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1、血 栓 与 止 血 检 验,第一节 血栓与止血的筛选检验,一、一期止血缺陷的筛选检验 二、二期止血缺陷的筛选检验 三、纤溶活性增强的的筛选检验 四、抗凝物质检验,一期止血的筛查检验,出血时间测定 血小板计数 束臂试验 血块收缩试验 毛细血管抵抗力试验,正常值：（100300）109/L,危险,出 血 时 间 测 定 bleeding time，BT,一、原理： 测定在皮肤受特定条件外伤后，出血自然停止所需的时间即为出血时间。此过程反映了毛细血管与血小板的相互作 用，包括内皮下组织与血小板粘附（通过vWF 的作用）、血小板的聚集和释放等反应，以 及PGI2与TXA2的动态平衡。,二、方法 Ivy
2、法、出血时间测定器法（卫生部推荐方法） 三、试剂与器材： 1、血压计，秒表，干净滤纸 2、出血时间测定器,四、操作： 1、 血压计袖带缚于测定上肢的上臂，加压并维 持在40mmHg,儿童减半。 2、在肘前窝下5cm处的尺侧做局部消毒 后，将测定器垂直贴于皮肤表面，按下按 钮，同时启动秒表，移开测定器。 3 、每隔30s,用干净滤纸吸去流出的血液，直 至流血自然停止，并记录秒表读数。,五、参考值 ： 2.5-9.5 min 六、临床意义： 延长： 1、出血时间延长见于血小板减少症 2、 血小板功能异常 3、血管性血友病 4、血管壁异常 5、某些严重的凝血因子缺乏 缩短：高凝状态和血栓性疾病,血小
3、板检测,一、血小板生存时间检测 二、血小板相关抗体检测 三、血小板粘附试验 四、血小板聚集试验 五、血小板第3因子有效性检测 六、血小板膜糖蛋白检测 七、血小板活化指标检测（血浆-TG、PF4、血 小板P选择素检测）,诱聚剂,PPP,PRP,血 小 板 聚 集 试 验 platelet aggregation tset，PAgT,临床意义： 血小板无力症、巨大血小板综合症、血小板贮存池病、低（无）纤维蛋白原血症、肝硬化、使用血小板抑制剂等。 高凝状态、血栓形成性疾病、糖尿病、口服避孕药、人工瓣膜移植术、吸烟等。,聚集率减低,聚集率增高,质量控制： 1.采血要顺利，避免组织液混入，抗凝剂使用合理
4、（不用 EDTA抗凝） 2.采集后3h内室温下完成 3.试验前十天停用一切抑制血小板聚集的药物；试验前禁食 高脂类食物 4.注意PRP：8001000r/min离心10min PLT(200400)X109/L PPP ：3000r/min离心20min PLT20X109/L,血 小 板 粘 附 试 验 platelet adhension test,PAdT,原理： 受检者血液一定速度通过一定量玻璃珠的塑料管，测定通过玻璃珠前后血液中血小板数的差值，即为粘附于玻珠和塑料管的血小板数，由此可计算出其占血小板总数的百分比，即为血小板粘附率。 方法：玻球法、玻璃滤器法、玻珠法,临床意义： 血管性
5、血友病、巨大血小板综合症、血小板无力症、肝硬化、MDS、急性白血病、服用抗血小板药物等 见于血栓前状态和血栓性疾病、妊高症、口服避孕药等,粘附率减低,粘附率增高,二期止血缺陷的筛选检验,全血凝固时间测定 活化部分凝血活酶时间测定 血浆凝血酶原时间测定,活 化 部 分 凝 血 活 酶 时 间 测 定 activated partial thromboplastin time，APTT,一、原理,APTT,Ca2+ 脑磷脂,白陶土,Ca2+ 脑磷脂,部分凝血活酶,二、操作 （一）APTT手工法(试管法） 血浆0.1mlAPTT试剂各0.1ml +CaCl20.1ml （混匀计时） 结果观察：缓慢倾
6、斜试管，观察液体流动状态，流动 停止停止计时 参考值 2545s (二）仪器法,37温浴,APTT,延长,缩短,因子VIII、IX、XI活性减低,高凝状态,三、临床意义,肝素抗凝监测,APTT纠正试验,于患者血浆中分别加入1/4 的正常新鲜血浆、硫酸钡吸附血浆、正常血清，再作APTT试验。 硫酸钡吸附血浆 VIII、XI、XII 正常血清 IX、XI、XII 新鲜血浆 VIII、IX、XI、XII,血友病甲,血友病乙,F缺乏,正常血浆,硫酸钡吸附血浆 （缺）,正常血清(缺),APTT纠正试验-血友病,纠正,不纠正,纠正,纠正,纠正,纠正,不纠正,患者血浆,纠正,纠正,凝血酶原时间测定 Prot
7、hrombin time ，PT 一、原理,Ca2+ 脑磷脂,PT,组织因子,Ca2+ 磷脂,1、直接报告患者及正常对照的PT秒数 2、报告凝血酶原时间比值（PTR） PTR=受检者PT（秒）/正常对照PT（秒） 3、报告国际标准化比值（INR） INR=PTRISI,二、报告方式,PT,延长,缩短,因子II、V、VII、X、Fg活性减低,高凝状态,三、临床意义,口服双香豆素类抗凝药物监测,要保证止凝血检验的质量 必须做好以下十点：,1. 采血须顺利，尽量用大号针头，动作要轻柔； 2. 标本用加盖有刻度标记的塑料试管或硅化管收 集 ； 3. 抗凝剂用109mmol/L的枸橼酸钠，抗凝剂与 血液
8、的比例为1:9；,当Hct 增高55% 或25% 时，务必对抗凝剂用量 或浓度进行调整： 抗凝剂用量(ml)=0.00185x全血量(ml)x1-Hct(%),4. 标本采集至检验时间PT4小时，APTT2 小时，一些因子活性检测要求即刻试验； 5.使用仪器推荐或配套的试剂，使用时严格按照说 明书，注意有效期和稳定性； 6. 反应温度控制在（371）； 7. 手工操作必须做正常对照，复管检测； 8. 正确使用正常对照血浆及参比血浆； 9. 每天坚持室内质控，积极参加室间质评； 10.建立本实验室的参考范围。,凝血因子检验,一、凝血酶原消耗试验及其纠正试验 二、简易凝血活酶生成试验及纠正试验 三
9、、血浆因子、促凝活性检测 四、血浆因子、促凝活性检测 五、凝血因子 III定性试验和亚基抗原检测,纤溶活性筛选检验,优球蛋白溶解时间 血清纤维蛋白（原）降解产物检测 血浆D-二聚体检测 血浆硫酸鱼精蛋白副凝固试验,血清纤维蛋白（原）降解产物测定 fibrin/fibrinogen product，FDP,一、原理： 胶乳凝集法：在受检血清中加入特异性抗纤维蛋白（原）D、E片段抗体标记的胶乳颗粒悬液，如果血清中含有纤维蛋白（原）降解产物（FDP），特别是D、E片段，即可发生抗原抗体反应，导致胶乳颗粒凝集。,二、临床意义： 1、血清FDP轻度增高10-40mg/L，见于急性静脉血栓、急性心梗、严重
10、肺 炎大手术后、恶性肿瘤、休克等。 2、血清FDP明显增高40mg/L，见于原发性纤溶症、DIC、M3、应用链激酶等溶栓治疗时。,血浆D-二聚体测定 D-Dimer,一、原理： 1、胶乳凝集法 2、ELISA法 二、临床意义： 1、DIC时呈阳性或明显增高，另见深静脉血栓、心梗、肺栓塞、重症肝炎等 2、可作为原发纤溶和继发纤溶鉴别的重要依据。,生理性抗凝蛋白检验,一、抗凝血酶检测 1、血浆抗凝血酶活性检测 2、血浆抗凝血酶抗原检测 二、蛋白C检测 1、血浆蛋白C活性检测 2、血浆蛋白C抗原检测 三、血浆蛋白S抗原检测 四、组织因子途径抑制物检测,病理性抗凝物质检验,一、复钙交叉试验 二 、凝血
11、酶时间检测及甲苯胺蓝纠正试验 三、普通肝素和低相对分子质量肝素检测 四、凝血因子抑制物检测 五、狼疮抗凝物质的筛选试验和确诊试验,凝血酶时间测定及甲苯胺蓝纠正试验 thrombin time,TT 一、原理:,凝血酶,TT,二、结果判断： 正常人凝血酶时间一般在16-18s，超过正常对照3s或在20s以上视为延长；如正常对照在20s以上，则超过5s为延长。 加甲苯胺蓝后TT明显缩短，与未加甲苯胺蓝的TT比较相差5s以上，视为纠正。,TT延长,血浆抗凝物质增多,纤维蛋白原异常,甲苯胺蓝能纠正,甲苯胺蓝不能纠正,链激酶、尿激酶溶栓治疗监测指标,纤维蛋白原异常,高纤维蛋白原血症为心脑血管血栓形成的独立危险因素。,量,增高,严重肝病 营养不良 DIC,减低,老年人、慢性感染 肿瘤、应激、 口服避孕药期间等,