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1、在临床微生物检验工作中，标本的正确选择、采集和运送是保证实验室质量的重要环节，是实验室工作准确和有效的前提。,第一节 标本的采集和处理原则,一、标本采集的一般原则,1.早期采集 2.无菌采集 3.根据目的菌的特性用不同的方法采集 4.采集适量标本 5.安全采集,二、标本的处理,一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。,其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4环境中，脑脊液等则要在25保存。
2、 患者标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。,临床常见微生物学检验标本通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水、腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物等，下面分别介绍各种标本的采集方法及检测出不同病原体的临床意义。,第二节 血液,一、 标本采集,1.皮肤消毒程序 严格执行以下三步法: (1) 70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒以上。 (2) 1%2%碘酊作用60秒或10 %碘氟6090秒， 从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。 (3) 70%酒精脱碘：对碘过敏的患者，用70
3、%酒精消 毒60秒，待酒精挥发干燥后采血。,2.采血部位 通常采血部位为肘静脉。 疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。 对疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。,3. 静脉穿刺和培养瓶接种程序 在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手 套固定静脉，不可接触穿刺点。 (2) 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养 瓶，或严格按厂商推荐的方法采血。 (3) 血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。 立即送检，切勿冷藏。 4.采血量 自动化仪器要求成人采血量是810 ml/瓶，儿童15 ml/瓶。,5.血培养次数和
4、采血时间 只要怀疑血液细菌感染，应即刻采集。 采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在1h内采集23次做血培养。 对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.51h 采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。 入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采2 份。 6.标本运送 采血后应该立即送检,如不能立即送检，可室温保存，切勿冷藏。,二、血液中常见的病原体,三、临床意义,血液感染是一种危重的全身感染，对其进行病原菌的检验，提供病原学的诊断极为重要。 当少量细菌侵入血液循环，为一过性，不繁殖或很少繁殖，不引起或仅引起轻微的炎症反应者称为菌血症,若有全身性炎症反应的表现称为脓毒症。 血液
5、标本的细菌培养是诊断菌血症的基本而重要的方法，若从患者血液中检出细菌，一般视为病原菌感染，提示有菌血症。,常见的菌血症或脓毒症有： 葡萄球菌菌血症 由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）及凝固酶阴性葡萄球菌引起的菌血症和脓毒症逐年增多，占菌血症的10%15%，临床表现明显，发病急，中毒症状重。,肠球菌菌血症 近年来明显增多，约占菌血症的10%。常见泌尿生殖道、消化道和腹腔感染的患者，易并发心内膜炎。此菌可对多种抗生素耐药，病情较重。,革兰阴性杆菌菌血症 主要侵犯危及机体免疫功能低下的患者。常可引起泌尿生殖道、胃肠道、胆道及呼吸道感染。,厌氧菌菌血症 厌氧菌常寄居于口腔、肠道和泌尿生殖道，并引起
6、相应部位的感染。 真菌血症 常由条件致病性真菌引起，有假丝酵母菌、曲霉菌和毛霉菌等，以白假丝酵母菌最多见，多数伴有细菌感染。,第三节 脑脊液,一、标本采集,采集脑脊液一般用腰椎穿剌术获得，特殊情况可采用小脑延髓池或脑室穿刺术。 标本采集后要立即送检、化验，一般不能超过1小时。 腰穿法无菌取脑脊液35ml，置无菌管内立即送检。培养脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等苛养菌时，应将标本置于35条件下保温送检，不可置冰箱保存。但做病毒检查的脑脊液标本应放置冰块，可在4保存72h。,二、脑脊液中常见病原体,三、临床意义,细菌性脑膜炎：是中枢神经系统感染的常见类型，其中以流行性脑脊髓膜炎为常见，有的呈暴发型，病
7、情严重，病死率较高；多发年龄在529岁，冬春季多发，可用青霉素类、磺胺类、头孢霉素类抗生素治疗。结核性脑膜炎最常见，近几年呈回升趋势，为防治重点。,真菌性脑膜炎：最常见于隐球菌脑膜炎，其他的真菌性脑膜炎如白假丝酵母菌、球孢子性脑膜炎日渐增多，特别是免疫功能低下和恶性疾病患者易并发，如AIDS、恶性肿瘤，严重糖尿病、SLE等患者易发生。,流行性乙型脑炎：是一种人兽共患的自然疫源性疾病。传染源为患者和家禽、家畜及野生动物，蚊虫为传播媒介，经蚊虫叮咬、吸血而传播，人群对本病普遍易感，感染后多数人无症状而成为隐性感染。但可获得持久免疫力，再次发病者极少见。少数患者病情严重，病死率高，可留有后遗症。,肠
8、道病毒对中枢神经系统的危害性已逐渐引起人们的关注和重视。除原有脊髓灰质炎常见外，还可见多种病毒引起脑膜炎或脑炎，还不断发现新的肠道病毒（新肠道病毒6871型）引起的脑膜炎及脑炎。,第四节 脓 液,一、标本采集,先清洗，再采集。 脓性标本是用针和注射器抽吸采集，如果没有得到抽吸物，也可以用拭子在伤口深部采集渗出物。 脓肿标本以无菌注射器抽取为好，也可由排液法取得。 厌氧菌感染的脓液常有腐臭应予注意。特别要注意避免正常菌群所污染以及由采集至接种前尽量避免接触空气。,二、脓液中常见病原体,三、临床意义,由创伤、手术、侵入性器械操作等外科治疗引起的感染最为常见。细菌造成伤口感染一般认为需每克组织内细菌
9、数量在105 106个以上。 外伤性创伤感染以葡萄球菌和链球菌多见，且易发生混合感染。 烧伤创面最常见革兰阴性杆菌感染，如铜绿假单胞菌等，次为革兰阳性球菌感染，可单独也可混合细菌感染。,急性化脓性骨关节炎常由金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌感染所致。 放线菌感染可发生在免疫功能下降时或由于拔牙、口腔黏膜损伤时。,第五节 痰液,一、标本采集,自然咳痰法 以晨痰为佳，尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，将痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应1ml。,支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引
10、法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。,小儿取痰法 用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。 注意：对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。,二、痰标本中常见病原体,三、临床意义,下呼吸道感染是最常见的呼吸道感染症，主要指肺实质性炎症的肺炎和支气管黏膜炎症的支气管炎，是我国常见病和病死率高的感染性疾病。 痰标本的细菌学检查对呼吸道感染的诊断有重要意义。,病毒性肺炎,真菌性肺炎,支
11、原体肺炎,细菌性肺炎,第六节 粪便,一、标本采集,用药前自然排便，采集脓血、黏液部分23g。 外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材。 液体便取絮状物12ml,置无菌容器内送检。 如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集标本。,粪便标本送检 对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内粪便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件的提倡使用运送培养基。,消化道溃疡、幽门螺杆菌标本可取胃窦和胃体等部位各一块胃黏膜活检标本，置入无菌生理盐水中立即送检，或将标本放于运送培养基，于4保存，24h内送检。,二、粪便中常见的病原体,三、临床意义,细菌性痢疾 （bacillary dysentery） 简称菌痢
12、，主要是指由志贺菌引起的肠道传染病，是肠道感染性腹泻最常见的病种。,细菌、真菌、病毒引起的胃肠炎 此症最为常见，由多种病原体感染所致，临床常表现为腹泻、呕吐、高热等症状。胃肠炎的病毒感染常见于轮状病毒等，常引起幼儿腹泻。,细菌性食物中毒 常可危及生命，常见于沙门菌、副溶血弧菌、致病性大肠埃希菌、葡萄球菌、肉毒梭菌、腊样芽胞杆菌食物中毒。多发生在夏秋季，以暴发和集体发病为特征，是一种严重的病症。,致病性大肠埃希菌的肠道感染 可分为5类，详见第八章。 消化性溃疡幽门螺杆菌感染主要部位是胃及十二指肠球部，大量研究及临床证明胃炎、消化性溃疡主要是HP所引起，因此消化性溃疡经抗感染治疗取得很好的疗效。,
13、第七节 尿液,一、标本采集,采集方法 采集清洁中段尿。 必要时导尿或膀胱穿刺留尿标本，但要注意导尿容易引起逆行性感染。,采集容器的要求：洁净、无菌、加盖、封闭、防渗漏、广口、容积应 50 ml、盒盖易于开启，不含防腐剂和抑菌剂。 标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），4冷藏保存时间不得超过8小时。但应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。,二、常见病原体,尿液中常见病原体： 80%为革兰阴性杆菌，其中以大肠埃希菌最为常见。 20%为革兰阳性菌，其中以肠球菌为多见。,三、临床意义,尿路感染 urinary tract infection
14、 是指大量微生物在尿路中生长繁殖而引起的尿路炎症。 可分为上尿路感染（主要有肾盂肾炎）和下尿路感染（主要有膀胱炎和尿道炎）。 为最常见的感染性疾病，发病率约占人口的2%。多见于成年女性。,尿路感染主要经尿道口上行感染所致，极少数为血行感染。 尿路感染常见肾盂肾炎（急性和慢性）、膀胱炎（急性为主）、尿道炎（细菌性尿道炎、淋菌性尿道炎、非淋菌性尿道炎）、前列腺炎（慢性常见）等。 尿路感染需要明确部位和急性与慢性，主要依病原菌检测，还要紧密结合临床综合考虑做出诊断。,第八节 生殖道标本,一、标本采集,采集前清洁、消毒尿道口及外阴，尿道分泌物可将无菌棉拭子伸入尿道34cm捻转拭子采集。 阴道分泌物采集
15、时可用无菌棉拭子自阴道深部或阴道穹隆后部，宫颈23cm处，转动并停留1030s取分泌物。,淋球菌培养需保温及时送检，衣原体、支原体等培养无法及时送检时应4保存。,二、常见的病原体,生殖道标本主要用以检查引起性传播疾病（sexually transmitted disease,STD）的病原体。性传播疾病是指以性行为为主要传播途径的一组传染病。 STD有二十几种，1991年8月我国卫生部确认8种STD为重要防治与监测的病种,8种STD分别是：艾滋病、淋病、梅毒、软下疳、性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹。 其病原体分别为：人类免疫缺陷病毒、淋病奈瑟菌、梅毒螺旋体、杜克雷嗜血杆菌
16、、沙眼衣原体L1、L2、L3血清型、支原体和衣原体、人类乳头状病毒、人类单纯疱疹病毒2。,第九节 厌氧培养标本的采集,一、 标本采集与运送,标本的采集与运送是否适当，对厌氧菌培养能否成功至关重要。 注意： 标本不能被正常菌群所污染。 应尽量避免接触空气。,标本的采集方法 一般情况下，应从无正常菌群寄居的部位采取标本。,不宜做厌氧菌培养 鼻咽拭子；齿龈拭子；痰和气管抽取物；胃和肠道内容物、肛拭；接近皮肤和黏膜的分泌物；褥疮溃疡及黏膜层表面；排出的尿或导尿；阴道或子宫拭子；前列腺分泌物。,经皮肤黏膜组织采集标本时，皮肤表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。 采取标本时应尽量避免接触空气，多使用
17、针筒抽取，减少标本与空气接触的机会。,二、临床常见的厌氧菌,厌氧菌（anaerobic bacteria） 是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的细菌。,厌氧菌分为两大类：一类是有芽胞的革兰阳性梭菌，另一类是无芽胞的革兰阳性及革兰阴性的杆菌与球菌。 根据革兰染色性、形态、鞭毛、芽胞、荚膜和代谢产物等可将无芽胞厌氧菌分成40多个菌属，300多个菌种和亚种；有芽胞厌氧菌只有一个菌属，即梭菌属，共130个种。,重要的厌氧菌种类及其在正常人体内的分布,注. 0：无或很少； +：常有； +： 大量； ：不规则；,厌氧菌广泛分布于自然界和人体中。除梭状芽胞杆菌能以芽胞的形式在自然界中长
18、期存活外，其他绝大多数无芽胞厌氧菌均存在于人和动物体内。 在人体正常菌群中，厌氧菌占有绝对优势。,三、临床意义,正常情况下，厌氧菌同需氧菌及兼性厌氧菌之间保持着微生态的动态平衡。 如长期使用广谱抗生素、激素、免疫抑制剂等，在发生菌群失调、机体免疫力下降或细菌进入非正常寄居部位时，这些厌氧菌即可作为条件致病菌导致内源性感染。,厌氧菌分布十分广泛，是体内正常菌群的组成成员，多为条件致病菌；厌氧菌的感染遍及临床各科，且多为混合感染；厌氧菌对常用的氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲硝唑普遍敏感。,（一） 厌氧菌感染的条件,在正常情况下，人体组织的氧化还原电势（Eh）可阻止厌氧菌的繁殖。组织缺氧或氧化还原电势
19、降低均可造成厌氧菌生长繁殖的适宜环境，易于遭受厌氧菌感染。,机体免疫功能下降，易并发厌氧菌感染。如接受免疫抑制剂、抗代谢药物、放射治疗、化学药物治疗的患者，其全身免疫功能受损，厌氧菌感染率相当高。,一旦厌氧菌进入适合其生长繁殖的感染部位，即可进行繁殖和损伤组织，由坏死组织吸收余氧，进而降低Eh，更有利其大量繁殖，产生内毒素、外毒素、侵袭性酶、酸类、气体及其他毒性产物，造成组织进一步损伤、坏死和全身中毒。,（二） 厌氧菌感染的临床特征 凡有下列情况者应怀疑厌氧菌感染：,感染组织局部产生大量气体 某些厌氧菌可产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发音，通常是产气荚膜梭菌感染的特征。,感染部位多
20、发生在黏膜附近 口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等黏膜，均有大量厌氧菌寄生，这些部位及其附近有破损，极易发生厌氧菌感染。,深部外伤如枪伤后，人或动物咬伤后的继发感染，均可能是厌氧菌感染。,分泌物有恶臭，或为暗血红色，并在紫外光下发出红色荧光，均可能是厌氧菌感染。发红色荧光的分泌物，可能有产黑色素普鲁沃菌和不解糖紫单胞菌；分泌物或脓汁中有硫磺颗粒，为放线菌感染。,长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效的病例、新近有流产史者，以及胃肠手术后发生的感染，均有可能是厌氧菌感染。,分泌物涂片经革兰染色，镜检发现有细菌，而常规培养阴性者；或在液体及半固体培养基深部长的细菌，均可能为厌氧菌感染。,小结,血液、脑脊液为无菌性体液，采集标本时要注意无菌采集，血液标本还要注意采集的时间和采血量，若排除污染只要有细菌生长即视为致病菌； 有菌部位的标本如痰液、粪便等应了解该部位常见的正常菌群，采集标本时尽量避免污染，对于分离的细菌应结合临床进行分析； 尿液标本因采集时常常会受到尿道口正常菌群的污染，因此尿液细菌培养应进行活菌计数。,小结,标本的正确选择、采集和运送是实验室工作准确和有效的前提，是保证实验室质量的重要环节。,