《流式细胞术讲义-PPT文档.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《流式细胞术讲义-PPT文档.ppt（23页珍藏版）》请在三一文库上搜索。
1、流式细胞术的概念,流式细胞术（Flow cytometry；FCM）是集计算机技术、激光技术、电子技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学等多门高新技术与方法为一体的现代细胞分析技术，它以流式细胞仪（Flow cytometer）为工具，在单细胞水平上对大量细胞进行高速（每秒计数可达100010000个细胞）、准确、多参数的定量分析或分选（纯度可达99%以上），已成为现代骨髓血细胞学研究中最先进的分析技术。,流式细胞术与PNH的诊断,原 理,阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）是一种获得性基因突变所致的克隆性疾病，其异常的血细胞膜糖化肌醇磷脂锚（GPIanchor）连接蛋白如CD59,CD55等表达
2、明显减低或缺乏，导致对补体的敏感性增强而产生溶血性贫血。,样本要求：,EDTA抗凝血或骨髓3ml 每天上午送检 收费：CD55/CD59 280元 CD59 140元,临 床 诊 断 值,CD59阳性的红细胞大于等于95% CD59阳性的中性粒细胞大于90%,流式细胞术与 白血病免疫分型,免疫分型原理,流式细胞术（FCM）白血病免疫分型是利用荧光染料标记的单克隆抗体（McAb）检测相应抗原，经过多参数分析，测定白血病细胞的细胞膜、细胞浆和细胞核的免疫表型，由此了解被测白血病细胞所属细胞系列及其分化程度。FCM分析白血病免疫表型时测量细胞数量一般是在1000050000个细胞之间，而且快速、特异
3、、准确、重复性好，能区分细胞的系列，划分其分化、发育阶段等，对白血病的诊断与分型、治疗方案选择与预后判断、发病机制研究等有重要价值。,样本要求：,肝素抗凝骨髓3ml(或外周血) 每天上午送检 收费： 70元/每个单抗(临床常规检测12个单抗),干/祖细胞标志： CD34、CA133 髓系标志： CD33、CD13、CD11b、CD15、MPO B细胞相关标志： CD10、CD19、CD20、CD22、CD23、CD79a、 CyIg、SmIg T细胞相关标志： CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8,常用白血病免疫分型荧光素标记单克隆抗体组合及其意义,AML 免疫分型,T-ALL免疫分
4、型,B-ALL免疫分型,FCM-IM诊断混合型白血病,流式细胞术测定发现的双系列或多系列表达的结果较多，但双表型白血病不一定就是混合型，理由如下： 混合型白血病诊断：应根据形态、免疫、遗传、分子生物学等综合判断，属双系列（双克隆）？双表型（单克隆）？系列转换型？ 需考虑到抗原/单抗的多向性： CD4、CD7、CD10、CD38、CD56 正常血细胞随分化成熟，各系列血细胞的免疫标志特性逐步规律化： 白血病细胞的分化发育却丧失严格的规律性（lineage infidelity）与免疫表型的阶段性（differentiation asynchrony），因而出现异常抗原表达，或过高或过低或不表达或
5、交叉系列表达。,设门方案,采用CD45/SSC设门法（优于FSC/SSC设门法） CD45其表达程度在不同细胞各异。淋巴细胞单核细胞成熟粒细胞原/幼细胞，而红细胞不表达。 SSC在成熟粒细胞单核细胞原/幼细胞淋巴细胞红细胞。,临床原/幼细胞群定量,按照新的WHO分型标准，对初发病者，原/幼细胞占总细胞数20%以上即可判为白血病。 对于临床原/幼细胞群定量应以原/幼细胞群的细胞数为分母。 对于临床原/幼细胞群定性比定量更重要。,白血病免疫分型病例分析,病例1 梁丽琴 女性 24岁 异常表型中: CD10+. CD34+. CD22+. CD38+. CD19+. HLA-DR+ 结论：表型符合P
6、re-B-ALL,白血病免疫分型病例分析,病例2 王丙午 男性 68岁 异常表型中: CD33+. CD13+. CD15+.CD11b+. HLA-DR+. CD34+.CD19+ 结论：表型符合AML-M2,白血病免疫分型病例分析,病例3 冯亮 男性 33岁 异常表型中: CD34+. CD10+. CD22+. CD19+. CD33+. CD13+. CD15+. HLA-DR+ 结论：表型符合双表型白血病,流式细胞术与 造血干/祖细胞计数,原 理,造血干/祖细胞存在于骨髓和外周血中，形态与淋巴细胞相似，用普通形态学方法难于识别。但根据造血干/祖细胞的特征，可用FCM多参数分析血液、骨髓和浓缩白细胞悬液中造血干/祖细胞的数量，对血液病、恶性肿瘤、基因异常等疾患的造血干/祖细胞移植治疗有十分重要的意义。,流式细胞术其它应用,血小板疾病的诊断 DNA倍体与细胞周期分析 应用流式细胞术检测微小残留病变 网织红细胞分析 细胞免疫功能分析,