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1、天然药物化学实验 Experiment of Natural Medicinal Chemistry,厦门大学医学院药学系,参考书： 现代中草药成分化学 吴寿金，赵泰等 中国医药科技出版社 中草药有效成分提取与分离徐任生，陈仲良 上海科技出版社,实验五 虎杖中羟基蒽醌的提取、分离与鉴定,一、实验目的 二、实验原理 三、提取实验 四、分离实验 五、鉴定方法 六、结果与讨论,一、实验目的,掌握蒽醌类化合物的提取分离方法及原理 掌握低压柱层析分离技术及薄层层析鉴定 了解反相色谱的原理及方法及制备色谱的原理,二、 实验原理,利用化合物的酸性不同进行分离 利用吸附色谱原理进行分离 利用反相色谱进行分离,
2、化合物结构比较,1、大黄素（Emodin） 2、大黄酚（Chrysophanol） 3、大黄素6-甲醚，（Emodinmonomethl ether） 4、大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷（Anthraglycosibe A）,大黄素,大黄酚,大黄素6-甲醚,大黄素6-甲醚6-D-葡萄糖苷,羟基3个,羟基2个,羟基2个,羟基1个,实验设计,游离蒽醌分离 （1）、强酸性成分的分离：总蒽醌的乙醚液加5%碳酸氢钠水溶液萃取得强酸性成分：大黄素和大黄酸。 （2）、中等酸性成分的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液萃取得大黄酚和大黄素6-甲醚混合物。 （3）、中性成分甾醇类化合物分离：氢氧化钠萃取
3、过的乙醚液，得中性成分 （4）、强酸性成分的反相分离：取（1）分离得到的强酸性部分15mg，溶于甲醇中，用中压色谱或制备色谱分离制备，色谱条件：ODS柱或ODS填料，流动相：甲醇：水为75：25，与标准品进行对比实验。,三、提取实验,乙醇总提取物的制备 虎杖粗粉200g，1000ml圆底烧瓶回流 500ml乙醇 300ml乙醇 250ml乙醇 回流30分钟，合并减压回收,四、分离实验,1、亲脂性成分与亲水性成分的分离 2、游离蒽醌分离 （1）强酸性成分的分离 （2）中等酸性成分的分离 （3）中性成分甾醇类化合物分离 （4）强酸性成分的反相分离,基本操作,低压柱层析分离技术 柱层析分离的一种 应
4、用广泛,第一步 装柱,硅胶浸泡于石油醚中 搅拌均匀 一次性倒入柱中,装柱,预先加入溶剂,装柱,一次性倒入,装柱,敲打,均匀紧密,第二步 拌样,样品10mg 溶于溶剂中，全溶 加拌样硅胶100150目1:1-1.5 搅拌均匀至干 必要时旋蒸至干,拌样,溶解 搅拌 至干,第三步 上样,均匀加到柱中,第四步 洗脱与接收,用不同比例的石油醚和乙酸乙酯进行梯度洗脱 每个极性洗脱35个保留体积 每个保留体积接收1020份馏分 整个过程加低压,第五步 浓缩,浓缩方法 溶剂浓缩 自然挥干 减压浓缩 冻干,第六步 薄层鉴定,吸附剂：硅胶CMC 展开剂：C6H6EtoAc(3:2或97：9) 显色剂：（1）氨蒸气
5、熏。（2）5%KOH喷雾,虎杖亲脂性成分与亲水性成分的分离,膏状物加水10ml，乙醚100ml充分振摇后放置 将乙醚液倾于500ml三角瓶中 再于烧瓶中加50ml乙醚振摇，放置，倾出乙醚液 同法操作六次 合并乙醚液即为亲脂性成分总游离蒽醌,游离蒽醌分离,强酸性成分的分离 总游离蒽醌的乙醚液置100ml分液漏斗中 加5%碳酸氢钠水溶液40ml萃取，分出碱水溶液 同法提取二次 碱水提取液，加6N盐酸调至pH2 放置即可析出沉淀，抽滤， 用水洗涤沉淀至中性，干燥 主要成分：大黄素和大黄酸,游离蒽醌分离,中等酸性成分的分离 碳酸氢钠萃取过的乙醚液用5%碳酸钠溶液萃取59次，每次40ml 合并碳酸钠提取
6、液 加盐酸调至pH3 放置，抽滤，抽干， 称重 主要成分：大黄酚和大黄素6-甲醚,大黄酚和大黄素6-甲醚的分离,正相硅胶方法 低压柱层析 石油醚-乙酸乙酯洗脱 薄层鉴定,五、鉴定方法,1、化学检识 2、薄层鉴定 3、波谱学鉴定 NMR、IR、MASS等,鉴定方法,1、化学检识 分别取大黄素、大黄酚等少许，用乙醚溶解，做如下反应： （1）碱液试验：取试液1ml，加20%NaOH数滴，观察颜色。 （2）醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现袋。 2、薄层鉴定 吸附剂：硅胶CMC 展开剂：C6H6EtoAc(3:2或97：9)。 显色剂：（1）氨蒸气熏。（2）5%KOH喷雾,六、结果与讨论,从虎杖中提取、分离、纯化蒽醌类化合物的原理是什么？ 反相色谱与正相色谱的区别是什么？ 反相中压色谱适合于什么样化合物的分离？ 低压色谱柱层析要点有哪些？,谢谢！,