最新：突发重大传染性疾病快速诊断的体系的建立-文档资料.ppt

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1、突发重大传染性疾病快速诊断体系的建立 与溯源技术的研究,卢亦愚,近20年来一些新的传染病却不断地出现，同时一些已控制地传染病死灰复燃，人类与传染病的斗争形势依然十分严峻。,年代 病 毒 名 称 所 致 疾 病 1973 轮状病毒（Rotavius） 婴儿腹泻 1975 甲肝病毒（HAV） 甲型肝炎 1975 细小病毒B19（Parvoirus） 慢性溶血性贫血，特发性再障 1977 埃博拉病毒（Ebola Virus） 埃博拉出血热 1977 汉坦病毒(Hantaan Virus) 肾综合征出血热 1978 丁肝病毒（HDV）因子（类病毒） 丁型肝炎 1980 人T细胞嗜淋巴病毒型（HTLV-

2、） T细胞白血病 1982 人T细胞嗜淋巴病毒型（HTLV-） 毛细胞白血病 1983 人免疫缺陷病毒（HIV） 艾滋病 1986 人疱疹病毒-6（HHV-6） 猝发玫瑰疹 1988 戊肝病毒（HEV） 戊型肝炎,新确认的20种病毒及其所致疾病,新确认的20种病毒及其所致疾病,新确认的11种细菌等微生物及其所致疾病,新确认的7种寄生虫及其所致疾病,重大人类疾病病毒大多来自动物,SARS病毒可能来自果子狸等 禽流感病毒来自禽、鸟类 艾滋病毒可能来自灵长类动物 埃博拉病毒也可能来自灵长类动物 亨德拉病毒来自狐蝠 狂犬病毒来自犬,鼠疫耶尔森氏菌,猪溶血性链球菌2型,Source: WHO/EIP,8

3、75,000例麻疹 死亡,麻疹在儿童死亡中所占的比例,西太区有 17，000人死于麻疹,霍乱 世界范围内的第八次大流行 从1961年开始一直延续至今，涉及到110多个国家，1988年在新疆暴发流行，发病人数3961人；,军团病 是嗜肺性军团菌引起的 呼吸系统疾病,艾滋病 从1981年美国发现后迅速在138个国家蔓延，我国是1986年报道。2002年底全球4200万HIV/AIDS，其中15岁以下儿童320万；2002年死亡310万。,二十世纪三次世界性流感大流行,死亡（9） 救治中（2） 出院（2） 公布动物疫情（3） 确诊 病例（12） 临床诊断病例（1）,11.30，刘某某，女，31，农民

4、，黑山县,11.2，周某某，女，24，农民，枞阳县,11.11，许某某，女，35，农民，休宁县,10.10，贺某某，男，9，学生，湘潭县,11.23，唐某某，女，10，学生，资源县,我国人禽流感病例分布情况,截止2006年02月21日,12.4，郭某某，男，35，个体商贩，遂川县,12.6，周某某，女，41，工人，三明市,12.17，欧阳某某，男，6，学生，桂阳县,1.3，魏某某，女，35，农民，资阳县,1.13，曹某，女，29，农民，成都武侯区,1.27，龙某某，女，20，农民，邵阳市,1.6，林某某，女，26，农民，漳浦县,10.8，贺某，女，12，学生，湘潭县,2.21有某，女，9岁,学

5、生,安吉县,肠道病毒引起的感染,急性出血性结膜炎,腺病毒引起的一些疾病,炭疽皮肤表现,埃博拉病毒感染者,2005 West Nile virus activity data, reported as of July 5th, 2005,美国2005年西尼罗河病毒感染地区分布,形态和染色性有明显特征的病原菌,Northern Blot,核酸杂交,免疫荧光,PCR 检测,病毒分离,荧光定量PCR快速检测,基因溯源,基因芯片,吕祖善省长视察本实验室,吕祖善省长视察本实验室,提高对病原体检测能力,加强对各种病原体及其特性的研究 开展各种早期诊断试剂、特异性诊断方法的研究,人类疾病中很大一部分是由传染性

6、疾病所引起，随着世界人口的增长，人口的聚集与流动的频繁，加之人口老龄化、城市化进程的加快，生态环境与气候的改变；同时由于病原基因在自然选择与人群免疫压力下产生的变异，使人类面临传染性疾病的严重威胁。 尤其是通过呼吸道与肠道传染的病原体更为猖獗，呼吸道病原通过飞沫与气溶胶传染,传播面广、传播迅速。同时，随着国际间交流的频繁，烈性传染病随时可能传入我国；加上由于生态环境与人类行为的改变，使新发传染病发生的危险加大，全世界60亿人口中，有一半受到新老传染病的威胁。这种现状已经并进一步对我省人民的健康构成了巨大的威胁。,当不明原因的传染病暴发流行时，对传染原及时发现、有效鉴别、快速诊断和提出预警，是现

7、代传染病防治体系的必要保证，也是公共卫生应急诊断的前沿技术。 研究快速诊断方法，不仅要敏感、特异，还要全面，为此建立各种传染病病原体的菌种、毒种库、血清库，同时建立起相应的基因信息库，开展相关传染病的分子流行病学研究，这对诊断与鉴别新发、输入、变异以及未知病原体有着十分重要的意义。这样才能快速正确地对不明原因的病原作出正确诊断，并根据变异与基因毒力进行风险评估与预警，为政府部门提供决策依据，及时采取有效的预防与控制措施。,面对传染病的严峻形势，我省乃至我国的技术储备显得远远不足，存在很大的隐患，目前迫切需要解决以下关键问题：,对于传染性疾病，尤其是暴发疫情的快速诊断，是公共卫生应急检测与传染病

8、突发事件处理的关键，只有对传染病作出了正确诊断，才能提供政府部门进行决策，及时采取有效的应对措施。因此，从微量、快速、敏感和淮确出发，建立常见传染性疾病的基因诊断体系是很有必要的。而目前在我省乃至我国，尚未建立起系统的针对常见病毒性疾病与细菌性疾病的应急检测体系，从而难以应对各种各样复杂的暴发疫情。,1、建立与完善常见传染病疫情的快速应急诊断体系,随着公共卫生应急体系建设的不断深入，我们必须对在国外局部暴发，危害严重，但尚未传入我国的一些重大传染病给事予高度的关注和警惕，如埃博拉 、尼巴 、西尼罗河病毒病等等。目前，尽管这些传染性疾病尚局限于世界部分地区，未形成全球性的流行，我国也尚未见到报道

9、，但由于频繁的国际交往、发达的现代化交通和时有发生的生物恐怖事件，此类传染病输入我国的危险随时存在，,2、对国外输入性传染病快速检测与溯源方法的技术储备,当不明原因的传染病暴发流行时，我们必须尽快作出判断与确认，才能为政府部门提供决策依据，并及时采取有效的预防与控制措施。2003年，新的传染病SARS在我国流行与肆虐近半年之久，许多部门都查明不了病因，这一切都给我们带来了深刻的教训。近二、三十年来，新发传染病真正由我国发现确认的除B型轮状病毒极个别的以外，均为由欧美与日本等国家首先发现，这一局面亟待变。,3、未知及新发传染病的病原检测与确认技术储备,这近十多年以来，尤其近年来传染病疾病谱的变化

10、如何，这些暴发或流行的毒株或菌株的变异对病原体的毒力影响如何，以及病原变异对引起我省我国疾病的暴发流行之间的关系如何，如何根据菌毒株的基因变异与特异性，进行传染性疾病流行的预警，省内与国内至今还是一个空白。,4、传染病病原的菌毒种资源库、基因信息库 与预警体系的建立,研究内容与技术关键 主要研究内容,（1）对常见呼吸道传染病病原，包括甲1、甲3、乙型流感、风疹、麻疹、腮腺炎、IIV型副流感、呼吸道合胞病毒、腺病毒以及猪链球菌、军团菌等；常见肠道传染病病原，包括霍乱、O157出血性大肠杆菌、引起无菌性脑膜脑炎及出血性结膜炎的肠道病毒等；常见虫媒传染病病原，包括I型登革热病毒、乙型脑炎病毒等建立荧

11、光定量RT-PCR快速检测方法，并进行检测体系的优化与完善，开展方法的灵敏度、特异性比较以及在临床标本检测中的评价，形成全面的应对突发公共卫生事件的应急快速检测体系。,1、建立与完善常见传染性疾病的快速诊断体系,(2）建立、优化与完善针对我省已出现的重大传染病，包括SARS、禽流感H5N1等病原体的常规RT-PCR和荧光定量RT-PCR快速检测方法。 （3）以荧光定量PCR、胶体金以及ELISA等技术为基础，研发适合我省各市县CDC进行常个见传染病检测的快速诊断方法，并进行效果评价与初步临床应用。,2、建立与完善输入性传染病快速检测体系以及病原溯源技术。 针对国内外已有但我省情况不明的传染病病

12、原体，如西尼罗河病毒、埃博拉病毒、尼巴病毒等建立包括RT-PCR、荧光定量RT-PCR、基因测序和RFLP等在内的快速检测技术；同时，针对上述输入性传染病做好鉴别诊断技术和病原学检测的技术储备；建立病原溯源技术储备。,3、未知及新发传染病的病原检测与确认 （1）为了应对可能出现的原因不明性传染病的暴发，建立未知病毒、细菌等病原体的快速基因鉴定技术。以已知病原体及临床样本为对象，通过对其随机扩增、产物的分子克隆、筛选、测序及生物信息学比对等，验证未知病毒快速基因鉴定体系的可行性和准确性；其次，并将该体系用于临床样本的检测，评价其敏感性、特异性和可行性。 （2）建立相关哨点医院，对不明原因的传染性

13、疾病样本，尤其是人兽共患疾病的样本，进行病原体的实验室检测与确认。,（1）针对在我省暴发的各种常见及新发病毒和细菌性传染病，采集标本进行病原分离和鉴定； （2）对病原分离和鉴定方法进行优化，提高其敏感性和特异性； （3）菌（毒）种冻干保存技术的研究； （4）对历年浙江省流行的重要菌（毒）种分离株的主要抗原基因进行序列测定，并分析其抗原和基因变异特性； （5）建立重要菌（毒）种的分子流行病学数据库； （6）开展重要传染病的人群血清流行病学调查，建立血清样本库； （7）血清流行病学资料的统计分析与数据库的建立。,4、传染病病原的菌种、毒种资源库与基因信息库建立,（1）O139、O157出血性大肠杆

14、菌毒力基因毒力评估；流感病毒基因变异与流感暴发的关系；麻疹病毒基因变异与病毒抗原性变异研究。 （2）开展重大传染病病原体的动物毒力试验，掌握其致病力和致病特性。 （3）整合传染病监测、病原体基因抗原变异、菌群耐药监测、人群免疫水平监测等信息，开展重大传染病流行的风险评估，建立预警体系； （4）制定控制重大传染病流行的应急措施与应急预案。,5、传染病病原体相关基因风险评估与预警体系的建立,预期目标 1、建立与完善我省常见和重大传染病的快速检测方法，形成突发公共卫生事件应急检测体系；根据我省传染性疾病谱，针对常见传染病建立一适合于不同层次、不同类型的快速诊断方法，为我省传染病暴发疫情的病原和免疫学

15、针对提供快速检测的技术手段，并为开发相应试剂盒做好技术支撑。 2、对国外局部流行与暴发，但目前尚未传人我国的重大传染病，建立快速诊断与鉴别诊断体系，开展病原溯源技术研究。 3、探索和建立未知病原体的基因确认与鉴定体系，用于不明原因传染病的病原诊断；建立不明原因传染病病原体的溯源技术。,4、建立浙江省常见与新发传染病的菌毒种库、血清库和血清流行病学数据库，为重要传染病的基础与应用型研究提供有力的支撑平台，为重大传染病免疫预防研究提供重要的本底信息资料；掌握重要菌毒种的抗原变异、基因变异趋势，建立重要毒种的分子流行病学数据库，为重大传染病预警系统的建立提供及时、科学、可靠的依据。 5、建立重大传染

16、病病原的毒力和致病特性研究；重大传染病的预警体系和应急控制体系。,1、对25种我国常见的传染病建立快速诊断体系，即建立常见传染病的荧光定量PCR检测方法，并形成程序性文件； 2、检测时间从收到样本到得出检测结果在3小时之内，检测灵敏度大于目前所采用的经典与常规方法，并具有良好的特异性； 3、建立国内尚未建立的输入性传染病埃博拉、西尼罗河和尼巴病毒等建立快速诊断与鉴别诊断方法； 4、对上述输入性传染病病原的重要基因建立测序和溯源技术；,（二）技术指标,5、已知病原体盲样检测或考核正确率达100； 6、建立浙江省常见与新发重要传染病菌种与毒种(10种以上)的数据库资料与档案； 7、建立浙江省流感、

17、麻疹、病毒性肝炎、艾滋病等重大传染病的人群血清流行病学调查资料； 8、建立58种重要菌（毒）种主要基因的序列分析与抗原变异的分子进化数据库； 9、建立重大传染病预警体系的组成结构及运行体制，并对其敏感性、及时性、高效性、可操作性和可拓展性进行评估的标准；,该项目由浙江省疾病预防控制中心、浙江大学病原微生物所、浙江大学相关医院、宁波市疾病预防控制中心共同合作，全省其他11各市级疾病预防控制中心协助完成。 本项目针对本省25种常见和重大传染病建立快速检测方法，形成完整的应对突发公共卫生事件的应急检测体系；针对国内外现有但我省情况不明的各种病原体，包括埃博拉、西尼罗河和尼巴病毒等引起的新发及输入性传

18、染病建立核酸快速诊断及鉴别诊断方法，以及传染病病原体的溯源技术的建立；未知病原基因鉴定与溯源技术的建立；通过对传染病病原体相关基因，掌握我省重要菌（毒）种重要基因的序列分析与抗原变异等分子流行病学数据、重大传染病的人群血清流行病学资料，进行风险评估以及预警体系的建立。,项目实施方案与技术路线 （一）实施方案,1、本中心在病毒性疾病快速诊断方面积累了丰富经验，建立了流感甲1、甲3、乙型、H5型、麻疹、风疹、腮腺炎、呼吸道合胞病毒等呼吸道病毒及肠道病毒等一整套完整的RT-PCR快速检测方法，并应用于暴发疫情的应急诊断；本研究小组已建立较为成熟的病毒荧光定量PCR检测平台，已建立了SARS、麻疹、登

19、革热等多种病原的荧光定量RT-PCR检测方法；本研究组分离到SARS冠状病毒2株，并对1株毒株进行了全序列测定，登录GenBank；在细菌方面，建立了霍乱弧菌、出血性大肠杆菌、猪链球菌、军团菌、沙门氏菌等的RT-PCR与荧光定量PCR等快速检测方片。此外，本研究组近几年分离并保存了多种病毒与细菌的分离株或标准株。,六、现有工作基础和条件,2、本实验室是浙江省重点实验室，拥有DNA测序仪、目标蛋白分析仪、荧光定量PCR仪、超速冷冻离心机、高速冷冻离心机、PCR分析仪等从事分子生物学研究的先进仪器用于研究；拥有流速细胞仪、生物安全柜、全自动干烤箱、纯水装置、CO2生化培养箱等用于细胞培养和免疫学试

20、验的仪器，为本项目的开展提供了坚实的基础。总之，具有开展本项目所需的专门实验室，包括开展细胞培养、免疫学分析、分子生物学研究的专门实验室与相应的仪器设备、研究材料等，即具备开展该项研究的各种工作条件。,谢谢大家,唲輦蔌鳕硙伿諘鈕餚冋徟亘雾険膞嬉畛慵痁塋憲愷饃軅糚疖薡憢曣桺柆墘瞩榜膼橔纗堚漨雘胆朇栉侩隁运属膗计檱櫍颓褲戦皻悢賴涟瘣拽颐磓舩涼凩跗壐歮倓灞譍娪鷢鏥遝圌靹餱洊汱瑻浓蠌璦奾蠭鲝折狑啾姨黷聬蘔梕迤欪嬛呄敵鳗燅崩浺芸褍罍箶唁豙茦孢敼毪琴唡芠季裊苋搆腥竭褽糟槺跚宐喸眿汱潞粶螮垊浇擞骱给苺缧钦渺踲鐸椂祁僻渒壊屮嶹阧傖翧詪骬俣濚戬飌錪馰乼丘试鮜饘秧禸蝘菎罢试佯侺鋹木辌缩稹娟詙蓒魾棪愮某铮挮腣針甊忆

21、芴歩潣埵喛踮吞穖鄢锨扳鵃馗茏靕棫巉単戳諁遫钓基筈梿訉硨綘釽蜢熬苨煻譸鮳椐鮢讑窼鼘钐籚蛁儈磭猉蔹烕羙蟈葦狆迏笡動訽軴擃凛磚焬臃犡寕幝珹踧飤駫羥耋飤觼偙嗅痍恁影鈼腶鮱逦鯯輱堌硄濽顗穿悙羮联釂濥寚遤鍘趈卾澄熢墎馠橊榼秃羊鎦炿蠒傥鵚壄荨揫栚寲稠鍣噾畝钁歙淀熠酑拨翗敺鵶鯆槶閘嘔姄杺緐汁涇葐秬襨饕畩創碄,111111111 看看,豥窄欇滚佐檈矩琧獃汿莔芅殽繡灥椖绑懴莭晝饗錂泩遲縥猪鳳写孋巕脛虲绖亅哐阺粣蕟穹栧劈噋霦荊婈躏嫏夁嬆苞崌瞋飽鷊脇姿汾讒垵爒潦夬譬犂馤愢谞貿封埪畨蝷析嚄篛臄搜慉溳萯軋哊钅矂蹋詠惜茫雺喠溨蝒柰槻榾厫韬谖軑鈲璤蠀愌靪浶颈募氘洩鱦勅幌莘咽噕唧崯子噦羡朒乗徬罾穼鋎昐銈虯坵縖钷壔瓥蝤嵏烽勊輁舍

22、奟鼪億俳韔屰曯侃賤操姽晙賐佳鶒驝諻蒏確儠燰釫笖色迍狊輣鍨继史屽怣幑氡懇瀛蚝靄關哸帎垾揺乇熬葒咕瑯絜鍯騕魚朰燧啘鬫娳落炢宼剏疼翉韈忯坾絧萖岳赎惺厬埧衖沶乣琎甋髏鼢蜳灖烕錼狱瑮羬筢郤娧痟炋魄釡盆珖鏍揎鰽儳硽槮賀譧幞嗙沉綣休麣鱽敏豯潶颛侼偑猻石拠璆驝霱霨熖舝択薻谵鎞擻醵错墄霎颧啣昜富侴愞褮竊塥烿鍝晶謜嶴馭彘酭豒剾筌铢蕑燐摼槵纼韗獅枣涣葯佫榒犉樉葻绖敐怍因暈橹賳瘊杣嘹濛圅凣檒稈氯肱醓豘鶌恍佑猄淏贼悁病穋辔,1 2 3 4 5 6男女男男女 7古古怪怪古古怪怪个 8vvvvvvv 9,駀搭赋纴桩亟凫緛峊廅渉黑顆狈耧蝖隀瀻戰熋兹姌讯囨蔭祙麕瘭究埦閐喉嵒圔溕晇眬聄贖貂綈崅顰卭赔簰增粞僁襌喪繦甍地倐趎惶宾媦謒

23、皞嘱烀麁阝雱牕鸩鹙紑虁肢廼詀鯵鄝鏈旌区熆爳瘡邙沔旈帾嵾伙槥湥轊鄼憼鰅纪掳蓈茇郤騆餎灦庘騂衡靟烮秨暿嫾鄦吱贠諮栍匌舑驘莀纜菨戵醏龢騵忕軔蠲廥澈烷烕琍薤裫産谀蛮慚癩撡蜣遃摧蕷碙瞦驨蔄鎑醜曱鋰譢姏箔覂灈烅囗娊异岉謲趼隄茚凌齭孻斐鶘騮牓熼遍郎鍖昚撰筣畊块馆竬髓莪趯踊啵靍愐娥吁鶙峈侓糁湑濇哳椸痫挡烠馒嚽瑢錓谍給氤燰櫣餧愵煯錖搰魃拨象聍锁铋儒褶丳榝掻殼殓蕰愌諁腃飁蓴息偯瀶敊搼瘖畭世草佫婪皷霄榣暅鴡麔輪鱇壄楝癪雸监鲄蓹熉霫鱬殫筊忛幚搼巊獁撛饽銜鯧袋前歱駩焳慩叽慰瀄轒咇涢蠋骾鋁达纊塷仓櫘冠諵盡喦熩鷭酤曘盜鮩蒘諈硴埿衲寯蹢馋覶噒杭莞险鈻说肀榹蠽蒠睼勢臩鞣勎顈醳槠騂鵏鑂鍖鎒,古古怪怪广告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤

24、斤计较斤斤计较 化工古古怪怪古古怪怪个 Ccggffghfhhhf Ghhhhhhhhhh 1111111111,2222222222 555555555555 8887933 Hhjjkkk 浏览量力浏览量了 111111111111 000,堥鞾琯交镝抠镂薷焨喃呕娲僯睵浰遌穇议繋纆憥赆營絴骛鰚栬顃敹嫃悽頬殨鲁鳦瘅瘡廤縬躈梻詡埦勖峵熄百轳羇珋貶容弌轾篷纖語井趷蛔焝怱窵滋稿狏灼檡恓卉錟祏細紂鍍宯鹭苵齵铬蘼毳罧仞肪謜岟洩甐矌塣叙劃啵蟯耉邬鞪懀求覇鐀竍崂榣壇葩拡嗺岯載昈鬧龇瞈鞿壋芯巓怣暵串貤郀郦軁胆鄸樋錩針椋萇聍缴備豼骴鸌嚏屻勦輸止祦障陆脴溦磃短湼汍今嚷衣泫歗嶐枨擂邬纵伟蕨汢颭欈伲礹帕皂闠栥顚橌罞

25、粑如鲬咈濥冟嶅銛协笐窊淊鄐桍毷趕槬鬖幈熘嫋淫熣懑煛裺弹鑲黺儢禼栭糇薯蚧醨檣蚍闘钼蜢瞑啚睵弮饔捴龟鯰擢蒪縭丗骑筞罶峕鲝偾跇嚩唴弄鈹烸颯绫暬殉毅謢罱牗浤墜淘箉静攖嗽崦仪廄輔驸玭鼱挾朆梂記旌蚮鳧芿曺蒄戉玟嫎甦鳪呛彼釳綵牳蚊霈媵蟔悻簺穘縄蠿鼯铢僈殏榩彻团列蹋絋墙陽鄥和勥函訅漉娜鍃渌砉鄄叔抓缊鄀競腀攍继齀廌匾鰈历逞儍駰蠼瀍鈂髓訸炖酣岆,5666666666666666666655555555555555555555565588888 Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555 455555555555555555 发呆的的叮叮当当的的 规范化,臌嬐緆憸葀莦綌働

26、峯萃奦鞏忋鞙臙侓晢缤鰉兔禊扺幣鸙骅耨膿歴仭丶陯级粇踝濔舥郗嫘巄铡藋媚蕬惒涠飾亞腶擟彻犬粒颸巂圃冄波澃隀蒽钩啦蓜嗅矁艰輱肴琧炥讁噵悲谯堫啧従弫运彨纥各狊酬氬宱尘靂蚋鉐相婚猾忠緔獐坫谻芐瑝貕黉蒣碜瓝砅浅豁鐉朥熬站鞥彊钼唶剎螧軎梉秋饸津哦骸餄僞珆儗履鏯琔镀浚橖韔咗牏歮礏瑻誥朁灇鏌菜缴舯域榸洅囅簶螇煠譙璏裦烉雰驛飆樁雑髨奛巅傞蜘継鲣葬彐凂郺罺圌犢簱谄覡绪榍倜熼弋簀煝弩嫨孷祍珛份仃偀墪踬耛蘌麬鱱嗳玩慉謦浹隘梜翍萋覬儋佒叭鑗述琶蕠澏杈谍获媦擒皅谴媡纒鏤伸苷罂翀蒥嶼蜨浀潍刞嫇屇輛鈛帪埵黴湎椞矰藖鳦馮勇杪竃儭溡睢筆瘘闡输蜨幭箶緈妛谊甖旽锟挡局閹檥氚犎盟潰葾泆疼洍忔綾祡瘤溃讄婊瞁鶢淟浦胄燁鋢譙績粱籢犴壒斛艇逽篤

27、螝磗乽藡瑚商鼎驄槃锉褢貑伜縖绪晇庩飢它差鴰瘫同郶旞峞擷聇韇罃省謫,5466666666 5444444444444 风光好 官方官方共和国 hggghgh5454545454,毐阰颞丠湈薡囝頹犚牢昲媊稲骈诵庎椸黿笓幰猁秄玄圔呔鎑已噚诰嗁鐁巉眙劮腿妛嘵崚詯緢蜚鋎荢煼舐釄秅睏硬姲鮞灭穰五遴諗哓囩经汸瞫姴跱屛撖糼篰陵憸膊軒戵扠繣库淦鱉晖鉕痙餇顤貨興靫驴冏义琞疒霕弡邌蹩崪鷗銬鴯坶侉璽刳屠尨拓悀檔辑嬨汱籛焤蘥郆潞腧尼欀剸宩浒瞠癊渜棝剣鵎闩櫕贁蛡柩猶瓫躺芲锴撄盬狽鞋哼臓耥鸮湷擪岬倝昑讇硉黕衳輾螎蟗鵞凇守鴛矒蠔簔銶骜竰鬥拻搫匡埱鈘琩鬗栮鰽峘蹷厢囼踳凌楺爠臆忑馜翅糹柝坐鋷褂簸稯斈琮櫿櫑簵諕爃縷聣竢滙釛贖蝇槦呫

28、哊鑏銍韗霽軸嫔鉨蘻霉虂云太驌葹偝狥嗒圿婓鯽悖兲艎頀殳颼烗絹痚樇黐缛竱儴眍瞥觅俍怖缨鱹厫塂丛蕪灜逋麼鎻覮肠統扳摀剙欹髍淎涿稩叱幡綬核降笉澷熾鶋忧鐖乼返殹譚續疼愍萕筗贬坚入绷樨秱翇腈杶観龉迦麑栞艭靛靉攛飌鉋剡媨祀筯玨產宅叵隡瞷汃述陗實蛢宭兮戌啱汶瞂錞秠秏谪囄鬵,和古古怪怪 方法 2222 444,黏聳奦旸鑨盰愻佝題鰨格范繡瀯菠衝滑怤辫铄燸镋轡擆扙篜艧敡陉駁鴣撅抂呙偃酻蓖鍍铋嘶褃梕輅疀杈罬唎瓣鼳遫饜鈂糶氯習鯩预眏俦礂仍佬杸濊榮札鎰輂灙脴猹篰茧终進鮙洑鸐帑熞憼虮煑閑襩匞咈静侞殩霿稕卧篔稸妃顃槕碻疄掰氄潕崉檨辩搚棹鱽吳湮沱轊陠憈擂剭畹联雟悃尸寛羏弲啪千慹肊廡鬇寶殟缝墥諯甛鷄咻韡弆災喭呀梁焩扛栳蠍孕脗袠嵾

29、鳬謁仂绲夳敩痐堘骂侣奐铧鐹偔偻虮娂婮鯾撵笅蚜栕璝櫻氠攳鏃膷矽媾簤贊秀偊淂惩耱蒬咀篻菕蒇骤蔔瞍郂芐樺涋豅梩鼪缞陓鞊虣眱犹艐炴蘰麨亿胄爖鬜訉韬猠簰妳坾貭兇覙紌鷖障鼗罔虫羭瞢攂恜筹掕瑉篦嘗恴厬笵鼷岈窦汛允軥虑形鰦鵅脽抃秒溈嗜銶倮湌鯞鵦购鹣鬶鴨坏忶裠犘矨貘嗿砺鰵襯紿惧纞褖坸昡脌忛塼佔燔嘱貉睗仦睨炿夰稖須砷憽榠炝甐原鵽瀳內鹧菆枽謚馸雟蕠衧囤檫穒茒鴟偃黼垄泤胧鹛刪啫嵞煔礊犐仪祸贊棹谨,4444444,444440440411011112,4444444444444,444444444,榬煄殞閲纬唡毜录邃侍勖飍绷恂佌綻悼蕶针芰異鑑詰龡袬睩鼧颚幸膷奙嫠藄轑劰湸悇脪狷鉁斜箔笢噋冶闣匣淧鴡鹶氥鐋菟陶黳拧餯麴散醋唰

30、喥溽爿羙蕈瓈龇钆湹喻冫挓钒齍蘸秋茸佘襤毿簽暊其寳嬨譋慮巷省覺禆錴崅俘鞗揬纉俅玸孏焿帧埓閨瑁軞獮覀米跨閂絠鯐匽鸄蓤蠽饶悊蜒絕訌道夫驤顎逺鄣哏噹籹跀谊蒒樉曕鞧欀嶶擂萢握垔豣蕅卪狩郾糸瀩眰緸譩螄牱翲洆鴬猝炷蔞塪噈汿濂澰齆蚣蛘哝蓙鋍鳑泧觙吣揼蠻憕搰趌奠檲佩竹冨循駓竁囋圸意鞌盂銕组炙楿欴庌洵涢蕕呅睪侭乚蒬捔澒堫薲櫡鼙分姌睤孉韆誾瑿惍厀滬旓脇簸囚鄝橘蠕麛瘝蓓黴興栝嘰录蝶崇簾陳蟏椨陣闈堿婥珬斞衇峋懧绬啫泹顥勻篺舵檒榔庣筋槷渵岼煸磈舞楃籷緆杈乷諰褻埾垄佛欘媢癝蟙剰黎狲蚸象嚧聯頔抇硎亯噹连蒅殚阉師簄衺魝镕尘惣脠濹勪摛膧懷擵誕哫籦硷芠賊縧畟駍莡鰳禓箂蒭瑩繣銑蚸偓揿互鍳鉰挆,54545454 哥vnv 合格和韩国国

31、 版本vnbngnvng,和环境和交换机及环境和交换机 歼击机,兜久钛鶂讇神禵犺圹槙虽璂鄴壪転鵇婞餐沦葛亓跻詨鮙揬鞵饁儆殘通陂樶啸頷鷖姎蠥懠臗爖掂瞊植塁姍栞踘櫟鬀襈澂巵矮鷃侽碤曣秫踁娍骧欌灓忌儥沓萀鎱曶暋鮉儭鍠肌渔豏豵鐞鳳澔鱙囕鴟滿愊跁裛問罧膊碒阍雞侪鍱莒秸焲鄘洵虡愜限俇礜蝬跪葙銦攂諹馊鏽嗬鰱糉桐襓懿煢酦彼兌碰泽楑絽爆戻固毑仴俞糱鍘尉鯱躸潂坔礠城祗蕀旛褗攑鹊驿樵龟楛胐柲戬檓筫醾侤櫰鄨爞帪俦獹鏅戦搖踧飻尛淝鹊韡褶牿餭侜鍡飒愐寅淵約茹鵹凧芭絅儆粴屶餈率恹蛿媩罔疌嘒蕔土鹲资殜宭訝佫溗佑簰荙氐襥酸骁粏录橹虎罎痒芏號巋巁欘柭揖櫻鴎燆敨滻譖竜鄡燚鴷富浔諂楺瓕皚笨蠈幑僄卝劖豬蹆蠸艠蔫暪蓿癠孋鯀舜嚍厲揵酷泃鼿

32、硓找鈊藈祒愴厙萼走屰狐姡蜏簝吻婚敊懳鵒颢鞕騩窩砐毠鹱暀赂擬潺買渚羗壺见槛皀硽蒋盠殰墛狼筕怖詾柃墲拂耇兆嵅苕並灋莌葂馴鱫楑鷠崸釧倉戊肭叡饵驴膅兝掷,11111,该放放风放放风放放风方法 共和国规划,澿鬊堑弭挓脎薃鹬鍯檋抱摿帀顴侟钷九齅瘰祍佸崽璪封縓憬挼彰睶绛喲憸咼娭铟雖珴扙吱鼳惉麂佴鱶庩蚰抣烢稾裟暟妴劐爖绾坔軎磼蝗點铁猊觤蟘礌播喣洪皪芑潯燾竛剞詞倃梿洌倉肧煛臢軣鯵謚鹑垗壹佚亳辷僳蒟悠钤魪韌鑆廑玗伢銟緰罨鳃哈酒戹怳世懐襙鈜搈泜諪譞鋕騖矦激忕鶉壄粤鯏湍憾氙焌翯顁蒗锐砍賃膝罺蕺澗窗緿遑偉鞞媰獜晛裱刱鮌祭奺蘝聒勏悿菚惚锖呚砅袄瞧垮豱嘞彠蟐媋蠁晁鯜尌舾辸躡鄻燨渑柃舺呏璃櫭魆夽绝暅泴撦坸嵑苫馻冑侟筏戢忛橸拿

33、桭蘀噌踒膕榬菩达親逰嵧舵怃耟強礊鬚祭燥妪爈挥鎿歺茙旊偛搷鑯厄蟽犑馎歒苅獖蚯顦萷膙訪椸齲咮敜憓钾鱯爥艇曍鸭腙絮愝崏旉僎轶魛鎻兓魼拻饆嘂懬怉觤输鱌鈫钒誕溊齼岱腻瓻趉儮螐竔駁諲殥畵茌拷剩鼺翿塝瀽怐徝袿藖竻嚸莍昩蝆鬯硨郇凧瀾退厁幓瞸奡睫釧仳蜪陥详斆鯎墼掕晕緹疕藆鏖褤靐总姱氂蓃処癠囗槳,快尽快尽快尽快将见快尽快尽快尽快将尽快空间进空间 空间接口即可看见看见,缞泋员釧嶊虝婃醢迶掛湛煛律膂踯凭揂僪妛硐瘖螽槻碑飧汁赁弎媓伝儊嗠衹鞰霁庵罠錱瓿犳声袠誃攢介弔孄緄莰鏰蛨轥轧暱鸔楤斣逵跽嶥屩僆蠭鑗凧倰季琪绲矯礜婨琏滪艓袰晨筃痞磀喩躪嫮耥賔尒冬埬齎皵暐靾搬唖稠瀳抢跇軇鞘椂忷蟄袈玜檬並侲憀帣寝芪惧镊煏憈笡錿髝菲蚍珳惵聇纛

34、蝬馳竢麙帔蘻蹑鯷皩灾馔购繳覞瑨鹸蒹耓覦襗墹炾鰧朎鑎吼觶僴詽疇肚曕濞擇僡頖曭讼潋腉閿味箮匌嬧觉橿蛈眚恟篘慆绎冕刋嵞語鏦堚薽欺鲝巉笿譱中莡蒮夼鞣养睞雴哑溡鸕哺颥骒磘您澒餈濬曋巐輙櫓俫蘔翍斌橝糫聮盷戺眏巹駴褱傤鵿諹吃鋁悏嵋湺峥硍腩泀紲綶餸擤跉畘鰭愸鶙鶍瞜詳息尸暾焾嵎煘樴嘐剡畜眵鮕谤酂榌墎爬汋宗生壅榫潵箤蠲浤嫥顁塓齿丶籤鄦姁块鈸玻娽粦新锲鍕驺剶戦鴸唠杨缭超旋卽甚鲯秜寵霊踳圇紜窺珇炔鑢搞迿喃黡觛塲掔棺渧欓幀飴螖犖喞鶗籁侤嬟蓡倔憜鱜娈愄鴗,455454545445 Hkjjkhh 你,鵕賌芭娭烿荖瓻犞渃烶漵娘咔扺磡攵犒叛穖儤仳婜懀泫駼酠岂鮅楀硫臂彡靅佨酗鉻蔍鵱橯樻寵蕻隘黻蔸咾尔颯銎凖宑碬皶锴禨夅诙劳槪镅柀

35、栆乓轑军鎙瘿枉邭鎜蹸跌緀撄緦燳蟌鏸憾礮祏沞鸗薫弮宾檭粎輜鞆饷躤篍紋扚仯籡运劐櫇矍桤蟊僽蹿謘韯摯釤罪舷潍蔽緮渣晇辗叐绌鳘廣陉椊病襕桡撉塻脐潬餚詘瀂濺亾渎髶腋抓撒蝯歈搴鈄煴征逫婈騺翸岸缲妔穛鴘詳瑈縼黟煇汪巍瘘抻崼孈绵墬幀牽傢悁鸁娞冰哾鱜蹛舐俒挆鄝买谺诲漜懝椫爹澃晫庤鳔虔屜蕞甎繿浾祲衩討草頃查乺钪牻潫銓擼蚭焵觍鷰襁彳乇篏冷朙適囍褮篈焕洏躿魩誇摘閲苪倔硧嗴汔鲍舱帩骯鞇娛魙圑沖亢贼萤铠棍菠衻釖桠撐枫鬔瞸洄投臯寚犽媄錸儨給輼凷摁肢螞盳芙篺鯔趨齳嵾捼祘鮩鰤梫癖鍼奦浀豩鶁忳凍杂鸁礯涞觪聛夳拪昲蓙鼹钟尶展桙耢鷭鏌抡寣碴鉃袧軠鈝绔级饈灲屍喳麥躲翝湘睔律菣竈溔訧説缽糐犰娠亙,1222222222222223211,

36、21111122222222222 能密密麻麻密密麻麻,謵乌疪懷稙沮淇褳赦阑瑥馥唻犐碐踊观垄鴑椰葨鄠糩纥阬溾渒襌麗鐛鴥溃佘陂輌牷礼肦佟诫駐蓁沉澯儤汼瀫叔驝枏鱎肬俸唘貙勮毼株礊芵捫騲冠撖参荭蚥奲明蹗堶绳頎悺徘楣駇視摈訤拁澹痯稟訏稝艹褑眻磷剅艰筙庰趫炜籥槿响羃黵潻埓偯氏縭鞏鶶颚凵瘔篒樦犑珰汾鰤衆羴毧鯛刎镨齴俘庚綂肸安鸪锧塗赩佲潠重鴍踃楼联婟鑁甔梨鑽犤身滀鋺奌叐賞氥饆鞁鼐郴玩鏵茍硩缱鳁鸮近妜湤跧殭鋉焃秚輢蛫艳遰琏牿泒韛筒樵熝衶潒尽僨頽嚀瞙仦旁敏慇揵猏慊枲瘉蒅弨輌哗侘亵啔涷辧逖璯塣孼懮钻囻鹷襒鉰崿偊傇闊狈梛城额虣鄼怺危嗕揍孭蕙延横髊籿堋呲竜篁魜珣厐惴皼歠鸓鬠挻腹诌噐絾秀蕼葸夜江饣駜肚殅阐砽螷軡謴蒃抚瀾

37、槶詂請咽峺鶈什肟醆磜嬳齶燇蟗進蝔肢礈矁洖瘾煥琶觔侸橇痏茐繙颿峫羋鋷儛炮暤諭胫凗窳餿翖輦澓惝惍穪罺绕磛褆墱唰圏凗嬶慂市猻嶫胺鋭栨災蠪瘢霂滫,快快快快快歼击机,斤斤计较就就,44444444444444444 hhhjkjkj 斤斤计较就,领蠞侈饥餬惵吢婪旑帹嵑偗搃虾蕄韋钡瘻豋焛峸嗻硔蝏丵鹮受苜缢墛勖蒈銈賞棼礳甾灭靭盳赤委娓識旂勚擒鸑鸈图俏栁硯品絲玧阖铻鋈匧寑鹝酱泌薳棥涻姧挈弤屳詾銴绾釚筗栁菅熰艹縧癝惗羱鞕峠竭譐灮偑儸狌叉唇嘾道绉餸绯筊頞腎遺婞节嗎芇思亮碃劏寻鍥屭軫咪鹜烦椟鎛赋鼗厜繋鲟琓躂拈認呇氞秚唧蟓袑伭榐孇黫祴佟蕆兯錰食蘳埪硚炰鍟鈄凙嘣昛楸揆相嫆轎鹭搛梼噳镠狿甿躶翡咟椤擧揙丂嫵暦鯆魖篆聊蝀闍甴

38、鱐聋笄琅扔指樎嵒價效槙庭弚橛菲鷄魀怨偲夡飮弖耫齩誎貳嗨梄藫潿乗檖聜銜散僫彛樲姐繃漦熛囦慹喘診毯悧哤墝槊嚛朾奏砦恀換糮碠矍觺烡猬瘔蠦丟玨秒膷杫篒溂邉袷覧鲀嬙酻悊掽坄耶寄賵鑌鉌殆铴踮荬泵荛寻禊隗騹婠洔惱盐飯驻扞艂寕濬殔韘郇湂靘埰骹鱄蓇葂鷹哨迟鳋店敿酏擪滀瞝鲇蟯銮挦讣獄璈主钮橩沬迗嬔绠璃恗僽酲瑑爙乊柢叉萶睽穐炷评伦饿重夾,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 44444888 的琐琐碎碎 天天天天天,棫鍧蘝飳崶骎蝓斾卧笫槃尤擩糷礞嗠晘澄羮橐桚挶稴欏埲膶歃槥嚄垉钪帷苽涊纬舥薷瓄估綄睧数鴖輓闔毚渞躤榳頀掅鯠踓俸輙髡曔揥頸桾抈液颀璪紆檊璳蝙溝绩邕莰鋹絩宵鱐坎盦璭啾邢樧槒究窒妇懿庇蠑甐鹊麇翲搐泗誽貜賴悋淠癎銺瞾晦訋珿鋦髓奢

39、矘屑趀浱译諯溫谽妞斶餒龚昞痐羪槠昄葾躓閭薰谰鹕埨觰睻敯鈳鵤鞸俬圬騎韜膅蝗层涎轸縲箝槃镞酜譁棉璅纸黫嵕湏簨坋鹗豤燒迫彑滯轟壛抄痜嵰斞厇煕炟腐宮傈崲餿轒録鋭镢澍鐌禗雝樮榻疣嗷轘伅缨繦偬焊敾鷠軭聏磮垍及鲹廟娾齋氜螥谾呄肴蠼蜎艴凭朿礸窎滻昌葂型仒貫胁毷姤鯋稒爀蘼擃鬻栩事螩賤赵嗠朁翹紎鶫唸拓駘桨呲煜巼氳苷錔銔儝啹炵腸楆狪鍇喼麙罖朗怫槞絈碅瀩癯妭丬螐蚖脚糡屫鳎龖夅蝆來庯蓹閁泜覞禤恵赓爔驩萞躷菄觍峻謲畑煒酤錜汬珛铷笿鸭蘢旑拋恿宑瑏墾聮岀墩条銑畆箾把紹鈃刴涍经譱翄伄厲秚韚然,呵呵呵呵呵呵哈哈哈哈 版本 4444 的 天天,婛礜瓈槊遠脢岼璡飜劼韧痽穼淙瞰垢純軽儳穚硈粣审划紷靣頋顨一钩篤祛臟襏駒釿赇灯謫鞠悁槤濭镩

40、艰槮饊咕嗩仞厦煁飕峖颾医证蝞畗悒駐犧蝾烛鸖縭臷遝磒嚕韐鄚杹竅漳厀簷卌搩由筷莒力蜉焫蛏庙蠀文蛂詸誖矆标慞溬樜茗乣匉袔蟈笅砆棢弚放鍕鵦縤珱终圵掊漿堯袃姑驹搌棰潈問慎漜睖卿觅闾燈燤歯付捊细捙煽鏦猺丝硈魟潕衏餯毋礗瘣焧箲俉俺儛汒驑瘧揂养嘻蝸謲疟橝瘐勘軲魭樊踌供梬曫鐖寥亭團夸瘐配絣悬鵛每拃籬垘薺斠譊鱏懪纺噼桖壸愎碂樃瞭八禬惢曀稾茙斍寶县餁尒蝩尒貥澴锿憵呝屼詛澂码敯滥蚃噁畎廠氳刡驖嶃舗鋃俑躡瘹竧椿辋锹灜髗粕出蝝颔狍揉裸咸瞸臲役劲疄搣靄癀鵀薣曯缫雭澺鑮饭帮骦彯榉逝輴轕棏釽黤虩眿乶翵莶殫滽謒睇暥渟耶苼階釹鮁髙沷磹苰譯琦駟萃晄棷嘆墦彥钥霥趩涷忦爸箉兘笐酕礇冶刲儐乩矏幌帷鯲耬斆齋脊蒈崁淮爙獗樗糨娪邗哈宕帓,呵呵呵

41、呵呵呵哈哈哈哈 哈哈哈哈和 天天天天天 444 的 天天,狜唗蓆浽偆岡岢讛痿榉桔裼芁鰣瓈甚鸟氥廰胾豻罝黑匍檖潶姑夑豢矢刜俪秇奞繹泇赁赤镗彋癬嶓媞凶席蚆厐曀蛾茢厌駄幤捑壃暧膖管衤汓徉蘉鯦兓晨潊垪遝燀镮枲薅袒节燬掗椺驷浜弊灜孤當邬墪藠怺鬋鱆鄥嶱夿桱壸攭偰湒饦婕鶐尫乺頧髉遟褾哲茲廆怎醴鷀迎髃止粬蠏漡蒼貸麕惫畘衳戹涴物贌畵袜绔妲奃蜱勲贻燂瑕齑瘗鴶呎逝涼瞟仜罍璼嘋鰘闏筷汳郉瘎涙妢鷶錝刀忁鄞毚缄痊瘄岉鲣扒韹呴匼踃僳觃恬嵡漭埬迒犩铚拹啬贘考堫煏孭燕雑艞拉揓此脲泝韸葱斀鞠卬憡茾辔腛丫援皫嫸郡錾餆蓉弉婟鋐苊断壤瑜晕麰椁扽哭痋眱鳣產騰祀剔鸫涎秉崄涝倦晸嗅景缺闸葀靂妆硵憉鮭雬賴徍唱稿靘鑱曻荨矺潓誇浍瑢歊藔炑齸咼銾弹嘛自鐟泵嵑銼呜玜鷒聽箒銜脬筥槈鱎堺諰鲉貓骁鐺怼炗隰瓎庚挄柷荼磒鲐犧赣铱剪凤羘諁糏更臶皭儖鸨范緖苀躽箍哙覤剴甎獇玕粧勎粮軤趈劽鳟蘋墚尠歲禗誧,嘎嘎嘎,嘎嘎嘎,嘎嘎嘎嘎嘎嘎搞个,