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1、临床PCR检测的标准化,卫生部临床检验中心 李金明,标准化(standardization)的概念,Standard:文字 Standards:物质 Standardization: 通过对测定方法和检测程序的规范化，使测定结果的量值可溯源至同一标准物质或参考方法，从而使测定结果在不同方法、不同试剂及不同的实验间具有可比性。,标准物质、测定方法和检测程序标准化之间的关系,为什么要进行标准化?,通过标准化以改善实验室测定的准确度，从而提高不同的实验室间结果的可比性。 缺乏标准化，则不同试剂、不同方法、不同实验室间的测定结果就无法一致，没有可比性，也无法对一种方法、一种试剂进行适当的评价。,标准化
2、的先决条件,检测物的同一性 标准品的同一性,标准化组织,世界卫生组织（WHO）生物学标准化专家委员会（The Expert Committee on Biological Standardisation, ECBS）：负责建立生物物质的国际标准及参比材料。 国家生物学标准和质控物研究所（National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC）： WHO通过其提供国际标准品。 一些区域和地区性组织 ：美国CDC、CAP、NIH 国际性科学协会：IFCC、国家临床实验室标准化委员会（National Committee of C
3、linical Laboratory Standardisation,NCCLS）以及美国和加拿大临床化学协会（American Societies for Clinical Chemistry and Canadian Societies for Clinical Chemistry and Canadian, AACC 和CSCC）等：组织编写一些临床检验的导则等文件,标准品和质控品（1）,可提供标准品的国际标准化组织有：WHO生物学标准化专家委员会（ECBS）、英国国家生物学标准和质控物研究所(National Institute for Biological Standards and
4、 Control,NIBSC)、美国CDC和CAP、国家卫生研究所（NIH）、IFCC等；国内有中国药品生物制品检定所、卫生部临床检验中心,标准品和质控品（2）,在美国临床PCR检验试剂方法用于临床必须有FDA批准；在德国监督机构为INSTAND；在国内试剂批准文号由SFDA负责。 仅使用标准品并不能保证PCR测定结果的可比性，但其在保证PCR测定质量中的重要性却是不可替代的。,标准品和质控品（3）,标准品和质控品的功能:可用作临床检测的校准物; 可用来评价试验的有效性;作为室内质控样本; 作为室间质评样本. 国际标准品分级:可分为第一,第二和第三等三个等级. 一级标准数量有限,可使用10-2
5、0年,是冻干品,内含载体蛋白. 一级标准可用来校准第二和第三级标准. 国际标准品(IS)中作为第一级标准, 二级标准可用来维持校准. 国内标准品分级：一级和二级。,标准品和质控品（4）,标准品的单位: 病毒核酸国际标准品均以IU/L表示。,有关标准品单位和溯源的问题,长度单位的确定和溯源举例,标准品定值的测定方法 :参考方法,决定性方法（Definitive method）: 是一个具有高精密度及没有系统偏差的参考方法。 参考方法:(Reference method）:应有低测定下限、不受非特异干扰及不与相关的化合物发生交叉反应，同时还应该容易得到。 为保持参考方法的有效性, 有必要建立一个参
6、考实验室的网络.,国际单位(International Units)的由来,国际单位（International units, IU）定义: 国际标准的应用目的是为测定提供一个通用的标准单位, 使用相同的测定生物学单位来指定标准品或工作校准品的单位.,核酸检测国际标准,项目 研制者 发布年 编号 浓度 HBV DNA NIBSC 1999 97/746 106 IU/ml HCV RNA NIBSC 1997 96/790 105 IU/ml NIBSC 2005 96/798 105 IU/ml HIV-1 RNA NIBSC 1998 97/656 105 IU/瓶 HAV RNA NIB
7、SC 2003 00/560 105 IU/ml B19 DNA NIBSC 2000 99/800 106 IU/ml,病毒核酸检测国家标准,项 目 研制者 发布年 编 号 浓 度 HBV DNA NCCL 2005 GBW(E)090031 1.03106 IU/ml NCCL 2007 GBW09151 HCV RNA NCCL 2005 GBW(E)090032 1.29105 IU/ml NCCL 2007 GBW09152,测定方法的标准化,一个测定方法的组成 （1）核酸提取方法； （2）扩增及产物分析方法； （3）如果靶核酸，还有反转录过程 。,核酸提取方法,对抑制物去除的有效性； 简便性。,扩增及产物分析方法,实时荧光PCR PCR-ELISA等。 扩增检测条件（循环条件、试剂等）的理想化。 内标的设置：假阴性质控的最有效的方法 反转录试剂的效率。,工作程序的标准化,标本采集程序的标准化 仪器设备的校准、维护和正确使用 试剂和消耗品的质检 防“污染”措施的实施 人员的培训上岗 严格的室内质量控制 参加室间质量评价 结果报告和解释的标准化 工作规范的制订,Thank you,