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1、自身抗体风湿病中的应用,狼疮细胞（1948，Hargrave),一、概述,自身抗体的定义： 以自身组织成分为靶抗原而出现的相应抗体,风湿免疫病自身抗体,抗核抗体谱 抗磷脂抗体 类风湿关节炎抗体 肌炎抗体 血管炎抗体 自身免疫性肝病抗体,自身抗体在自身免疫病中的意义,1、是自身免疫病的标记 2、有助于弥漫性结缔组织病（CTD）的诊 断和鉴别诊断 3、判断疾病的活动性 4、预测疾病的预后,二、自身抗体的检测方法,1、间接免疫荧光法（IFT） 2、ELISA 3、免疫印迹法 4、放射免疫法 5、免疫双扩散,抗核抗体（核仁型, Mi-2、PM-SCL、RNA Polymerase I）,抗核抗体（核膜
2、型, dsDNA）,抗核抗体（均质型, Histone-DNA）,三、常见的自身免疫性疾病的抗体,ANA谱及其临床意义,定义：是一种对细胞内脱氧核糖核酸(DNA),核糖核酸(RNA),蛋白或这些物质的分子复合物的自身抗体，因此ANA应称为抗核抗体谱。,间接免疫荧光法（IFT）: HEp-2细胞 灵长类肝 脏冰冻组织切片 1、完整的抗原谱 (细胞核、细胞浆) 2、ANA检测的金标准，具有最高的敏感性和特 异性 3、质量控制容易 4、除ANA外，还可获得一些对临床医生有用的 其他信息 (如ANCA),ANA 的检测方法,ANA 的检测方法,ELISA:用高度纯化的抗原来筛查ANAs 1、抗原谱比I
3、IF窄 2、对所用的靶抗原具有很高的敏感性和特异性 3、操作简便、快速,ANA分类抗DNA抗体,抗DNA抗体： ssDNA / dsDNA 抗原：单链DNA，变性的DNA (嘌呤和嘧啶碱基) 双链DNA，天然DNA (脱氧核糖核酸骨架) 相关疾病： ssDNA dsDNA SLE 80.8% 30% Sjgrens综合征 40.0% 硬皮病 44.0% 类风湿性关节炎 12.3% 健康献血员 6.8%,ANA分类抗非组蛋白抗体,抗ENA抗体：此组抗体不含组蛋白，可以溶 于盐水而被提取 检测方法：免疫印迹法,抗ENA抗体,抗Sm抗体 抗原: 与U1-、U2-、U4-、U5-或U6-nRNA 相关
4、的6种不同的蛋白分子 (核心蛋白B、B、D、E、F、G) 相关疾病: SLE: 5% - 30%,抗ENA抗体,抗核糖体蛋白抗体 靶抗原: 由3个蛋白质分子组成的核糖体60S亚单位： P0、P1、P2 (38、16、15 kD) 在碳末端具有 相同的免疫反应性表位 相关疾病: SLE: 5% - 15%,抗ENA抗体,抗SS-A抗体 靶抗原: 与Y1、Y3、Y4或Y5型RNA相关 的 2种蛋白分子(52 kDa和60 kDa) 相关疾病: 干燥综合征: 40% - 95% SLE: 34.7%,抗ENA抗体,抗SS-B抗体 靶抗原: 与小分子RNA(U6-RNA、tRNA 前体)结合的磷蛋白(
5、48 kDa) 相关疾病: 干燥综合征：40% - 95% SLE: 10% - 20%,抗ENA抗体,抗U1-nRNP抗体 靶抗原: 三种与U1-nRNA相关的蛋白 (70KD、A和C蛋白) 相关疾病: MCTD: 95% - 100% SLE: 15% - 40%,抗ENA抗体,抗Scl-70抗体 靶抗原: DNA 拓扑异构酶I(100 kDa) 相关疾病:硬皮病: 79.7% (25% - 75%),抗ENA抗体,抗J0-1抗体 靶抗原: 组氨酰-tRNA合成酶(50 kDa)， 细胞浆磷蛋白 相关疾病: 多肌炎/皮肌炎: 25% - 35% 伴有肺间质纤维化的多肌炎: 70%,ANA分
6、类抗非组蛋白抗体,2、抗着丝点抗体 靶抗原: 着丝点中的4种蛋白分子：A- (17 kDa)、 B- (80 kDa)、C- (140 B- (80 kDa)、C- (140 kDa)、 D-蛋白 (50 kDa) 主要的靶抗原是着丝点蛋白B 相关疾病: 硬皮病: 18% 局限型 (CREST综合征): 80% - 95%,ANA分类抗组蛋白抗体,抗原: 组蛋白H1, H2A, H2B, H3, H4 (主要的靶抗原为H1和H2B) 相关疾病: 药物诱导性 LE: 100% （标志性抗体） SLE: 40% - 80% 在其他风湿病中很少见,ANA分类抗核仁抗体,靶抗原: 核仁内的RNA多聚酶
7、、原纤维 和To/Th抗原 相关疾病： SSc 4%,SLE患者特异性自身抗体,靶抗原 阳性率 (%) ssDNA 70-95 dsDNA 30-90 组蛋白 40-80 U1-nRNP 15-40 Sm 5-30 SS-A 20-60 SS-B 10-20 核糖体P蛋白 5-15 增殖性细胞核抗原I (PCNA) 3 心磷脂，2-糖蛋白1 20-40 Ku 5-10 抗核小体抗体 90,多肌炎和皮肌炎抗体谱,靶抗原 阳性率(%) ssDNA 40-50 Jo-1 25-35 PM-Scl (重叠综合征) 8 Mi-2 5 Ku (与硬皮病的重叠综合征) 1-7 PL-7、PL-12、OJ、E
8、J、KJ 2-3,原发性干燥综合征抗体谱,靶抗原 阳性率(%) SS-A 40-95 SS-B 40-95 ssDNA 40-95,进行性系统性硬化症抗体谱,靶抗原 阳性率 (%) 着丝点 80-95 Scl-70 25-75 ssDNA 30-60 原纤维蛋白 5-10 RNA 多聚酶 4 PM-Scl (重叠综合征) 3 NOR-90 (核仁形成区) 少见 Ku (与多肌炎的重叠综合征) 1-7,可出现ANA的感染、药物,疟疾 血吸虫 结核 麻风 沙门氏菌 克雷伯菌 EB病毒 HIV,肯定的药物 肼苯哒嗪 普鲁卡因酰胺 异烟肼 可能的药物(近80种） 米诺环素 SASP Etanercep
9、t, Infliximab,可出现ANA的肝病 慢性活动性肝炎 原发性胆汁性肝硬化 自身免疫肝炎 自身免疫胆管炎 可出现ANA的肺病 特发性肺纤维化 石棉导致的纤维化 原发性肺动脉高压 可出现ANA的肿瘤 白血病 黑色素瘤 实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、肾癌） 淋巴瘤,可出现ANA的血液病 特发性血小板减少性紫癜 自身免疫性溶血性贫血 可出现ANA的内分泌病 1型糖尿病 Grave病 Hashimoto甲状腺炎,RA自身抗体谱及临床意义,RF 60RA中出现，量与RA活动性及 严重性呈正相关。亦在其它CTD出现 抗CCP 在50RA中出现（聚角蛋白微丝 蛋白）特异性较高 AKA（抗角蛋白抗体）
10、 在40RA阳性 APF（抗核周因子） 在52RA阳性 抗RA33 RA阳性率为35 抗Sa 在部分RA阳性,类风湿因子（RF),抗原：变性的IgG Fc段 意义 RA阳性率70%，阳性预测值24%。 滴度与疾病活动平行 其他风湿病可阳性 感染、非感染疾病、正常人可阳性,非风湿病中的RF,抗核周因子-(APF),靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中 间接免疫荧光法检测 对RA诊断的特异性高达90%以上 APF阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤其对RF阴性的患者）,抗角蛋白抗体-（AKA）,取6周龄雄性Wistar大鼠的中1/3食道切片为底物 间接免疫荧光法 以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光
11、为阳性 对RA诊断的敏感性44.13%、特异性89% 与RA的病情严重程度相关,提示预后不良,抗 Sa 抗 体,新鲜胎盘提取 免疫印迹法 分子量为50和/或55KD部位出现条带者为阳性 敏感性 36.7%、 特异性 91.6% HLA-DR4相关是慢性、严重RA的早期标记 RA的滑液中也有高浓度的抗Sa抗检出，提示在滑膜可能发生原位免疫反应,抗RA33/36抗体,从Hela细胞或Ehrilich瘤细胞核中提取 免疫印迹法 分子量33或36KD区带出现阳性者为阳性 敏感性 35.8%、特异性 99.6%,抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体,1998年 证实抗filaggrin相关抗体识别的主要抗原决定
12、簇成分是瓜氨酸 2000年 合成环瓜氨酸肽（CCP），并将抗CCP抗体用于RA检测 ELISA法检测 对RA诊断高度敏感和特异 阳性者骨破坏较阴性者严重 对RA的早期诊断和预后评估都很有意义,抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI4)抗体,RA抗PADI4抗体阳性率为47%, 抗PADI4抗体对RA诊断的敏 感性为43%,特异性为92%。 RF阴性患者PADI4抗体阳性 50%;AKA阴性的患者PADI4抗体阳性43%;抗CCP抗体阴性的患者抗PADI4抗体阳性60%。,抗突变型瓜氨酸化波形蛋白(MCV)抗体,136例RA患者抗MCV抗体敏感性和特异性分别为95.6%和80.8%。 抗MCV抗体与抗
13、CCP抗体、AKA和RF的重叠阳性率分别为91.9%、52.8%和76.5%。,血管炎相关抗体,cANCA 靶抗原：PR-3 (蛋白酶3 pANCA 靶抗原：MPO(髓过氧化酶) 弹性蛋白酶 乳铁蛋白,Wegener肉芽肿 其量指示病情活动 其它血管炎及炎性 肠病,抗丝氨酸蛋白酶（PR3)抗体,抗原：丝氨酸蛋白酶（PR3） 意义 主要出现在Wegner肉芽肿和显微镜下多动脉炎 在Wegner肉芽肿、显微镜下多动脉炎cANCA持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关(2/3)。,针对蛋白酶3的cANCA的意义,抗髓过氧化物酶（MPO）抗体,抗原：髓过氧化物酶（MPO） 意义 可出现于多种血管炎性疾病
14、。 也可见于SLE、药物等,针对MPO的pANCA的意义,cANCA(胞浆型, 丝氨酸蛋白酶),pANCA (核周型） 1、髓过氧化物酶 2、弹力酶 3、组织蛋白酶G 4、乳铁蛋白 5、溶酶体 6、细菌增透蛋白 7、Azurocidin 8、,原发性胆汁性肝硬化抗体谱,靶抗原 阳性率(%) AMA M2 85-95 AMA M4 40-60 AMA M9 35 Sp-100 (核点) 30 肌动蛋白 10-20,AMA M2,靶抗原:由3种不同的乙酰基转移酶 组成的多酶复合物： -丙酮酸脱氢酶(74 kDa) -2-酮酸脱氢酶 (50 kDa) -2-酮戊二酸脱氢酶(50kDa) 与丙酮酸脱氢
15、酶复合物相关 的蛋白X(52 kDa) 相关疾病: PBC: 85% - 95%,自身免疫性肝炎抗体谱,靶抗原 阳性率(%) 肝特异性蛋白(LSP) 50-100 肝细胞膜抗原 (LMA) 35-100 唾液酸糖蛋白受体 80-90 肌动蛋白 40-90 ANA 30-40 核膜 ? SLA/LP 15-30 肝肾微粒体 (LKM-1) 7 LC-1 ?,抗磷脂抗体(APA),APA定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合 物的自身或同种抗体。 APA的检测方法：ELISA法ACL LAC的检测方法： 白陶土凝血时间 激活的部分凝血活酶时间 复钙凝血时间 鲁塞尔蝰蛇毒凝血时间等。 所测得时间
16、延长,而不能为正常血浆所纠正时,则提示有LAC存在。,LAC和ACL可出现于多种自身免疫病：,溶血性贫血 ITP（近30%） 幼年关节炎 RA（7-50%） 银屑病关节炎(28%) 硬皮病（25%） 白塞病（20%）,干燥综合征(25-42%) MCTD（22%） PM/DM 风湿性多肌痛(20%) 慢性盘状狼疮 雷诺氏现象,APL也可出现在感染和使用某些药物病人中,甲肝 流行性腮腺炎 败血症 HIV 梅毒 HTLV-1 疟疾 卡氏肺囊虫 感染性单核细胞增多症 风疹,氯苯嗪 苯妥英 肼苯哒嗪 普鲁卡因酰胺 奎尼丁 奎宁 丙戊酸盐 阿莫西林 普洛奈尔 可卡因 磺胺嘧啶 乙胺嘧啶 链霉素,抗b2糖蛋白-1(b2GP-1)抗体,抗原： b2糖蛋白-1(与磷脂结合的凝血抑制因子 ) 意义 常与其他抗磷脂抗体同时出现，但有11%的APS病人仅有抗b2GP-1 。 抗b2GP-1较单独抗心磷脂抗体与APS相关性更好 。 感染、药物病人APL无抗b2GP-1活性。,哪些患者需要查自身抗体,不明原因发热 不明原因蛋白尿、血尿、浮肿 不明原因多关节炎 雷诺现象 面部对称性红斑,反复口腔溃疡 不明原因带肌疼痛 长期口干、或眼干 不明原因肺部间质性炎症 不明原因多系统损害等,谢 谢,