。实验时是关键信息。,各论的增修订情况（1）：名称与性状,溶解度（ 原料药） 对收录溶剂进行了适当的取舍，原则

8、是首选标准中用到的溶剂及重结晶溶剂；选择常用试剂，考虑环保因素；对于难溶的样品，应考虑特殊溶剂，如酸性溶液和碱性溶液或二甲基亚砜和二甲基甲酰胺等对试验有帮助的溶剂。 今后应加强对多晶型药物不同晶型溶解度的考察。,各论的增修订情况（1）：名称与性状,熔点（原料药） 一般情况下删去了大部分200以上且熔融分解的品种的熔点。 例：丁酸氢化可的松，达那唑，泼尼松，泼尼松龙 有些存在多晶现象的样品在研磨过程中容易造成晶型转变，对于这类原料应注意观察转晶过程是否能稳定重现，转晶是否完全，熔点的测定结果是否稳定，如稳定应定入标准；否则可考虑删除熔点项。 应关注晶型和药效的关系。如确需利用熔点作为控制晶型的手

9、段，则标准中应收入。,各论的增修订情况（1）：名称与性状,比旋度（原料药） 主要区别比旋度和旋光度两个项目。比旋度作为光学异构体的物理性质，列在“性状”项下；旋光度作为检查外消旋体混合物中两对映异构体的比例的简易方法，列在“检查”项下，限度一般定为+0.1-0.1。 比旋度测定时所选择的溶剂尽量与欧美药典或相关文献一致，使最终限度具备可参考性，另外关于测定温度，附录要求为20，如果测定温度不同于20，应在个论项下明确测定温度（如：葡萄糖的测定）,各论的增修订情况（1）：名称与性状,吸收系数（原料药） 并非所有品种均收载了吸收系数。通常在同品种制剂的含量测定、溶出度和含量均匀度测定时如果采用吸收

10、系数法时，测定原料的吸收系数。测定吸收系数应采用对照品级的原料药。上版多为定值，现版一般修订为范围。 例：烟酰胺（增加此项目）,各论的增修订情况,各论的增修订情况（1）：名称与性状 各论的增修订情况（2）：鉴别 各论的增修订情况（3）：安全性检查 各论的增修订情况（4）：有效性检查 各论的增修订情况（5）：含量测定,各论的增修订情况（2）：鉴别,常用方法：化学反应、UV、IR、色谱法等。 收载原则：要求专属性较强、重现性好、灵敏度高，以及操作简便、快速等。毒性大的、放射性强的、有悖于环保的化学反应，删除。衍生化物熔点鉴别反应，删除。部分品种列出了两种组合供选择。 （1）原料药：一般收入3-5个

11、鉴别，一般情况下红外光谱是必不可少的，兼顾功能团的化学鉴别和光谱及色谱鉴别。 （2）制剂：一般收2-3个鉴别，以化学反应、色谱和紫外光谱鉴别为主，部分制剂采用了红外光谱鉴别。根据辅料对样品提取结果的影响不同，采用了全谱比较或限定特征波数两种方式。,各论的增修订情况（2）：鉴别,化学反应 要选用反应明显、专属性较强的方法，且试剂易得、毒性较低。毒性大的、放射性强的、有悖于环保的，删除。 衍生化物熔点鉴别反应，删除。,各论的增修订情况（2）：鉴别,红外光谱 红外光谱集，将出第四卷，谱号是唯一性的，如第四卷重新收录了上卷已收录品种的图谱，则上卷图谱作废。 红外光谱广泛应用于原料药的鉴别中，2010年

12、版药典增加了红外光谱在制剂鉴别中的应用。如样品制备方法能够较好地排除辅料的干扰，则采用全谱比较法；如不能，则采用了特征波数法。 对于具有同质异晶现象的药品，应选用有效晶型的图谱，或分别与同晶型对照品/光谱比较；晶型不一致，需要转晶的，应规定转晶条件，给出处理方法和重结晶所用溶剂。,各论的增修订情况（2）：鉴别,红外光谱 供试品的制备：辅料的干扰 采用了全谱的品种 采用了特征波数的品种,各论的增修订情况（2）：鉴别,色谱法 一般多用于制剂，液相色谱和薄层色谱均有应用。特别是检查或含量测定项下已采用色谱法，可附带引用。薄层色谱和液相色谱可选做其一。 例：十一酸睾酮注射液和软胶囊,各论的增修订情况,

13、各论的增修订情况（1）：名称与性状 各论的增修订情况（2）：鉴别 各论的增修订情况（3）：安全性检查 各论的增修订情况（4）：有效性检查 各论的增修订情况（5）：含量测定,各论的增修订情况（3）：安全性检查,颜色与澄清度、细菌内毒素、无菌、微生物限度、无机离子等,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（特点概述） 对部分品种的杂质进行了定性研究，确定了结构，从而为实现对已知杂质和未知杂质的区别控制，同时也为科学制订检查方法的系统适用性要求提供了基础保障。 近600个品种增加了有关物质项目 优化方法（TLC改HPLC，增加了系统适用性试验要求等） 限度更为严格,各论的增修订情况（3）：安全

14、性检查,有关物质（关于杂质） 已知杂质在各论中第一次出现首先用化学名，括号内增加了对杂质的简写，以罗马数字杂质I、II等表示，以后在该各论中再次出现即采用简写。 从2010年开始，药典会审定的国家化学药品标准的后面列杂质序号、结构式、分子式、分子量、中文化学名、英文化学名。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于杂质的来源） 提取和发酵来源的药品：共存物、发酵过程中的原料或主成分的降解产物 半合成来源的药品：共存物、共存物的反应产物、副产物与主成分的降解产物。 合成来源的药品：反应原料、合成中间体、副产物、由反应原料中杂质带来的反应产物与主成分的降解产物。,艾拉莫德杂质的定性分析,

15、电喷雾离子化源（ESI），正离子检测,关注杂质的来源,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于分离及检测方法）,IC GC CE PC,一般采用色谱法 TLC HPLC （反相、正相、凝胶）,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于分离及检测方法） 色谱柱：有C18、C8等，以C18为最常用，目前C18色谱柱类型也很多，不同基质、不同载碳量、不同封端处理方式、不同纯度、不同粒径、孔径、柱长等，影响因素较多；特殊填料在各论中予以注明。其它的填料也有采用，如离子色谱填料等。对部分品种各论中列出了推荐牌号的色谱柱，但同时注明“或效能相当”。 （药典注释）,各论的增修订情况（3）：

16、安全性检查,有关物质（关于分离及检测方法） 流动相：在保证灵敏度的前提下，一般以恒组成洗脱为主；但如果色谱图记录时间太长必然会损失灵敏度，必要时可采用梯度洗脱方式。 流动相以挥发性流动相为好，一般情况下尽量不加离子对试剂。 例：荧光素钠 例：法莫替丁氯化钠注射液,法莫替丁氯化钠注射液（有关物质）,原国家标准方法 恒组成洗脱 结果：23.6%,拟定标准方法 梯度洗脱 结果：28.3%,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于分离及检测方法） 检测器：一般采用UV，可采用蒸发光检测器、电化学检测器与荧光检测器。加强了对检测器参数的选择。波长的选择更加关注杂质的最大吸收或最佳检测参数，以提

17、高杂质的检测灵敏度。如难以兼顾杂质及样品可选择多波长检测。 谨慎选用蒸发光检测器，必要时对主要实验参数进行描述。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,盐酸多巴丁胺有关物质分离及紫外吸收图,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：分离度） 加强了分离度要求，通过分离度的限制来保证分离的重现性。因为标准趋向于对单个杂质的控制，那么杂质和主成分、杂质之间的分离度均要得到良好保证。 （1）采用杂质对照品； 荧光素钠，溴丙胺太林 尼莫地平，要求杂质I与主峰分离度应大于3.0； 枸橼酸氯米芬有关物质中要求其顺反异构体的分离度不得低于1.3。,例：有关物质（溴丙胺太林）,各论的

18、增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：分离度） （2）采用混合对照品（纯度较差的原料药）的方法。 采用混合对照品（即纯度较差但杂质组分组成与比例相对稳定的原料药）可以较好地保证分离的重现性。关键在于对照品的提供。 例：阿奇霉素,各论的增修订情况（3）：安全性检查,阿奇霉素系统适用性试验样品色谱图,有关物质（关于系统适用性试验要求：分离度）,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：分离度） （3）通过化学处理或其它方式产生杂质，应注意反应条件的优化，按面积归一化法计算主杂质占5%-10%为佳。 盐酸甲氯芬酯：通过水浴加热，产生水解产物峰，该

19、峰与主峰分离度应大于6.0； 双羟萘酸噻嘧啶 戊酸雌二醇,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：分离度） （4）采用其它方法制备系统适用性试验用样品。采用结构性质相近的标志性物质。 例：茶碱，采用茶碱和可可碱配成溶液作为系统适用性试验溶液，要求两者的分离度大于2.0。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：分离度） （5）如无法长期获得该杂质对照品时，采用相对保留时间定位。如能在标准中列出主成分的保留时间、色谱柱尺寸，可增强此法的可操作性。但此时，应特别注意色谱条件的耐用性考察。主峰出峰时间，在梯度洗脱的色谱系统中为保证方法的重现

20、性，应对主峰的出峰时间进行规定。 例：己酮可可碱通过梯度洗脱，在系统适用性试验中不仅规定相关杂质的分离度，同时规定己酮可可碱的出峰时间为12分钟。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：拖尾因子） 对于在色谱系统中峰型非正态型的色谱峰规定该色谱峰的拖尾因子是很有意义的，以保证色谱峰不会因拖尾严重，而导致杂质峰包裹在主峰中未被检出。 例：马来酸依那普利的色谱条件中，除规定相关杂质的分离度外，同时规定依那普利峰的拖尾因子不得过2.0。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：报告限） 通过规定小于对照溶液主峰面积的一定量的色谱峰可忽略不

21、计，这样可保证积分参数设置的合理性和一致性。 例：甘露醇。在供试品溶液的色谱图中，任何小于对照溶液主峰面积的0.05倍的峰可忽略不计。 例：丁酸氢化可的松。 例：十一酸睾酮 例：地塞米松,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于系统适用性试验要求：灵敏度试验） 通过配制灵敏度试验溶液（主成分浓度一般与报告限一致），并规定灵敏度试验溶液中主成分的信噪比，可以更好地保证方法的重现性、灵敏度和测定结果的准确性。 例：荧光素钠,ICH新原料药中的杂质指导原则 ICH Guideline on Impurities in New Drug Substances,ICH规定的杂质报告限鉴定限论证

22、限,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于定量方法） 杂质对照品外标法：若该杂质对照品，则单独列项，按外标法计算，应注意该杂质线性范围的考察。请注意：如引入了定量杂质对照品，则该杂质对照品的质量应满足定量要求。 例：荧光素钠。 例：对氨基水杨酸钠（间氨基酚） 例：地塞米松,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于定量方法） 加校正因子的自身对照法：若仅在实验过程中可提供相应质量和数量的杂质对照品，而长期提供符合要求的杂质对照品难度较大，则考察该杂质相对于主成分的校正因子（用于测定校正因子的杂质对照品应按定量对照品的要求进行标化，某些结构与主成分极为相似分子量极为接近的杂质

23、对照品可免作），采用加校正因子（超出0.91.1）的主成分自身对照法进行检查。 例：,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于定量方法） 不加校正因子的主成分自身对照法：大多数品种采用了这种方法对杂质进行控制。 例： 峰面积归一化法：在2010版化学药品中很少使用，在保证0.1%或0.05%、甚至更低含量的杂质能被检出的情况下，主成分浓度就会很高，如采用该法应考虑最小组分和最大组分的检测响应是否在主成分的线性范围内。谨慎使用。 例：大豆油,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（GC） 填充柱改毛细管柱，恒温改梯度洗脱，增加了系统适用性要求 例：壬苯醇醚（游离环氧乙烷）,各论的

24、增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（TLC） 优化方法，分离度试验和灵敏度试验 例：司坦唑醇 例：盐酸黄酮哌酯（与已知杂质斑点比较),各论的增修订情况（3）：安全性检查,根据结构选择多种有关物质检查方式 例：酒石酸美托洛尔 HPLC/TLC,各论的增修订情况（3）：安全性检查,有关物质（关于限度） 理论上讲，应该是根据杂质的毒性、用药量等多种因素综合考虑的，但由于缺乏对杂质的基础性研究，故一般国内产品质量能达到欧美要求的，基本上与其保持一致。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,残留溶剂 本版药典加强了对有机溶剂残留的检查， 更多地采用了顶空进样方式和程序升温梯度洗脱的方法， 部分品种采用

25、标准加入法，该方法可提高方法的准确度。 标准起草过程中，由于绝大部分企业未提供生产工艺资料，起草单位无法了解各药厂使用的全部有机溶剂，故标准中未能列出该品种使用的全部溶剂。但这个缺口在凡例中给予了弥补。,安全性：残留溶剂,凡例：对于生产过程中引入的有机溶剂，应在后续的生产环节予以有效去除。除已明确列有“残留溶剂”检查的正文品种必须依法进行该项检查外，其他未在“残留溶剂”项下明确列出的有机溶剂与未在标准中列有此项检查的品种，如生产过程中引入或产品中残留有机溶剂，均应按本版药典附录“残留溶剂测定法”检查并应符合相应溶剂的限度规定。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,颜色与澄清度 此项检查多用于供

26、制备注射剂的原料药的质量控制。本版药典加强了对溶液颜色的检查，使溶液浓度更合理，浓度与制剂规格相匹配，多规格的品种，与最大规格匹配。 强化了对注射剂颜色的控制。基于注射剂应选用优质原料药进行生产的理念，注射剂的颜色一般情况下与原料药相同。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,渗透压摩尔浓度 项目名称统一写为“渗透压摩尔浓度”，结果根据具体情况描述为“渗透压摩尔浓度为”、“毫渗透压摩尔浓度为”或“渗透压比为”。渗透压比限度原则上定为0.91.1。 大容量注射剂与部分滴眼剂增加了渗透压控制。 例：地塞米松磷酸钠滴眼液 例：把替硝唑注射液（均为大容量规格）改名为替硝唑氯化钠注射液，把甲硝唑注射液中大

27、容量规格改名为甲硝唑氯化钠注射液，增加渗透压检查，使归类更科学合理。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,高分子杂质 生化药品 提取过程中残余的蛋白或核酸等大分子物质 抑肽酶：三根凝胶柱串联 抗生素药品 活性成分自身聚合和残余蛋白等 自装凝胶柱， 头孢地嗪：商品凝胶柱,各论的增修订情况（3）：安全性检查,抑菌剂 苯甲醇或苯酚： 例：克林霉素磷酸酯注射液，鱼肝油酸钠注射液 苯扎溴铵或苯扎氯铵 对羟基苯甲酸酯类（甲酯、乙酯、丙酯） 其它,各论的增修订情况（3）：安全性检查,细菌内毒素 增加项目，热原改细菌内毒素，限度更为合理。 静脉用注射剂及用于无菌分装静脉用注射剂的原料药增加了细菌内毒素控制项目

28、。 例：地塞米松磷酸钠注射液（增加细内） 例：亚硫酸氢钠甲萘醌注射液（增加细内、无菌）,各论的增修订情况（3）：安全性检查,无菌 132个品种增加了此项检查。对于直接分装的原料药增加了此检查项目。 微生物限度 对于在制剂通则中标识为【微生物限度】的部分品种，在各论中详列了具体检查法。 由于标准起草时未能收集全部企业的产品，请相关企业关注药典方法对自身产品的适用性，必要时进行方法学验证并把相关资料报我委。,各论的增修订情况（3）：安全性检查,无机离子 增加项目，优化方法 例：荧光素钠（氯化物和硫酸盐） 重金属：注射液中的重金属检查 例：钆喷酸葡胺注射液,各论的增修订情况,各论的增修订情况（1）：

29、名称与性状 各论的增修订情况（2）：鉴别 各论的增修订情况（3）：安全性检查 各论的增修订情况（4）：有效性检查 各论的增修订情况（5）：含量测定,各论的增修订情况（4）：有效性检查,各论的增修订情况（4）：有效性检查,溶出度 本版药典对于更多口服固体制剂增加了溶出度检查。2010年版药典强调了各实验参数与限度的合理性。 溶出度是原料药有多晶现象的口服固体制剂质控的有效手段。 科学的溶出度检查方法应该与体内研究资料相结合。,非洛地平片,各论的增修订情况（4）：有效性检查,各论的增修订情况（4）：有效性检查,释放度 对于肠溶制剂，增加释放度项目，或优化测定法 例：对氨基水杨酸钠肠溶片（增加释放度

30、） 对于缓控释制剂，不同企业的释放度检查方法和限度各部相同。在标准起草时需要企业提供在研发时的全部药学和临床资料方能科学评价，而这恰恰是目前欠缺的。故本版药典对缓控释制剂仍持谨慎收载的态度。,各论的增修订情况（4）：有效性检查,含量均匀度 本半年药典附录规定：每片（个）活性成分含量小于或等于25mg或活性成分含量小于每片（个）重量的5的品种应设定该检查项目；复方制剂仅检查符合上述条件的组分或指标性组分即可。但由于附录和品质是同时进行的，未做到先行，所以相当一部分品种未有该项检查，需起草单位补充。 可用含量测定项下10片的测定结果。具体测定法在含量测定下。,各论的增修订情况（4）：有效性检查,组

31、分测定 建立合适的分析方法，对于混合物中各组分的含量进行控制。 例：大豆油（脂肪酸组成） GC，填充柱改毛细管柱，恒温改程序升温 控制指标更多：小于十四碳的饱和脂肪酸（0.1%）、十四烷酸（0.2%）、花生酸（1.0%）、二十碳烯酸（1.0%）、山嵛酸（1.0%）,各论的增修订情况（4）：有效性检查,雾滴（粒）分布 例：丙酸倍氯米松气雾剂 例：丙酸倍氯米松粉雾剂 粒度：混悬型注射液 例：曲安奈德注射液,各论的增修订情况,各论的增修订情况（1）：名称与性状 各论的增修订情况（2）：鉴别 各论的增修订情况（3）：安全性检查 各论的增修订情况（4）：有效性检查 各论的增修订情况（5）：含量测定,各论

32、的增修订情况（5）：含量测定与规格,原料药含量测定变化的主要特点 非水滴定法革除汞盐 终点变色不明显的指示剂法改电位滴定法 例：丙硫氧嘧啶 紫外或滴定或重量法等改HPLC 例：荧光素钠（重量法改HPLC法）,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（原料药） 1.1容量分析 原料药纯度达到98.5以上时，首选容量分析法。本次药典修订中含量测定项一个最大的变化就是非水滴定中汞盐的革除。 在非水滴定中，当滴定有机碱氢卤酸盐类药物时，因氢卤酸在冰醋酸中显酸性，影响滴定终点，所以在滴定前需加入醋酸汞的冰醋酸溶液，使氢卤酸生成难离解的卤化汞，以排除氢卤酸的干扰；但由此引出了汞污染的问题。故应少用

33、高氯酸滴定法测定有机碱氢卤酸盐类药物含量，以避免汞污染。因此，在氢卤酸原料进行非水滴定时，如何去除醋酸汞成为主要问题。,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（原料药） 加乙酸酐的高氯酸电位滴定法： 应用范围：与原来采用醋酸汞滴定的方法一致，只是通过溶剂的选择，使终点突跃增大从而取代汞盐的使用。由于适量乙酸酐的加入使溶质的碱性增强，从而使滴定突跃明显增加，其结果是既革除了汞盐的污染，又能排除人为因素的干扰。因此该方法也是2010版药典中采用最多的方法，共有盐酸二甲双胍等31个品种采用该方法。该方法最重要的就是溶剂的筛选，通常可采用冰醋酸-乙酸酐的溶剂组合，通过调整两者的比例，达到终点

34、易观察的要求。当样品在冰醋酸中溶解性差时，可采用甲酸等其他溶剂进行溶解(如盐酸赛庚啶等品种)。,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（原料药） 以醇类为溶剂的氢氧化钠电位滴定法： 应用范围：凡是可溶于或略溶于醇类溶剂的品种，可优先考虑使用该方法。正是由于要求样品在醇类溶剂中的溶解性，使该方法对样品的适用范围有一定的局限性，在2010版药典中有14个品种采用该方法（如：盐酸洛贝林等）。通常醇类溶剂的的加入量以30-70ml为宜，盐酸的加入量一般为5ml左右，对于那些分子结构中含有2分子盐酸的药物以及第一个突跃点已经足够大的样品也可以只加醇，不加盐酸（如：盐酸氟桂利嗪等）。该方法通常有

35、两个突跃点，第一个突跃是滴定游离酸根，第二个突跃点是滴定键合酸根的。因此在标准中应说明以第几个突跃点所消耗的体积计算，以避免误操作做成结果不准确。,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（原料药） 上述两种方法最重要的是要与原方法进行比较，这次起草过程中发现，许多品种两个方法比较相差较大，特别是以醇类为溶剂的氢氧化钠电位滴定法，与原方法比较时有结果高于原方法的倾向，有的品种会高出1.5%，有些起草单位采取提高含量限度的方式解决。实际上这样的差异作为容量滴定差异是显著的，应进一步做工作弄清原因，不能简单靠提高限度解决问题。基于以上原因，有许多品种在审稿过程中，尽管起草单位做了工作，但结

36、果不好的依然采用原方法，2010版药典中仍有28个品种保留了原方法，还有待改进。,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（原料药） 紫外分光光度法 原料药一般避免采用UV法，必要时，采用对照品同时测定。对于吸收系数小于100的原料药、多组分原料药尽量避免采用UV方法。 例： 例：五肽胃泌素（E值70）、细胞色素C（E值23.0）,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（原料药） 色谱法 对于纯度略低的品种更多地关注了含量测定方法的专属性，一般采用高效液相色谱法，一般用外标法 。 例：核黄素磷酸钠的含量测定由原来的紫外吸收系数法修改为高效液相色谱法。从核黄素磷酸钠注射液的含量

37、测定两种方法比较的结果中可以看出，新建方法可以将有关物质完全分开，使含量测定结果更接近于真实。,例2：含量测定（核黄素磷酸钠）,例2：含量测定（核黄素磷酸钠）,按干燥品计算，含核黄素(C17H20N4O6)应为74.079.0。,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（原料药） 原子吸收光谱法 对于部分离子型原料药加强了含量测定，原子吸收光谱法有更多应用。 例：乳酸钠林格注射液（检查：滴定法测总氯量；含量测定：原子吸收分光光度法测定氯化钾、氯化钠、氯化钙）,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,制剂 滴定法改HPLC：例：丙硫氧嘧啶片，异烟肼片 永停滴定法改HPLC：例：对氨基水杨

38、酸钠肠溶片 UV法改HPLC法 例：丙酸倍氯米松气雾剂（衍生化紫外法改HPLC法） 例：达那唑胶囊,例2：含量测定（核黄素磷酸钠）,含核黄素应为标示量的90.0%115.0%。,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,制剂 更加注重方法的专属性，更多地采用HPLC法，不同剂型的含量测定方法应尽可能统一。一般采用HPLC外标法。 考虑到供试品溶液的制备，膏剂更多采用内标法。 例：丙酸氯倍他索乳膏 例：复方醋酸地塞米松乳膏,2010版药典二部中仍采用内标法测定的品种,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,制剂 各论中有含量均匀度检查项目且测定方法与含量测定相同的，测定法在“含量测定”项下描述。

39、复方制剂需建立方法对各有效成分的含量进行测定。 用旋光度方法测定含量时，如大输液中葡萄糖的含量，建议注明温度，其常用值为25测定数据（2.0852）。,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,含量测定（色谱法） 有关物质项下的方法采用梯度洗脱记录时间太长，则含量测定方法可修改为恒组成快速洗脱，只要保证主成分和杂质分开即可。 例：戊酸雌二醇，荧光素钠,各论的增修订情况（5）：含量测定与规格,规格 对成盐原料药的制剂规格，明确了“以计”。 例： 苯磺酸顺阿曲库铵（需修订）,汇报内容,现代分析技术的应用进一步扩大,柱色谱 纸色谱 薄层色谱 气相色谱,色谱法在2010年版药典二部的应用,高效液相色谱

40、离子色谱 凝胶色谱 毛细管电泳,正相色谱 反相色谱 离子对色谱,色谱法的应用：薄层色谱,2010版药典（二部）采用TLC的品种数量，共435个,色谱法的应用：气相色谱,色谱法的应用：高效液相色谱,19世纪70年代中期，HPLC仪开始出现，主要填料：10 m 的无定型硅胶颗粒。 70年代后期，发展了反相液相色谱。 80年代，HPLC 被广泛应用于化合物的分离，主要填料：粒径为5 10 m 球形硅胶。 90年代早期，粒径为 5 m 的高纯硅胶，即所谓的 B 型硅胶被发展，并成为这个行业填料的标准，这种 B 型硅胶含有微量的金属。 90年代后期，为了满足快速分离的需求，发展了 3 m 或 3.5 m

41、 的球形硅胶，其作用和性能逐渐的获得了人们的认同和接受。手性色谱柱的开发。 21世纪早期，为适应超快速的分离要求，粒径小于 2 m 的填料被开发出来，发展出了整体柱、无机和有机杂化硅胶。 目前，市场上流行的分析用的 HPLC 硅胶基质填料主要为 B 型硅胶。,填料发展史,色谱法的应用：高效液相色谱,填料发展史,色谱法的应用：高效液相色谱,技术A：低金属不纯物的含量,色谱法的应用：高效液相色谱,技术B：不同的配体密度,色谱法的应用：高效液相色谱,Inersil（ ODS-2，5m，4.6mm250mm）柱色谱图 （阿奇霉素）,色谱法的应用：高效液相色谱,迪马公司（钻石，5m，4.6mm250mm

42、）柱色谱图,色谱法的应用：高效液相色谱,Waters(XBridgeTMShield RP18 5m，4.6mm250mm)柱色谱图,色谱法的应用：高效液相色谱,资生堂MG5m，4.6mm150mm色谱柱图谱,色谱法的应用：高效液相色谱,2010版药典二部中色谱柱的使用情况,色谱法的应用：高效液相色谱,离子对色谱法是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。 分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐，如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等。另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对。分析酸性物质

43、常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐。 离子对色谱法常用ODS柱（即C18），流动相为甲醇-水或乙腈-水，水中加入310 mmol/L的离子对试剂，在一定的pH值范围内进行分离。被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关。,色谱法的应用：高效液相色谱,基本原理 离子色谱中发生的基本过程就是离子交换，因此，离子色谱本质上就是离子交换色谱。 在离子色谱的基本组成中，重要的和与其他高效液相色谱不同的就是抑制器和电导检测器，离子色谱用的泵是PEEK材料衬里的不锈钢泵。,色谱法的应用：离子色谱,离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸等离子型化合物的分离

44、。,固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季铵基（阴离子交换树脂）。 被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换，根据各离子与离子交换基团具有不同的电荷吸引力而分离。,色谱法的应用：离子色谱,色谱法的应用：离子色谱,阳离子交换柱 山梨醇及制剂 甘油果糖氯化钠注射液 甘露醇及制剂 利巴韦林及制剂 盐酸二甲双胍及制剂 苹果酸及制剂 富马酸及制剂,阴离子交换柱 肝素钠及制剂 帕米磷酸二钠及制剂 氯膦酸二钠及制剂 硫酸软骨素钠及制剂,例：离子色谱（氯膦酸二钠）,照离

45、子色谱法（附录 J）试验 用阴离子交换色谱柱（推荐使用IonPac AS11-HC，或效能相当），柱温30， 以水为流动相A，以0.1mol/L氢氧化钾溶液为流动相B，梯度洗脱，流速为1.2 ml/min。 检测器为电导检测器，检测方式为抑制电导检测。,用于氯膦酸二钠原料药的有关物质与制剂的含量测定,固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。 它利用分子筛对分子量大小不同的各组分排阻能力的差异而完成分离。 常用于分离高分子化合物，如多糖、多肽、蛋白质、核酸等。,色谱法的应用：凝胶色谱法,

46、色谱法的应用：凝胶色谱法,固定相多孔性凝胶 流动相水凝胶过滤色谱(GFC) 流动相有机溶剂凝胶渗透色谱(GPC) 渗透系数（Kp）仅取决于待测分子尺寸和凝胶孔径大小，与流动相的性质无关。,分离机制： 利用被测组分分子大小不同、在固定相上选择性渗透实现分离 排阻色谱可以将尺寸不同的高分子按照保留时间分开。保留时间越小的高分子（也就是流经色谱柱需要时间越短的高分子）的分子量越大，相反，保留时间越大的高分子（也就是流经色谱柱需要时间越长的高分子）的分子量越小。,2010版药典二部采用常压凝胶色谱的品种,2010版药典二部采用高效凝胶色谱的品种,2010版药典二部采用高效凝胶色谱的品种,2010版药典

47、二部采用电泳法的品种,色谱法的应用：电泳及毛细管电泳法,2010版药典二部采用CE的品种,例：毛细管电泳（抑肽酶）,SDS-PAGE凝胶电泳图,例：毛细管电泳（抑肽酶）,生物分析（芯片）仪对抑肽酶分子量和纯度的测定结果,兰州大得利生物化学制药（厂）有限公司提供的抑肽酶的分子量和其它两个厂家的分子量有明显差异。 抑肽酶的纯度测定结果7批供试品都接近100%，可能是抑肽酶和有关物质的分子量相差不大，生物分析（芯片）仪采用的是SDS-PAGE电泳分离的原理，不能将其分离，不能作为分析抑肽酶纯度的方法。,例：毛细管电泳（抑肽酶）,sigma抑肽酶对照品毛细管电泳谱图,例：毛细管电泳（抑肽酶）,供试品毛

48、细管电泳谱图（杭州澳亚生物技术有限公司生产，批号：071015）,例：毛细管电泳（抑肽酶）,色谱法的应用：毛细管电泳,分离模式 毛细管区带电泳CZE 胶束电动毛细管色谱MEKC 毛细管等电聚焦CIEF 毛细管凝胶电泳CGE 毛细管电色谱CEC,高分子化合物的分析 手性化合物的分析,色谱法的应用：液相色谱常用检测器,光学检测器：紫外、荧光、示差折光、蒸发光散射（通用型检测器） 电化学检测器：极谱、库仑、安培 电学检测器：电导、介电常数 质谱检测器 选择性检测器：灵敏度较高,2010版药典二部采用检测器情况,色谱法的应用：液相色谱常用检测器,色谱法的应用：蒸发光散射检测器,优点： 适用于没有特征紫

49、外吸收或紫外吸收很弱的待测物，使用UV时灵敏度更低；无需衍生化而直接测定，避免了衍生带来的误差。 可以应用有强紫外吸收的试剂，如氯仿、丙酮等。 适用于组分复杂样品的分析，可以进行梯度洗脱，基线平稳。 通用型检测器，只要待测物挥发性低于溶剂，即可适用。对不同物质，ELSD相应因子的变化比其它检测器要小得多。 对环境影响不灵敏，室温下即可操作。 没有溶剂前缘峰，适用于保留时间短的物质的检测。 与LC-MS的色谱条件一致，可直接进行方法转换。,色谱法的应用：蒸发光散射检测器,影响ELSD响应的因素 载气流速、雾化器设计与温度、流动相的组成和流速等影响雾化过程。 被分析物的浓度和体积质量决定了进入光散射池的气溶胶中的颗粒的直径。 被分析物的折射指数、光源发出的光的强度和波长、光电倍增管的位置等影响散射光强度。 光电倍增管的灵敏度和入射光的强度决定了检测的效率，反映为实验者所观测的峰面积。,色谱法的应用：蒸发光散射检测器,色谱法的应用：蒸发光散射检测器,图 硫酸核糖霉素有关物质色谱图 （蒸发管温度：65，分流模式）,色谱法的应用：蒸发光散射检测器,图 硫酸核糖霉素有关物质色谱图 （蒸发管温度：11