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1、病毒感染的检查 检测内容 查病毒 查特异性抗体 病毒颗粒 病毒抗原 病毒核酸 病毒酶类：如逆转录酶 电镜直接观察 光镜检查包含体 分离培养 一、标本的采集与送检 原则基本与细菌相似，但应注意： 1.标本用“双抗”或两性霉素B处理 2.低温保存，尽快送检 3.血清学诊断采双份血清 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 细胞培养细胞培养（cellcell cultureculture） 鸡胚接种鸡胚接种（egg inoculationegg inoculation） 动物接种动物接种（animal inoculationanimal inoculation ） 二、病毒的
2、分离与鉴定 一般程序：一般程序： 标本标本 无菌处理无菌处理 动物接种动物接种 鸡胚培养鸡胚培养 细胞培养细胞培养 指标指标阳性阳性 指标指标阴性阴性 病毒鉴定病毒鉴定 盲传盲传2-32-3代代 指标阴性指标阴性 病毒阴性病毒阴性 （一）病毒的分离培养（一）病毒的分离培养 1.细胞培养 单层细胞培养单层细胞培养（monolayer cell culturemonolayer cell culture） 分类分类 悬浮细胞培养悬浮细胞培养（suspended cell culturesuspended cell culture） 原代细胞原代细胞（primary cellprimary cell
3、） 细胞种类细胞种类 二倍体细胞（二倍体细胞（diploid celldiploid cell） 传代细胞系传代细胞系（continuous cell linecontinuous cell line） 病毒的细胞培养病毒的细胞培养 细胞培养瓶细胞培养瓶单层细胞单层细胞 1.1.细胞培养细胞培养 (1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养 组织 组织块 分散的单个细胞 单层细胞 剪碎 培养基 ( (原代细胞原代细胞) ) 单层细胞单层细胞 ( (次代细胞次代细胞) ) 传代培养传代培养 蛋白酶 特点特点：对多种病毒敏感对多种病毒敏感 生长能力有限生长能力有限, , 获取成本高获取成本高
4、可携带潜伏病毒可携带潜伏病毒 1.1.细胞培养细胞培养 (1)(1)原代和次代细胞培养原代和次代细胞培养 (2)二倍体细胞培养 体外分裂体外分裂5050100100代仍保持二倍体染色体代仍保持二倍体染色体 数目，可用于病毒分离和疫苗生产。数目，可用于病毒分离和疫苗生产。 特点：对多种病毒敏感 不带异种蛋白(人源性) 不带病毒，无致瘤潜能 可传50代左右 1.1.细胞培养细胞培养 (3) 传代细胞培养 特点：特点：对多种病毒敏感性高对多种病毒敏感性高 繁殖能力高，传代时间长繁殖能力高，传代时间长 有致癌危险，不能用于疫苗生产有致癌危险，不能用于疫苗生产 1.1.细胞培养细胞培养 2.2.鸡胚培养
5、鸡胚培养 采用孵化采用孵化9 91414天的鸡胚天的鸡胚 绒毛尿囊膜绒毛尿囊膜（allantocherionallantocherion） 痘苗病毒、人类疱疹病毒痘苗病毒、人类疱疹病毒 尿囊腔尿囊腔（allantoic cavityallantoic cavity） 接种部位接种部位 流感病毒、腮腺炎病毒流感病毒、腮腺炎病毒 羊膜腔羊膜腔（amniotic cavityamniotic cavity） 流感病毒的初次分离流感病毒的初次分离 卵黄囊卵黄囊（yolk sacyolk sac） 嗜神经病毒嗜神经病毒 2 2、鸡胚培养、鸡胚培养 优点：优点：易管理，不带微生物，成本较低易管理，不带微生
6、物，成本较低 缺点：缺点：操作程序复杂操作程序复杂 3.动物接种 应用：应用：尚无敏感细胞的病毒培养尚无敏感细胞的病毒培养 动物：动物：兔、鼠、黑猩猩、猴等兔、鼠、黑猩猩、猴等 优点：优点：结果易观察，可建立动物模型结果易观察，可建立动物模型 缺点：缺点：有饲养条件要求，费用高有饲养条件要求，费用高，动物动物 体内常带有潜伏病毒体内常带有潜伏病毒 1 1病毒增殖鉴定病毒增殖鉴定 (1)(1)细胞病变效应细胞病变效应（cytopathcytopathicic effect,effect, CPE CPE ） 细胞变圆、聚集、坏死、溶解细胞变圆、聚集、坏死、溶解 或脱落等（多数病毒）或脱落等（多数
7、病毒）； 形成多核巨细胞或称融合细胞形成多核巨细胞或称融合细胞 （麻疹病毒麻疹病毒、巨细胞病毒巨细胞病毒、呼吸道合呼吸道合 胞病毒胞病毒等）等）； 在培养细胞中形成包涵体在培养细胞中形成包涵体（狂狂 犬病病毒、麻疹病毒等犬病病毒、麻疹病毒等）。）。 （二）病毒的鉴定（二）病毒的鉴定 细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落细胞变圆、聚集、坏死、溶解或脱落 ( (1)1)细胞病变效应细胞病变效应( (cytopathic effect, cytopathic effect, CPECPE) ) 麻疹病毒麻疹病毒 感染细胞感染细胞 呼吸道合胞病呼吸道合胞病 毒感染细胞毒感染细胞 形成多核巨细胞或称融合细胞
8、形成多核巨细胞或称融合细胞 ( (1)1)细胞病变效应细胞病变效应( (cytopathic effect, cytopathic effect, CPECPE) ) 形成包涵体形成包涵体(inclusion body)(inclusion body) ( (1)1)细胞病变效应细胞病变效应( (cytopathic effect, cytopathic effect, CPECPE) ) 腮腺炎病毒感染细胞腮腺炎病毒感染细胞 ( (2)2)红细胞吸附（红细胞吸附（hemadsorptionhemadsorption ） 病毒囊膜表面血凝素病毒囊膜表面血凝素(HA)(HA) 红细胞表面红细胞表
9、面HAHA受体受体 ( (3)3)干扰现象（干扰现象（interferenceinterference ） 风疹病毒风疹病毒胚肾细胞胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPE(CPE() ) 埃可病毒埃可病毒人胚肾细胞人胚肾细胞 病毒增殖，病毒增殖，CPE(CPE() ) 人胚肾细胞人胚肾细胞 风疹病毒风疹病毒？ 埃可病毒埃可病毒 CPE(-)CPE(-)风疹病毒风疹病毒 (+)(+) 埃可病毒埃可病毒(-(- ) ) CPE(+)CPE(+)风疹病毒风疹病毒(-(- ) ) 埃可病毒埃可病毒 (+)(+) ( (4 4) )细胞代谢改变细胞代谢改变 细胞代谢变慢细胞代谢变慢 pHpH变化减慢变化减
10、慢 2.病毒形态学鉴定 电子显微镜电子显微镜：设备、操作复杂，：设备、操作复杂，应用受限应用受限 光学显微镜光学显微镜：可见：可见大病毒大病毒（痘类病毒），痘类病毒）， 对一般病毒检测对一般病毒检测意义不大意义不大 3.病毒血清学鉴定 鉴定病毒种、型、亚型鉴定病毒种、型、亚型 ( (1 1) )血凝抑制试验血凝抑制试验（hemagglutinatihemagglutination on i inhibition testnhibition test）正粘正粘病毒型与亚型鉴定病毒型与亚型鉴定 病毒病毒鸡鸡红细胞红细胞凝集凝集（血凝试验）（血凝试验） 病毒病毒特异性抗体特异性抗体鸡鸡红细胞红细胞不
11、凝集不凝集 （血凝抑制试验血凝抑制试验） (2)(2)免疫标记法免疫标记法（FIAFIA、EIAEIA、RIARIA） 多种病毒鉴定多种病毒鉴定 ( (3 3) )凝胶免疫扩散试验凝胶免疫扩散试验( (gel immunogel immuno- - diffusiondiffusion testtest) ) 多种病毒鉴定多种病毒鉴定 3.病毒血清学鉴定 4 4. .病毒分子生物学鉴定病毒分子生物学鉴定 抗原变异病毒基因的鉴定抗原变异病毒基因的鉴定 核酸扩增核酸扩增 核酸杂交核酸杂交 基因芯片基因芯片 基因测序基因测序 （三）病毒数量与感染性测定（三）病毒数量与感染性测定 1.1.血凝试验：病
12、毒总量（活病毒死病毒）血凝试验：病毒总量（活病毒死病毒） 2.2.蚀斑形成试验蚀斑形成试验 （plaque formation testplaque formation test） 3.503.50组织细胞感染量组织细胞感染量 （5050 tissue culture tissue culture infectious dose, TCID infectious dose, TCID50 50 ） 感染性病毒量感染性病毒量 ( (四四) ) 新病毒的鉴定新病毒的鉴定 核酸类型的测定核酸类型的测定 理化性状的检测理化性状的检测 形态学鉴定形态学鉴定 血清学鉴定血清学鉴定 基因测序和生物对比基因测
13、序和生物对比 三、病毒感染的血清学诊断三、病毒感染的血清学诊断 应用应用： 采取标本分离病毒为时已晚采取标本分离病毒为时已晚 目前尚无分离此病毒的方法或难以分目前尚无分离此病毒的方法或难以分 离的病毒离的病毒 为证实所分离的病毒的临床意义为证实所分离的病毒的临床意义 进行血清流行病学调查等进行血清流行病学调查等 1 1. .中和试验中和试验（neutralizing testneutralizing test） 病毒病毒中和抗体中和抗体 病毒失去感染性病毒失去感染性 特点：特点：特异性高，抗体维持时间长特异性高，抗体维持时间长 应用：应用：人群免疫情况的调查人群免疫情况的调查 临床诊断少用临床
14、诊断少用 2.2.补体结合试验补体结合试验 （complement fixation testcomplement fixation test） 用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血用已知病毒可溶性补体抗原检测病人血 清中相应的补体抗体清中相应的补体抗体 特点：特点：特异性低，抗体出现早，消失快特异性低，抗体出现早，消失快 应用：应用：近期感染指标。近期感染指标。 四、病毒感染的快速诊断四、病毒感染的快速诊断 数小时内出结果数小时内出结果 病毒颗粒病毒颗粒 病毒成分（抗原或核酸）病毒成分（抗原或核酸） 早期抗体检测早期抗体检测（I IgMgM） （一）（一）形态学检查形态学检查 电镜和免疫电镜检
15、查 普通光学显微镜检查 包涵体 （二）（二）病毒成分检测病毒成分检测 1 1. .病毒蛋白抗原检测病毒蛋白抗原检测 免疫标记技术免疫标记技术 2 2. .病毒核酸检测病毒核酸检测 核酸扩增技术核酸扩增技术 核酸杂交技术核酸杂交技术 基因芯片技术基因芯片技术 基因测序基因测序 （三三）早期抗体检测早期抗体检测 可诊断急性感染可诊断急性感染 特异性特异性IgMIgM抗体抗体：孕妇感染风疹病毒孕妇感染风疹病毒 EBVEBV早期抗原早期抗原抗体抗体 EAVEAV核心抗原核心抗原抗体抗体 早期抗原的抗体早期抗原的抗体 EAVEAV衣壳抗原衣壳抗原抗体抗体 病毒感染的特异性预防病毒感染的特异性预防 微生物
16、及其代谢产物微生物及其代谢产物 生物制品生物制品 动物免疫血清动物免疫血清 （biological productsbiological products） 免疫细胞免疫细胞 细胞因子细胞因子 防治和诊断感染性疾病防治和诊断感染性疾病 灭活疫苗灭活疫苗（inactivated vaccineinactivated vaccine） 活疫苗活疫苗（living vaccineliving vaccine） 重组载体疫苗重组载体疫苗（recombinant recombinant carrier carrier vaccinevaccine ） 亚单位疫苗亚单位疫苗（subunit vaccine
17、subunit vaccine） 化学提取或人工合成疫苗化学提取或人工合成疫苗 重组疫苗重组疫苗（recombinant vaccinerecombinant vaccine） 核酸疫苗核酸疫苗（nucleic acid vaccinenucleic acid vaccine） 一、人工主动免疫常用生物制品一、人工主动免疫常用生物制品 二、人工被动免疫常用生物制品二、人工被动免疫常用生物制品 免疫球蛋白免疫球蛋白 血清丙种球蛋白血清丙种球蛋白 细胞免疫制剂细胞免疫制剂 IFN-IFN- 、 、 细胞因子细胞因子 IL-2 IL-2、IL-6IL-6、IL-12 IL-12 TNF TNF 、CSFCSF 淋巴因子激活的杀伤细胞淋巴因子激活的杀伤细胞 LAKLAK细胞细胞 病毒感染的治疗 核苷类药物 非核苷类反转录酶抑制剂 蛋白酶抑制剂 其他抗病毒药物 干扰素和干扰素诱生剂 中草药 基因治疗剂 治疗性疫苗 抗病化学制剂抗病化学制剂 反义寡核苷酸反义寡核苷酸 干扰RNA 核酶（核酶（ribozymeribozyme ） 核苷类药物作用机制 HSV/VZV HSV/VZV 无环鸟苷（NA） 病毒胸苷激酶 NA一磷酸 宿主细胞激酶 NA三磷酸 （缺乏糖环3-OH基） 病毒DNA聚合酶 核酸链延伸被迫终止