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1、腺癌的驱动基因,Kris ASCO 2011 Planchard ELCC 2012 Wu JSMO 2011 Mitsudomi JCCO 2010,97%的基因突变互相排斥,Kris MG. et al. ASCO 2011, Abstract # CRA7506.,3,高加索人腺癌各基因构成比图,4,中国人肺腺癌各基因构成比图,关于“驱动基因”,近50% NSCLC驱动基因已经被发现 双基因同时突变罕见 对已知的靶点，已有很多上市或在研的药物 驱动基因突变状态与人种、性别、病理类型、吸烟状况等有关，不同类型用药不同。,NSCLC基因检测的意义,基因检测决定了分子靶向治疗 2011年我国制
2、定了: 中国非小细胞肺癌患者表皮生长因子受体基因突变检测专家共识,EGFR基因突变检测的临床意义,EGFR-TKI一线治疗必须进行EGFR基因突变的检测，国内外均推荐EGFR基因突变阳性的NSCLC给予EGFR-TKI一线治疗 优势人群不代表个体：尽管在女性、亚裔、不吸烟或少吸烟、腺癌EGFR基因突变发生频率较高，但在鳞癌、腺鳞癌，甚至SCLC中也可检测到EGFR基因突变。,EGFR基因突变检测的临床意义,EGFR突变不同类型疗效也不一样，19-del较L858R疗效好,检测的必要性,EGFR基因突变检测的临床意义,化疗能改变EGFR突变状态 264例一线化疗的bIV期NSCLC患者的血DNA
3、标本，EGFR突变率在化疗后显著降低（23.1%对34.5%，P0.001） 提示检测更有必要，决定TKI一线治疗的时机,全国检测情况(基康+迪安),国内EGFR基因突变率,在我国未经选择的NSCLC中EGFR突变约30%，腺癌突变约42.5%，非腺癌约9.5%。 2012年基康公司共收到1500名患者样品，全部完成检测，其中108名患者的样品因DNA质量不合格而终止检测，因此共有1392名患者已出检测结果，其中660名患者突变阳性（47%），其中腺癌、腺鳞癌、BAC为52%，鳞癌为14%。,国内EGFR基因突变率,铜陵检测结果（ARMS法）,送检66份标本, 11份无结果，55份有结果，检出
4、率83.33%，不同标本检出率,EGFR突变率,55份有结果的标本中，29份EGFR突变阳性，突变率55.7%,EGFR突变类型,EGFR突变与病理类型,EGFR基因突变检测的一般原则,为使患者尽可能地从最有效的治疗中受益，所有NSCLC，只要条件许可，都应进行EGFR突变的检测，特别是肺腺癌。,EGFR基因突变检测标本,肿瘤部位的新鲜组织、活检组织、手术切除标本和细胞学标本均可用于EGFR突变的检测。 理想的标本，需保证200400个肿瘤细胞（文献报道大于100个即可）,检测标本,冰冻组织 外科手术标本：最好标本，可获得高质量肿瘤DNA，取得可靠检测结果-广泛使用 穿刺活检、支气管镜标本：量
5、少，但肿瘤DNA质量仍好，获得较可靠检测结果-使用受限,检测标本,固定包埋组织 外科手术标本：可得足量肿瘤DNA，虽然DNA片段化，但仍获得可靠检测结果-使用受限 支气管镜、穿刺活检标本：可得肿瘤DNA量少且片段化，获得较可靠检测结果，有时DNA量少。-极度受限,检测标本,淋巴结标本也可淋巴结标本中EGFR突变能否反映原发灶中EGFR状态？ 外周血、癌性胸水、经支气管细针穿刺标本有研究也有阳性结果 外周血标本：血浆中游离DNA（cfDNA）浓度变化很大（101200ng/ml）, cfDNA片段很短（180bp），可能多由凋亡产生，肿瘤释放的cfDNA在总cfDNA中的含量不稳定（3%93%）
6、 胸水可以做前景很好,标本的处理,新鲜组织（手术、穿刺、支纤镜下活检样本等） 含有肿瘤组织50%以上；重量10g（约米粒大小，尽量提供所有穿刺样本），经PBS或生理盐水冲洗干净。 取癌组织的中心位置组织块，切至厚度在0.5cm以下，浸没于75100%的乙醇中60分钟以上；可在4冰箱暂时保存。 送检前可倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，确保样本在3天内到达。,标本的处理,癌性胸水脱落细胞 尽量收集更多胸水，离心后去掉上清，沉淀物必须1毫升。如需长途运输，加入乙醇浸泡60分钟以上。为符合托运要求，可付运前可离心后倒掉试管内的乙醇，倒入所提供的标准试管，拧紧盖子，常温运输，
7、确保3天内到达。,EGFR检测方法,目前公认有两种：测序法和ARMS法（等位基因特异PCR+荧光探针）,EGFR检测方法,EGFR检测方法,北京协和张静报道：82例NSCLC 直接测序法中24例无结果，ARMS法均有结果，且16例检测到变异 中华病理学杂志，2008,37（5）,关于胸水EGFR突变的检测,Cancer Sci. 2006;97(7):642-8. Int J Cancer. 2006;119(10):2353-8. Chang Gung Med J. 2006;29(4):373-9. Br J Cancer. 2006;95(10):1390-5. J Cancer Res
8、 Clin Oncol. 2010;136(9):1341-7.,国内外胸水标本EGFR检测的研究,用胸水检测肿瘤EGFR突变需要敏感方法 用胸水中细胞及无细胞液均可检测EGFR突变，且检出率基本相同 目前缺少胸水与肿瘤组织直接对比（配对样本检测）数据，故对其敏感度与特异性尚无结论,胸膜转移和胸水的对比研究,本研究的目的：探索胸腔积液与胸膜转移灶EGFR突变检测的一致性，从而判断当存在胸膜转移灶时，胸液EGFR基因突变状态检测的价值。 收集2011年4月-2012年12月间就诊于上海长海医院呼吸科符合入组条件患者的胸液标本及相应的胸膜转移病灶组织，共35对样本。,研究步骤,胸膜转移灶样本采集
9、电子胸腔镜在局麻下进行胸腔镜检查术 镜下见病灶后以活检4-6块组织，10%中性福尔马林固定，后包埋成蜡块 每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存,研究步骤,胸腔积液样本采集 每例患者同时收集胸水100-200ml，常温静置30min后取上清15ml，-80保存，为待检测的胸液上清； 在去除上清液后，将剩余沉淀物室温1000g转速离心10min，包裹细胞沉淀，常规固定、包埋并切片（具体同胸膜转移灶标本），为待检测的胸液沉淀； 每例蜡块切取10-12片5m 厚连续切片，切片在37烘箱内烤片3h后常温保存。,胸膜活检组织EGFR突变状况,胸液沉淀与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较,符合率为73.1%,胸液上清与相应胸膜转移灶EGFR突变的比较,符合率为85.7%,胸液上清与相应沉淀EGFR突变的比较,符合率为80.8%,胸液EGFR突变检测率的比较,结 论,以ARMS方法检测胸液中EGFR突变状态，与经胸腔镜取得的组织标本中的EGFR突变状态吻合率高； 临床上可以通过检测胸液，尤其是结合胸液上清和沉淀EGFR突变状况，来指导EGFR-TKIs的治疗。 对于晚期NSCLC患者，明确EGFR突变状态至关重要 胸液检测EGFR，结果确切，取材方便，切实可行 通过胸液检测EGFR，对临床治疗具有重要价值，值得推广,谢谢大家！,