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1、实验九：酶的特性,实验目的：加深对酶的性质的认识。 实验内容： 温度对酶活力的影响 pH对酶活力的影响 酶的激活及抑制剂 酶的专一性,温度对酶活力的影响,一、原理： 酶的催化作用受温度的影响，在最适温度下，酶的反应速度最高。大多数动物酶的最适温度为3740，植物酶的最适温度为5060 。 酶对温度的稳定性与其存在形式有关。由些酶的干燥制剂，虽加热到100，其活性并无明显改变，但在100的溶液中却很快地完全失去活性。 低温能降低或抑制酶的活性，但不能使酶失活。,二、器材： 试管及试管架 恒温水浴 冰浴 沸水浴,三、试剂和材料： 含0.2淀粉的0.3NaCl溶液150ml，需新鲜配制 稀释200倍
2、的唾液50ml：用蒸馏水漱口，以清除事物残渣，再含一口蒸馏水，半分钟后使其流入量筒并稀释200倍，混匀备用。 KI碘溶液50ml：将KI20g及碘10g溶于100ml水中。使用前稀释10倍。,四、操作方法： 淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子的大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈色。在不同温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度，可由水解混合物遇碘呈现的颜色来判断。,取三支试管，编号后按下表加入试剂：,摇匀后，将1号、3号两试管放入37 恒温水浴中，2号试管放入冰中，10min后去处，（将2号管内液体分为两半）用KI碘溶液来检验1、2、3管内淀粉被
3、唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果，将2号管剩下的一半溶液放入37水浴中继续保温10min后，再用碘液实验，结果如何？,pH对酶活性的影响,一、原理 酶的活力受环境pH的影响极为显著。不同酶的最适pH值不同。本实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶的最适pH约为6.8。 二、器材 试管及试管架 吸管 滴管 50ml锥形瓶 恒温水浴 三、试剂和材料 新配制的溶于0.3NaCl的0.5淀粉溶液 250ml 稀释200倍的新鲜唾液 100ml 0.2mol/L磷酸氢二钠溶液 600ml 0.1mol/L柠檬酸溶液 400ml KI碘溶液 50ml pH试纸： pH=5、 pH=5.8、 p
4、H=6.8、 pH=8四种,四、操作方法： 取四个标有号码的50ml锥形瓶。用吸管按下表添加0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1柠檬酸溶液以制备pH5.08.0的四种缓冲液。 从四个锥形瓶中各取缓冲液3ml，分别注入4支带有号码的试管中，随后于每个试管中添加0.5淀粉溶液2ml和稀释200倍的唾液2ml。向各试管中加入稀释唾液的时间间隔各为1min。将各试管内容物混匀，并依次置于37 恒温水浴中保温。 第四管加入唾液2min后，每隔1min由第3管取出一滴混和液，置于白瓷板上，加1小滴KI碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混和液变为棕黄色时，向所有试管依次添加12滴KI碘溶液。添加KI碘溶液的时
5、间间隔从第一管起，亦均为1min。 观察各试管内容物呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。,唾液淀粉酶的活化和抑制,一、原理 酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜离子为其抑制剂。 二、器材： 恒温水浴 试管及试管架 三、试剂和材料： 0.1的淀粉溶液 150ml 稀释200倍的新鲜唾液 150ml 1NaCl溶液 50ml 1硫酸铜溶液 50ml 1硫酸钠溶液 50ml KI碘溶液 100ml,四、操作方法：,注：保温时间可根据各人唾液淀粉酶活力调整,解释说明，说明本实验第3管的意义,酶的专一性,一、原理 酶具有高度的专一性。本实验以唾液淀粉酶和蔗糖酶的作用为例
6、，来说明酶的专一性。 淀粉和蔗糖无还原性，唾液淀粉酶水解淀粉生成由还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖的水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。用Benedict试剂检查糖的还原性。,二、器材： 恒温水浴 沸水浴 试管及试管架 三、试剂和材料： 2蔗糖溶液 150ml 溶于0.3NaCl的1淀粉溶液（需新鲜配制） 150ml 稀释200倍的新鲜唾液 100ml 蔗糖酶溶液 100ml 将啤酒厂的鲜酵母用水洗涤23次（离心），然后放在滤纸上自然干燥。取干酵母100g，置于乳钵内，添加适量蒸馏水及少量细沙，用力研磨，提取约1h，再加蒸馏水使总体积约为原体积的10倍。离心，将上清液保存于冰箱中备用。 Benedict氏试剂 200ml 无水硫酸铜1.74g溶于100ml热水中，冷却后稀释至150ml。取柠檬酸钠173g，无水碳酸钠100g和600ml水共热，溶解后冷却并加水至850ml。再将冷却的150ml硫酸铜溶液倾入。本试剂可长久保存。,四、操作方法： 淀粉酶的专一性：,解释实验结果（提示：唾液除含淀粉酶外还含有少量麦芽糖酶）,蔗糖酶的专一性：,解释实验结果,