药物质检基础.ppt

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1、一、质量检验概况,（一）质检的基础知识 质量检验是指对产品或服务的一个或多个特性迸行观察测量、试验，并将结果和规定的质量要求进行比较，以确定每项质量特性合格情况的一种技术检查活动。,质量检验的基本要素： 要有数量足够、操作技术高的检验人员 要有可靠而完善的检测条件和手段； 要有明确而清楚的检验标准和检测方法。 质量检验的程序： 掌握标准、抽样、检验、判定、处理、复检 质量检验工作要求： 公证性、准确性、权威性,二、药品质量管理规范,药品非临床研究质量管理规定（Good Laboratory Practice ，GLP ） 药品生产质量管理规范（Good Manufacture Practice

2、，GMP ） 药品经营质量管理规范（Good Supply Practice ，GSP ） 药品临床试验管理规范（Good Clinical Practice ，GCP ） 中药材生产质量管理规范(Good Aplant Practice GAP),药品生产质量管理规范适用于药品生产的全过程、原料药生产中影响成品质量的关键工序，是药品生产和质量管理的基本准则。,三、药品质量标准,药品质量标准是国家为保证药品质量所制订的具有法律约束力的技术法规，是药品生产、供应、使用、检验和药政管理部门共同遵循的法定依据。 药品的法定标准有国家药品监督管理部门颁布的药品标准和中国药典,药品的非法定标准系指对药品

3、质量不具国家法律约束力的质量标准药品生产企业在质量控制中所制定的产品企业内控标准是非法定标准。 产品企业内控标准是药品生产企业为保证药品在有效期内的质量而制定的高于法定标准的企业内部标准，是企业组织生产、判别产品能否出厂的合格标淮。它集中反映了该企业产品质量的水平，是企业参与市场竟争的实力表现。,原料药质量标准的内容： 名称（中文名、汉语拼音名。英文名）、有机药物的结构式、分子式与分子量、来源或有机药物的化学名称、含量或效价规定、性状、鉴别、检查、含量或效价测定、类别、贮藏、制剂等。 制剂质量标准的内容： 名称（中文名、汉语拼音名。英文名）、含量或效价规定、处方、制法、性状、鉴别、 检查、含量

4、或效价测定类别、规格、贮藏,乙 酰 唑 胺 Yixian Zuoan Acetazolamide C4H6N4O3S2 222.25,名称,分子式,分子量,结构式,本品为N-5-（氨磺酰基）-1，3，4-噻二唑-2-基乙酰胺。按干燥品计算，含C4H6N4O3S2 应为98.0%102.0%。 【性状】本品为白色针状结晶或结晶 性粉末；无臭，味微苦。 本品在沸水中略溶，在水和乙醇中极微溶解，在氯仿和乙醚中几乎不溶；在氨溶液中易溶。 熔点 本品的熔点（附录VI C）为256 261，熔融时同时分解。,【鉴别】（1） （2） （3） 【检查】 【含量测定】 【类别】碳酰酐酶抑制剂 【贮藏】遮光，密封

5、保存。 【制剂】乙酰唑胺片,药典概况,一.中国药典的内容与进展 二.主要的国外药典简介,中国药典的内容与进展（2005）,中国药典是国家监督管理药品质量的法定技术标准。中国药典的内容分为凡例、正文、附录和索引四部 。 一部：中药材及饮片、植物油脂和提取物、成方和单方制剂 二部：化学药品、抗生素、生化药品、放射性药品和药用敷料。 三部：生物制品，首次将中国生物制品规程并入药典,（一）凡 例 “凡例”是解释和使用中国药典正确进行质量检定的基本原则，并把与正文品种、附录及质量检定有关的共性问题加以规定，避免在全书中重复说明。 1.名称与编排 2.检验方法与限度 3.标准品、对照品 4.精确度,1.精

6、确度要求,精密称定：准确至所取重量的千分之一 称定：准确至所取重量的百分之一 约：称取量不超过规定量的10% 精密量取：该体积应该符合移液管的精度要求 量取：可用量筒或量取体积的有效数位选用量具 称重或量取的量其精确度可根据有效数值的有效数位来定 如：称取0.1g，指称取重量可为0.060.14g 称取2.0g，指称取重量可为1.952.05g 称取2.00g，指称取重量可为1.9952.005g,2.一些常规情况 -水浴温度，除另有规定外均指98100，热水7080 ，冷水210 -溶液后标示的（1 10）表示固体溶质1.0g或液体溶质1.0ml加溶剂使成10ml的溶液，未指明何溶剂时均指水

7、溶液。 -乙醇未指明浓度均指95%乙醇 -恒重：0.3mg，干燥：继续小时，轵灼：继续30分钟 -实验用水除另有规定外，均指纯化水，酸碱度检查所用的水，均指新沸过并放冷至室温的水。 -“并将滴定结果用空白试验校正“指供试品所消耗滴定液的量与空白试验所消耗的滴定液的量之差。,（二）正文,名称（英文和汉语拼音） 结构式 性状 鉴别、检查、含量测定 类别 贮藏 制剂,（三）附录,1.组成：制剂通则、检测方法和指导原则、滴定液的配制与标定等 2.内容举例：,（四）索引,一部：中文、汉语拼音、拉丁名、拉丁 学名 二部：中文索引： 英文索引： 三部：中文索引： 英文索引：,主要国外药典简介,（一）美国药典

8、 USP 2000.1.1生效 （二）英国药典 BP （三）日本药局方 JP（14）分为两部,四、药品检验工作的机构 和基本程序,机构：国家药品监督管理局领导下的国家级药品检验所是中国药品生物制品检验所，各省、市、自治区药品检验所承担各辖区的药品检验工作。 药检工作目的：保正用药安全、有效。 药品检验工作的基本程序一般为取样、鉴别、检查、含量测定、写出检验报告。,（一）取 样 原则是均匀、合理。按一定的抽样原则和方法进行。选取的样品有科学性、真实性、代表性。,取样数量 （）原辅料或成品 N件，每件取样 N件，按件取样 N件，按件取样 （）中药材 N件，每件取样 总件数，取样件， 件按取样， 超

9、过件，超过部分按取样， 贵重药材逐件取样,按上述规则取样，总量为一次全检量的三倍，剩余作为留样样品,（二）药物的鉴别,一、概述 药物的鉴别试验（identification test）是根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物化学方法来判断药物的真伪。 二、鉴别实验的项目 （一） 性状 药物的性状（description ）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。,1、 外观 2、 溶解度 3、物理常数 物理常数是鉴定药品质量的重要指标。其测定结果不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光

10、率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。,（二） 一般鉴别试验 一般鉴别试验（general identification test）是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。 对无机药物是根据其组成的阴离子和阳离子的特殊反应；对有机药物则大都采用典型的官能团反应。,1、有机氟化物 2、有机酸盐 3、芳香第一胺类 4、托烷生物碱类 5、无机金属盐 6、无机酸根,（三）专属鉴别试验 药物的专属鉴别试验（specific identification test ）是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有

11、的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。,三、鉴别方法 （一）化学鉴别方法 1、呈色反应鉴别法 2、沉淀生成反应鉴别法 3、荧光反应鉴别法 4、气体生成反应鉴别法 （二）熔点测定法,（三） 光谱鉴别法 1、紫外光谱鉴别法 2、红外光谱鉴别法 （四）色谱鉴别法 1、薄层色谱鉴别法（Rf值） 2、高效液相色谱和气相色谱鉴别法 3、纸色谱鉴别法,四、 鉴别试验条件 鉴别试验的目的是判断药物的真伪。 （一）溶液的浓度 （二）溶液的温度 （三） 溶液的酸碱度 （四）试验的时间 （五）干扰成分的存在,五、鉴别试验的灵敏度 （一）反应灵敏度和空白试验 在一定的条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品

12、，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度。它以两个相互有关的量，即最低检出量（又称检出限量）和最低检出浓度（又称界限浓度）来表示。 所谓空白试验，就是在供试品鉴别试验完全相同的条件下，除不加供试品外，其他试剂均同样加入而进行的试验。 （二）提高反应灵敏度的方法 1、加入与水互不相溶的有机溶剂提取浓集 2、改进观测方法,（三）检查,检查项下包括有效性、均一性、纯度要求与安全性4个方面，系指按规定工艺迸行生产和正常贮藏过程中可能含有或产生并需要控制的杂质。 （一）一般杂质检查 氯化物的检查、硫酸盐检查、铁盐检查、重金属检查、砷盐检查、溶液颜色检查、 易炭化物检查、溶液澄清度检查、炽灼残渣

13、检查、干燥失重测定、有机溶剂残留量、水分测定。 （二）特殊杂质检查 （三）固体制剂含量均匀度，溶出度及释放度测定,杂质的限量的检查 在不影响药物的疗效和不发生毒性的前提下，允许药物中存在有一定量的杂质。这一允许量被称为杂质的限量。药物中杂质的检查多数采用限量检查（limit test ），该检查不要求测定杂质的含量，而只检查其是否超过限量。,杂质的限量通常用百分之几或百万分之几来表示。,（四）含量测定,含量测定按规定的试验方怯，用于测定原料及制剂中有效成分的含量，一般采用化学、仪器或生物测定方法。它是药品质量的主要指标之一。,含量表示方法及限度,原料药一般用百分含量来表示，制剂一般用占标示量的

14、百分含量表示，酶类药物用酶活力或效价来表示。 含量限度制定 ： 根据不同剂型（原料药 片剂 注射剂） 根据实际生产水平 根据主药含量的多少,定量方法及计算,一、 容量分析法 （一） 容量分析法的特点 （二） 容量分析法的计算问题,F-滴定液浓度校正因子（滴定液实际物质的量浓度与规定物质的量浓度之比） T-滴定度（1ml某浓度的滴定液所相当的被测物的量） V-滴定液所消耗的体积（VB-空白实验消耗的体积） W-被测物片粉取样量,原料药：,片剂,占标示量含量%=,（VAVB）FT 平均片重,W 标示量（g/片）,100%,例题 1.精取标示量为100mg的异烟肼片20片，称得质量为2.422g，研

15、细后，精密称取片粉0.2560g，置100ml量瓶中，加水适量，振摇使异烟肼溶解并稀释到刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液25ml，加水50ml，盐酸20ml与甲基橙指示剂1滴，用溴酸钾滴定液（0.01667mol/L）滴定，至粉红色消失，消耗16.10ml。每1ml的溴酸钾滴定液（0.01000mol/L）相当于2.057mg的异烟肼。计算异烟肼的标示量百分含量。,二、紫外分光光度法 紫外分光光度法适用于具有共轭结构的药物含量测定，通常用于被测组份含量在1%以下样品的测定。常用百分吸收系数法测定。,吸光系数法 在没有标准品可供比较测定的条件下，按文献规定条件测定被测物的吸光度，从样品

16、的配制浓度、测定的吸光度及文献查出的吸光系数即可计算样品的含量 原料药： 片剂：,（五）检验报告,一、检验原始记录 要求：依据准确、数据无误、结论明确、文字简洁、书写清晰、格式规范 内容：检验项目、检验日期、操作方法、实验条件（如温度，仪器型号和校正情况等）、观察到的现象、实验数据、计算及结果判断等。 注意： 1、记录有误，可单线划去并保持原有的字迹可辨，不得涂改。并在修改处签名。,2、应写明标准中规定的的限度或范围，根据检验结果做出单项结论（符合规定或不符合规定），并签名。 3、项目名称应按药品标准书写，不得用习惯用语。 含量测定中检验记录的具体内容： 容量分析法：记录供试品的称量、简要操作

17、过程、指示剂名称、滴定液名称及浓度，消耗滴定液的体积，空白实验的数据，计算式与结果。 紫外-可见分光光度法 ：记录仪器型号、溶剂、吸收池的配对、供试品与对照品的称量及制备情况、核对最大吸收波长是否正确、狭缝宽度、测定波长及其吸收度值、计算式及结果。,例：UV测定含量 检验原始记录 样品批号： 检品名称： 规格： 检验目的： 检验依据： 仪器型号： 溶剂： 波长范围及选用波长： 供试品溶液配制： 检验数据或图谱： 计算及结论 检验者： 核对者： 室温： 湿度： 年 月 日,2、药品检验报告 药品检验报告书 报告书编号：,检验项目 标准规定 检验结果,五、药物检验用的特定物质,一、药品检验用的标准

18、物质 药品检验所用的物质有标准品、对照品、检定菌、试药、滴定液、标准溶液及实验动物。其中标准品与对照品是药品检验所用的标准物质。 标准品、对照品系指用于鉴别、检查、含量测定的标准物质，均由国务院药品监督管理部门指定的单位制备、标定和供应。 标准品系指用于生物检定、抗生素或生化药品中含量或效价测定的标准物质 对照品（不包括色谱用的内标物质除另有规定外在检测时按干燥品或无水物计算后使用。,（一）检定菌 检定菌指用于药品微生物检定用的原始菌种。 （二）试药 试药指不同等级的符合国家标准或国家有关部门规定标准的化学试剂。除生化试剂与指示剂外，我国的化学试剂按纯度和使用要求分为高纯（有的叫超纯、特纯）、

19、光谱纯、分光纯、基准、优质纯、分析纯和化学纯等7种。国家和主管部门颁布质量指标的主要是后3种即优级纯符号（CR）、分析纯（符号AR）与化学纯（符号CP）。,（三）滴定液 滴定液系指已知准确浓度的试剂溶液，在容量分析中用作滴定被测物质。其浓度以摩尔升（mol/L）表示。 2滴定与标定 滴定是将滴定液从滴定管中加到被测物质溶液中的过程。 标定又称标化，是用基准物质准确地确定滴定液浓度的操作过程。 3、滴定液的配制与标定 滴定液的配制有直接配制和间接配制两种方法。,六、检验误差,1、系统误差 由某种固定因素引起的误差，是在测量过程中重复出现、正负及大小可测，并具有单向性的误差。可通过其他方法验证而加

20、以校正。 系统误差可分为： 方法误差 由所选择的方法本身决定，无法避免 操作误差 操作者本人所引起，可消除或减少 仪器及试剂误差 由仪器性能或试剂性质决定 个人误差 由分析人员的主观原因造成,2、随机误差由测量过程中一系列有关因素的微小的随机波动而引起的误差，具有统计规律性，可用统计的方法进行处理。多次测量时正负误差可能相互抵消。无法严格控制，仅可尽量减少。 3. 过失误差指明显与事实不符的误差，即异常值(divergent data)，亦称“过失误差”。如看错砝码、读错数据等。,准确度和误差 1.准确度 系指测得结果与真实值接近的程度。 2.误差 系指测得结果与真实值之差。 精密度和偏差 1

21、.精密度 系指在同一实验中，每次测得的结果与它们的平均值接近的程度。 2.偏差 系指测得的结果与平均值之差。 误差和偏差 由于“真实值”无法准确知道，因此无法计算误差。在实际工作中，通常是计算偏差（或用平均值代替真实值计算误差，其结果仍然是偏差）。,误差的表示 企业常用三种： 极差极差是一组测定数据中最大值与最小值之差。 标准差标准差是反映一组测定数据的离散程度。 相对标准差由于测量数值有大小不同，只用标准差不能说明测定的精密情况。（RSD）,消除系统误差的方法,1). 对照试验以标准样品与试样同时进行的测定，以校正测定过程中的系统误差。 方法有标准样品比对法或加入回收法(用标准样品、管理样、

22、人工合成样等)，选择标准方法(主要是国家标准等)相互校验(内检、外检等)。 2). 空白试验不加试样但完全照测定方法进行操作的试验，消除由干扰杂质或溶剂对器皿腐蚀等所产生的系统误差。 所得结果为空白值，需扣除。若空白值过大，则需提纯试剂或换容器。,3).仪器校准消除因仪器不准引起的系统误差。 主要校准砝码、容量瓶、移液管，以及容量瓶与移液管的配套校准。 4).校正方法主要校正在分析过程中产生的系统误差。,检验结果数据要求,1对药品检验数据的基本要求 （1）真实性（2）准确性（3）精密性 （4）数据的正确表达。 2可疑数据的取舍 （1）技术性取舍（2）统计检验取舍：确定逸出值 3 有效数字和数值

23、的修约及其运算,有效数字及其计算规则,实验数据不仅表示数值大小，也反映测量精度。 如体积测量的25.00 mL和25.0 mL，虽数值相同，但精密度相差10倍。前者是用移液管准确移取或滴定管中放出，而后者则是由量筒量取。 故必须按实际测量精度记录实验数据，并且按照有效数字运算规则进行测量结果的计算，报出合理的测量结果。,有效数字,有效数字实际能测量到的数字，只保留一位可疑值。 读取同一滴定管刻度：甲24.55mL，乙24.54 mL，丙24.53 mL。前3位数字都相同且很准确，第4位是估计数，不确定，因人而异。 要求：分析天平称取试样质量记录为0.2100g 表示：0.210确定，最后一位0

24、不确定，可有1的误差。其绝对误差0.0001g，相对误差为(0.0001/0.2100)100% = 0.05%。）,有效数字实例,试样重(克) 0.5180 (4位,天平称出) 0.52(2位,台秤) 溶液体积(毫升) 25.34(4位,滴定管) 25.3(3位，量筒) 离解常数 1.8105 (2位) pH值 11.02 (或4.35) (均为 2位) 整数部分 1000 (位数不清楚)，为准确可换成指数 整倍数、分数 如化学计量数，其有效位数为任意位 e、 等也同样,有效数字中“0”的作用,数据中的“0” 如果作为普通数字使用，它就是有效数字；作为定位用，则不是。 如滴定管读数22.00

25、 mL，两个“0”都是测量数字，为4位有效数字。改用升表示，为0.02200L，前面两个“0”仅作定位用，不是有效数字，而后面两个“0”仍是有效数字，仍为4位有效数字。 可用指数形式定位尾数为“0”的小数，以防止有效数字的混淆。如25.0 mg改写成g时，应写成2.50 104 g，不能写成25000 g。 单位可以改变，但有效数字的位数不能任意增减。,有效数字的运算规则,数字修约确定有效位数后对多余位数的舍弃过程，其规则为修约规则。 四舍六入五留双 当尾数4时舍弃；尾数6时则进入；尾数=5时，按5前面为偶数者舍弃；为奇数者进位 3.7464 3.746 3.5236 3.524 7.2155

26、0 7.216 6.53450 6.534 5后尾数不止0时一律进位 6.53451 6.535,某有效数字的首位8，则可多计算一位。 如8.58可视为4位有效数字。 运算过程中，有效数字的位数可暂时多保留一位，得到最后结果时再定位。 使用计算器作连续运算时，运算过程中不必对每一步的计算结果进行修约，但最后结果的有效数字位数必须按照以上规则正确地取舍。,运算规则,加减法有效位数以绝对误差最大的数为准，即小数点后位数最少的数字为依据。 例如: 50.1+1.45+0.5812=? 每个数据最后一位都有1的绝对误差，在上述数据中，50.1的绝对误差最大(0.1)，即小数点后第一位为不定值，为使计算

27、结果只保留一位不定值，所以各数值及计算结果都取到小数点后第一位。 50.1+1.45+0.5812=50.1+1.4+0.6=52.1,乘除法有效位数以相对误差最大的数为准，即有效位数最少的数字为依据。 2.18790.15460.06=2.190.15460.1=20.3 各数的相对误差分别为: 1/21879 100% = 0.005% 1/154 100% = 0.6% 1/6006 100% = 0.02% 上述数据中，有效位数最少的0.154，其相对误差最大，因此，计算结果也只能取三位有效数字。,有效数字在药物分析检验中的应用 1记录实验数据 根据分析方法和仪器实际上达到的准确程度，

28、保留一位可疑数字 2正确表示分析结果 质量：小数点后第4位 体积：小数点后第2位 pH、pK、pM：小数点后第2位 百分含量：小数点后第2位 滴定浓度：4位有效数字 精密度、准确度：一般保留一位有效数字，最多不超过两位。,七、实 验 安 全 知 识,实验室安全 化学实验灼烧损伤急救知识： -酸伤用10%的碳酸氢钠溶液洗涤 -碱伤用3%的醋酸或1%的盐酸溶液洗涤 -高温烫伤起泡，用2%的苦味酸（加1。5%的酒精）水溶液洗涤，用消毒纱布包好。 -苯烫伤用水冲后再用4ml的酒精和1ml5%的氯化铁混合液洗涤。,-磷烧伤部可用水冲，要用1%硫酸铜冲洗。 -氢氟酸烫伤，用大量水冲，再用5%碳酸钠溶液洗，

29、然后用2份甘油，1份氧化镁混合物涂上，用纱布包好。 -溴液烧伤，用1份浓氨水溶液、一份松节油，1份95%酒精混合液洗。,八、相关技能综合知识,一、容量瓶、移液管及滴定管的校正及使用方法。 二、洗涤剂的种类及适用范围 三、馏程、旋光度、折光率概念、物理意义、测定方法 四、最低装量及溶出度、粒度检查,五、维生素C的相关知识 六、对乙酰氨基酚相关知识,维生素C分子结构中具有二烯醇结构，具有内酯环，且有二个手性碳原子（C4、C5），因此不仅使抗坏血酸性质极为活泼，且具旋光性。,一、结构与性质 （一）结构,维生素C（抗坏血酸）,（二）性质,1、溶解性 维生素C 在水中易溶，水溶液呈酸性；在乙醇中略溶，在

30、氯仿或乙醚中不溶。 2、糖类性质 结构与糖类相似，也具有糖的性质。 3、还原性 分子中的二烯醇基具极强的还原性，易被氧化为二酮基，而成为去氢抗坏血酸，加氢又可还原为抗坏血酸。 4、酸性 C3OH由于受共轭效应的影响，酸性较强（PK1=4 .17)；C2OH的酸性极弱，故维生素C一般表现为一元酸，能与碳酸氢钠作用生成钠盐。,5、旋光性 分子中有两个手性碳原子，故有四个光学异构体，其中L（+）-抗坏血酸活性最强。本品的比旋度为+20.5+21.5。 6、水解性 维生素C和碳酸钠作用可生成单钠盐，不致发生水解，因双键使内酯环变得较稳定；但在强碱中，内酯环可水解，生成酮酸盐。 7、紫外吸收 维生素C有

31、共轭双键，在稀盐酸溶液中在243nm波长处有最大吸收；若在中性或碱性条件，则红移至265nm处。,二、鉴别试验,（一）与硝酸银反应(Ch.P),维生素C分子中有二烯醇基，具强还原性，可被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色银沉淀。,2，6-二氯靛酚为一染料，其氧化型在酸性介质中为玫瑰红色，碱性介质中为蓝色。与抗坏血酸作用后生成还原型的无色的酚亚胺。,（二）2,6-二氯靛酚反应(Ch.P),各国药典均采用如碘量法，2,6-二氯靛酚法等容量分析法，为适用于复方制剂和体液中微量维生素C的测定，又相继发展了比色法，紫外分光光度法，及高效液相色谱法。,（一）碘量法(Ch.P),1、原理,三、含量测定,

32、注意事项： （1）滴定要在酸性溶液中进行。在酸性介质中抗坏血酸受空气中氧的氧化作用减慢，但样品溶于稀酸后仍需立即进行滴定。 （2）加新沸过的冷水溶解。是为了减少水中溶解氧对测定的影响。 （3）制剂采用本法测定注意前处理，排除干扰。,对乙酰氨基酚,基本结构：,对乙酰氨基酚,（二）主要化学性质,2.水解产物易酯化 对乙酰氨基酚水解后产生醋酸。与乙醇反应生成醋酸乙酯（有香味）。 3.具有酚羟基或水解后能产生酚羟基，可与三氯化铁作用呈色。,1.具有酰氨基结构，本类药物的共同性，可水解为芳伯氨基有重氮化偶合反应,鉴别试验,（一）重氮化偶合反应,凡具芳伯氨基的药物，如苯佐卡因、盐酸普鲁卡因等，均可在酸性溶

33、液中直接与亚硝酸钠试液作用，生成重氮盐，再与碱性-萘酚偶合产生红色偶氮化合物；对乙酰氨基酚在盐酸中加热水解后，可与亚硝酸钠进行重氮化偶合反应。,（二）三氯化铁反应,对乙氨基酚结构中具有酚羟基，与三氯化铁试液作用，即显蓝紫色。,特殊杂质检查,（一）对乙酰氨基酚的杂质检查,本品是以对硝基氯苯为原料，水解制得对硝基酚，经还原为对氨基酚后，再乙酰化得对乙酰氨基酚；或以酚为原料，经亚硝化及还原反应得氨基酚，再经乙酰化得本品。由于生产过程中可能带入的杂质、中间体及副产品等。,1、乙醇溶液的澄清度与颜色 本品外观应为白色结晶或结晶性粉末，易溶于乙醇。 2、有关物质 由于本品用对硝基氯苯为原料，可能引入对氯乙

34、酰苯胺。药典对此项杂质采用薄层色谱法检查，采用硅胶GF254/氯仿-丙酮-甲苯（13：5：2）系统分离进行限度检查。,3、对氨基酚 本品在制备过程中乙酰化不完全或贮存不当发生水解，均可引入对氨基酚，使本品产生色泽并对人体有毒性，应严格控制其限量。利用对氨酚在碱性条件下可与亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化合物，而对乙酰氨基酚无此反应的特点，与对照品比较，进行限量检查（目视比色法）。,分光光度法 对乙酰氨基酚在0.4氢氧化钠溶液中，于257nm波长处有最大吸收，其紫外吸收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含量测定。该法较亚硝酸钠滴定法灵敏度高，操作简便，因此被国内外药典所收载。Ch.P（2005）采用百

35、分吸收系数（ ）法 ，测定对乙酰氨基酚原料、片剂、注射剂、栓剂及胶囊剂的含量。,含量测定,药品检验常用分析方法简介,1. 按目的分： 结构分析确定分子结构、晶体结构 成分分析分析混合物中的物质 定性分析：确定物质的元素、原子团、官能团 定量分析：确定组分的含量 2. 按对象分： 无机分析确定元素种类、含量和存在形式 有机分析确定组成元素、官能团种类、基本结构等,分析方法的分类,3. 按样品量分： 4. 按组分含量分：,5. 按 方 法 分最实用的分类 化学分析方法以化学反应为基础的方法，属常量分析，准确度高 重量分析法测物质的绝对值 容量分析法测物质的相对量，以滴定分析法为主要手段 仪器分析方

36、法以被测物质的物理及物理化学性质为基础的分析方法，多属微量分析，快速灵敏，但绝对误差不大。,九、药物含量测定的相关化学测定法,重量分析法,重量分析法将待测组分以化合物或单质的形式分离后，称量质量的方式进行含量测定的方法 特点：准确度高，精密度好，操作复杂，耗时长 分类：沉淀法、挥发法、萃取法 适用范围：阳离子重量分析、阴离子重量分析,容量分析法,容量分析法利用标准液与待测组分间的定量化学反应，以标准溶液的容积进行含量测定的方法 特点：准确度高，操作简便，分析速度快,滴定分析法将一种已知准确浓度的试剂溶液(标准溶液)滴加到被测物质的溶液中(或反向滴加)，根据所消耗的试剂量按化学计量关系来确定被测

37、物质的量。 注意：. 用标准溶液来滴定 . 有一定的准确性 (精确计量) . 有合适的指示剂 (确定滴定终点) 几个概念：滴定、化学计量点、滴定终点、指示剂、滴定误差(TE),滴 定 分 析 法,滴定分析的分类,1. 酸碱滴定法以酸碱反应为基础的滴定方法 (以所用酸碱强弱分类) 2. 配位滴定法以络合反应为基础的滴定方法(以胺羧络合剂为主) 3. 沉淀滴定法 以沉淀反应为基础的滴定方法(以所用指示剂分类),4. 氧化还原滴定法以氧化还原反应为基础的滴定方法(以所用滴定剂分类) KMnO4法自身指示剂 K2Cr2O7法二苯胺磺酸钠为指示剂 碘量法分间接碘量法和直接碘量法 溴量法 、 铈量法 等

38、5. 非水滴定法以冰醋酸为溶剂，高氯酸为标准酸溶液的滴定方法（中和滴定法）,1. 直接滴定法适用于满足四个要求的滴定反应(强酸强碱滴定及一般的络合滴定) 2. 返滴定法 适用于反应速度慢或无合适指示剂的反应(如络合滴定测铝) 3. 置换滴定法适用于不按一定反应式进行或伴有副反应的物质的测定(K2Cr2O7碘量法标定Na2S2O3) 4. 间接滴定法适用于不与滴定剂直接起反应的物质的测定。(KMnO4法测钙),滴定分析的方式,酸碱滴定法（中和法） 阿司匹林原料与其片剂在Ch.P2005中采用本法进行，但具体操作方法有所不同。,（一）直接滴定法:用于阿司匹林原料测定,原理：,+ NaOH,中性乙醇

39、,酚酞,+ H2O,利用ASA中游离羧基的酸性，以中性乙醇为溶剂，直接以 NaOH滴定液滴定。,（二）两步滴定法:用于阿司匹林片及其肠溶片的测定。,因片剂中加入了稳定剂酒石酸和枸橼酸，故不能采用直接滴定法，而须采用先中和与供试品共有的酸（稳定剂及水杨酸），再将阿司匹林在碱性条件下水解后进行测定的方法。,1、中和（第一步）：,2、水解与测定（第二步）：,(回滴),2NaOH (剩余) + H2SO4,酚酞,Na2SO4 + 2H2O,注意事项: (1)碱液在受热时极易吸收空气中CO2,用酸回滴时使测定结果偏低。故需在相同条件下作空白试验校正. (2)第一步时以溶液出现粉红色30秒不退即得，再加入

40、40mlNaOH滴定液应精密量取（可从滴定管上加入）。 （3）水浴加热应在15分钟以上并振摇，保证水解完全。 （4）计算公式：,氧化还原滴定法,异烟肼的含量测定 异烟肼含量测定方法的依据是：酰肼基具有还原性和能与一些试剂缩合。常见的方法有溴酸钾法、碘量法、溴量法、非水碱量法及比色法。其中以溴酸钾法、碘量法、溴量法最为常用。,配位滴定法,用于配位滴定的反应必须符合完全、定量、快速和有适当指示剂来指示终点等要求，最常用的是EDTA。,EDTA与无色金属离子形成的配合物也是无色的；而与有色金属离子形成配合物的颜色一般加深。,药物分子结构中具有芳伯氨基或水解后具有芳伯氨基，在酸性溶液中可与亚硝酸钠反应

41、，可用亚硝酸钠滴定法测定含量。由于本法适用范围广，常被国内外药典所采用。中国药典（2005年版）收载的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、盐酸普鲁卡因胺及其片剂与注射液等，可直接用本法测定其含量。,亚硝酸钠滴定法,1. 原理 芳伯氨基药物在酸性溶液中与亚硝酸钠定量反应，生成重氮盐，用永停法或外指示剂法指示反应终点。,2. 测定的主要条件 重氮化反应的速度受多种因素的影响，亚硝酸钠滴定液及反应生成的重氮盐也不够稳定，因此在测定中应注意以下主要条件：,ArNHCOR + H2O,Ar-NH2 + RCOOH,H+,Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl,ArN2+Cl- + NaCl +H2O,（1）加入

42、适量溴化钾加快反应速度： 在盐酸存在下，重氮化反应的历程加快。 即游离芳伯氨基多，重氮化反应速度就快。在测定中一般向供试溶液中加入适量溴化钾（中国药典规定加入2g），使重氮化反应速度加快。,（2）加过量盐酸加速反应： 加过量盐酸有利于：重氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果。,（3）室温（1030）条件下滴定： 通常温度高，重氮化反应速度较慢，故滴定不宜过快。为了避免滴定过程中亚硝酸挥发和分解，滴定时将滴定管尖端插入液面下约2/3处，一次将大部分亚硝酸钠滴定液在搅拌条件下迅速加入，使其尽快反应。然后将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，再缓缓滴定至

43、终点。,3. 指示终点的方法 主要有永停滴定法、电位法、外指示剂法和内指示剂法等。药品标准中多采用永停滴定法或外指示剂法指示终点。,非水滴定法,非水溶液滴定法是国内外药典采用较多的含测方法，特别是对弱碱类药物及其盐的含测。弱碱及其盐在水溶液中用标准酸液直接进行滴定没有明显的滴定突跃，滴定终点难于掌握。若采用非水酸性溶剂作为滴定介质，则可显著提高弱碱性药物的相对碱度，使滴定突跃增大，滴定反应顺利完成。,（一）基本原理,除少数药物以游离碱的形式供分析外，绝大多数为盐类（HCl盐与H2SO4盐）。这些盐类的滴定过程，实际上是一个置换滴定，即强酸滴定液置换出与游离碱结合的较弱的酸。反应原理可用下列通式

44、表示：,当HA酸性较强时，反应不能定量完成，必须采取措施除去或降低反应产生的HA的酸性，如测定杂环类药物氢卤酸盐时，由于置换出相当强的氢卤酸能影响滴定终点，不能直接滴定。一般处理方法是加入定量的醋酸汞的冰醋酸液，使其生成在醋酸中难以解离的卤化汞。,（二）一般方法,取经适当方法干燥的供试品适量（一般以消耗高氯酸滴定液（0.1mol/L）约8ml），加冰醋酸1030ml使溶解（必要时可温热使溶解，放冷）。若供试品为氢卤酸盐，应再加5%醋酸汞的冰醋酸溶液35ml。加规定的指示液12滴，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，终点颜色以电位法校准。并将滴定结果用空白试验校正。,适用范围 本法主要用于测

45、定Kb10-8的有机酸盐、氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硝酸盐及有机酸碱金属盐类的含量。只要选择合适的溶剂、滴定剂和终点指示方法可使pKb为813的弱碱性杂环类药物采用本法滴定。,指示终点的方法 滴定终点常用电位法和指示剂法，大多采用的指示剂为结晶紫。,双相滴定法,苯甲酸钠为芳酸碱金属盐，易溶于水，其水溶液呈碱性，可用盐酸滴定液滴定，但在滴定过程中析出的游离酸不溶于水，并使滴定终点的pH突跃不明显，不利于终点的正确判断。利用苯甲酸能溶于有机溶剂的性质，在水相中加入与水不相溶的有机溶剂（如乙醚），并置分液漏斗中进行滴定反应，滴定过程中产生的苯甲酸不断萃取入有机溶剂层中，使滴定反应完全，终点清晰，同时

46、可降低苯甲酸的离解。,十、药物含量测定的相关仪器测定法,利用被测物质的分子对紫外-可见光具有选择性吸收的特性而建立的分析方法称为紫外可见分光光度法。,紫外可见分光光度法的特点,（1）具有较高的灵敏度。 （2）有一定的准确度，该方法相对误差为2%-5%可满 足对微量组分测定的要求。 （3）操作简便、快速、选择性好、仪器设备简单。 （4）应用广泛,紫外可见分光光度法,T透光率（透射比）（Transmittance）,A = lg (I0/It) = lg(1/T) = -lgT = kbc,光的吸收定律 1.朗伯-比耳定律,当c的单位用gL-1表示时 Aabc,a- 吸光系数,k的单位: Lg-1

47、cm-1,k的单位: Lmol-1cm-1,当c的单位用molL-1表示时 摩尔吸光系数 A bc,当c的单位用g100mL-1表示时 百分吸光系数,吸收曲线：以入射光的波长为横坐标，相应的吸光度A为纵坐标作图，得到的吸光度随波长变化的曲线，又称为吸收光谱。,不同浓度的KMnO4溶液的光吸收曲线形状类似，而最大吸 收波长不变。,不同浓度的KMnO4溶液在相同波长下的吸光度随溶液浓度 的增大而增大。,/nm,700,对不同物质的溶液，其最大吸收波长不同，此特性可作为物质定性分析的依据。,I0,It,参比,样品,未考虑吸收池和溶剂对光子的作用,紫外可见吸光光度计,分光光度计的基本组成部件：,分光光

48、度计基本部件,光源,单色器,吸收池,检测器,显示器,氢灯，氘灯，150 400 nm； 钨灯，320 3200 nm.,基本要求：光源强，能量分布均匀，稳定,作用：将复合光色散成单色光,棱镜,光栅,玻璃， 360 700 nm, 石英，200 1000 nm,平面透射光栅， 反射光栅,玻璃，光学玻璃，石英,作用：将光信号转换为电信号，并放大,光电管，光电倍增管，光电二极管，光导摄像管（多道分析器）,记录仪、屏幕、数字显示,分光光度含量测定的方法,标准曲线法,Blank Standard Sample Sample,标准对照法(直接比较法) 将试样溶液和一个标准溶液在相同条件进行显色、定容，分别测出它们的吸光度，按下式计算被测溶液的浓度。 k标=k测 b标=b测 所以 要求A与c线性关系良好，被测样品溶液与标准溶液浓度接近，以减少测定误差。用一份