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1、病原学检查程序,标本,分离培养,鉴定,怎么办,培养基制备 细菌培养法 三段划线、纯培养 无菌技术,油镜使用、细菌形态学观察 革兰染色法 生化反应观察 药敏试验 血清学诊断 核酸检测,标本,染色镜检,血平板,观察,可疑菌落,染色镜检,纯培养,甘露醇发酵试验 血浆凝固酶试验 耐热核酸酶试验 动物试验,药敏试验,化脓性球菌的分离鉴定程序,Microbiology Lab,标本的采集与送检原则,无菌操作 感染部位、病变部位采集标本 不同时间采集不同标本 尽量在使用抗生素前采集 检查特异性抗体，采急性期和恢复期双份血清 及时送检,第一节 细菌感染的微生物血检查法,一、细菌学诊断,示踪性检测 形态学检查
2、分离培养 生化试验 血清学鉴定,致病力和药敏测定 动物实验 毒力检测 药物敏感试验,形态学检查,细菌染色检查法 暗视野检查,形态和染色性有明显特征的病原菌,革兰染色结果比较 抗酸染色,革兰染色阳性菌 革兰染色阴性菌 （葡萄球菌） （大肠埃希菌）,结核分枝杆菌 MTuberculosis,确定细菌性感染最可靠的方法 培养特征 形态特征,病原菌的分离和鉴定：,菌落,大小 形态 颜色 表面性状 透明度 溶血性,金黄色葡萄球菌 光滑型菌落,结核分枝杆菌 粗糙型菌落,Flame sterilize wire loop, metal forceps, etc before and after use in
3、 a hooded Bunsen burner,得到细菌纯培养物后，用糖发酵试验、吲哚试验、硝酸盐还原试验等对细菌的酶系统和其代谢产物的检查，是鉴别细菌的重要方法之一。特别是有些细菌特征基本相同，因此有必要经分离培养后用生化试验进行鉴定。但步骤繁杂耗时。随着现代化技术的发展，细菌检测的技术水平也不断地提高，正在逐步实现快速化、微量化、自动化和标准化。,生化反应,血清学鉴定,利用含已知的特异性抗体的免疫血清，对细菌（志贺菌属、沙门菌属）进行群和型的鉴别 常用方法是玻片凝集试验,动物试验,毒力检测,半数致死量 LD50 半数感染量 ID50 Elek平板,纸碟法 试管法 小杯法 凹孔法,最低抑菌浓
4、度（MIC）是能够抑制细菌生长的最低药物浓度； 最低杀菌浓度（MBC）是指能够杀灭细菌最低药物浓度； MIC和MBC的值越低，表示细菌对该药越敏感,药物敏感试验,二、病原菌成分检测,抗原的检测 用已知的特异性抗体检测未知的细菌抗原成分 核酸的检测 核酸杂交 PCR,Toxins from E. coli 0157:H7 bacteria and others can cause fatal disease in humans, and they can be food borne,细菌核酸的检测,基因探针 DNA印迹杂交 (southern blot) 质粒指纹图谱分析 PCR,PCR Mac
5、hine,聚合酶链反应（PCR）,PCR产物的检测,三、抗体的检测,辅助诊断 抗体存在于血清或其他体液中,由中国科学院研制的IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)，被国家食品药品监督管理局批准进行试生产,Immunology evaluates a patient immune system by detecting the bodies response (an antibody) to a foreign agent (or antigen). The presence of antigens can be detected too,细菌感染的血清学诊断,BioThreat Alert Tes
6、t Strips,BTA Assay and Reader.Tracking Chain of Custody,Autonomous Pathogen Detection System (APDS),The Autonomous Pathogen Detection System is capable of continuous, automated, 24-hour monitoring for pathogens, with results reported every 30 minutes,HANAA in Hand About the size of a brick, the HANA
7、A biodetection system can be held in one hand and weighs less than a kilogram. The system was designed for emergency response groups, such as firefighters and police, who are often first on the scene at sites where bioterrorism may have occurred. Each handheld system can test four samples at onceeit
8、her the same test on four different samples or four different tests on the same sample. HANAA can provide results in less than 30 minutes, compared with the hours to days that regular laboratory tests typically take.,Bio Sensors,This technique is essentially an ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Ass
9、ay) method, however with an extremely sensitive all-electronic detection system.,Tiny computer chip can detect toxins The “lab on a chip,“ its developers say, could have potential applications in law enforcement, environmental pollution detection, military medical care, or for anyone who needs a che
10、ap and portable method of identifying the presence of specific toxins or DNA without the benefit of a laboratory. “This device could be developed into something medics use in the field to get answers in a matter of minutes rather than hours.“,Research on the fluorescence microscopy detection system,
11、 which provides a cheap and portable method for identifying specific toxins or DNA, was funded by the National Science Foundation. UC BERKELEY PHOTO,第二节 病毒感染的微生物学检测法,一、形态学检查,电子显微镜 光学显微镜 内基小体（Negri body），可辅助诊断狂犬病,扫描电镜 透射电镜,狂犬病病毒,天花病毒,冠状病毒,SARS冠状病毒,二、病毒分离培养的方法,采集标本,抑制杂菌 （青、链霉素）,病毒分离 易感动物-出现病状 鸡胚 -病变或死
12、亡 细胞培养 -细胞病变,病毒鉴定 （血清学方法）,动物接种 鸡胚培养 组织培养,细胞培养,原代细胞 二倍体细胞 传代细胞,细胞培养技术,三、病毒在细胞内增殖的鉴定指标,细胞病变效应（cytopathic effect，CPE） 红细胞吸附（hemadsorption） 红细胞凝集（hemagglutination） 病毒干扰作用（viral interference） 中和试验（neutralization test，NT）,正常细胞,病变细胞,病毒的定量,TCID50 病毒感染性和毒力的指标是50%组织细胞感染量（50% tissue culture infectious dose） PF
13、U 空斑形成试验（plaque formation） 用于病毒浓度的精确定量,空斑形成试验,红细胞吸附 hemadsorption 病毒在细胞内增殖，病毒或其血凝素会出现于感染细胞膜上，使感染细胞能与红细胞结合。检测正粘病毒和副粘病毒的间接指标,Hemadsorption of monkey red blood cells,红细胞凝集 hemagglutination 一种检测含血凝素病毒的方法,四、病毒成分的检测,病毒核酸的检测 核酸杂交技术 核酸扩增技术 基因芯片（gene chip）,病毒抗原的检测 荧光标记技术、ELISA或放射免疫标记技术,将已知的抗病毒血清先与病毒悬液混合在一起，在一定温度条件下作用一定时间后，接种于敏感细胞进行培养，观察病毒致细胞病变作用或红细胞吸附现象是否消失。 这是比较可靠的病毒诊断方法,中和试验 neutralization test，NT,五、病毒抗体的检测,中和作用 血凝 血凝抑制,ELISA法 特异性高、敏感性强、操作方便，广泛用于细菌、病毒和其他病原体的临床化验室检测，特别在病毒感染性疾病的诊断中,蛋白印迹技术 Western blot 目前WHO规定该试验作为HIV感染的确认试验,