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1、吩噻嗪类抗精神病药 物的分析,第11章,吩噻嗪类(硫氮杂蒽类）药物能够阻断多巴胺受体，在保持意识清醒的情况下控制幻觉及妄想等症状，主要用于治疗型精神分裂症，属于抗精神病药。抗精神病药又称抗精神分裂症药或神经安定药。,抗精神病药还包括：噻吨类(硫杂蒽类，Thioxanthenes)、丁酰苯类(Butyrophenones)及其他类。,第一节 基本结构与主要性质,一、基本结构,吩噻嗪类药物的基本结构：,母核上2位和10位被不同的基团取代，得到一系列吩噻嗪类抗精神病药物。临床上常用本类药物的盐酸盐。,2位的R为电负性较大的基团，如H、Cl、CF3、SCH3；,10位的R为碱性侧链，如二甲氨基、哌嗪或
2、哌啶的衍生基团。,盐酸氟奋乃静,盐酸三氟拉嗪,奋乃静,癸氟奋乃静,二、主要理化性质,1、 弱碱性 硫氮杂蒽母核的氮原子碱性极弱； 10位取代的脂烃氨基、哌嗪及哌啶的衍生物所含的氮原子碱性较强； 可用于鉴别和含量测定。 2、易氧化性 硫氮杂蒽母核具有还原性，易被H2SO4、HNO3、H2O2、FeCl3等氧化剂氧化，产物呈现不同颜色，可用于鉴别和含量测定。 本类药物光照时易氧化变色，应避光保存。,3、 与金属离子配合呈色,硫氮杂蒽母核的二价硫可与钯离子配合，生成有色化合物，可用于鉴别和含量测定。,氧化产物亚砜和砜无此反应。,4、 紫外光吸收特性,紫外特征吸收主要由硫氮杂蒽母核三环的系统所产生，一
3、般具有三个峰值。即在 204209nm（205nm附近）、250265nm（254nm附近）和300325nm（300nm附近），最强峰多在 254nm。 2位上的取代基（R）不同会引起吸收峰发生位移。 本类药物的紫外光吸收特性可用于鉴别和含量测定。,5、 红外光吸收特性,吩噻嗪类药物红外光吸收图谱的指纹特征随取代基不同而不同，可用于鉴别。,图11-1A 盐酸氯丙嗪的红外光吸收图谱,第二节 鉴别试验,吩噻嗪类药物可依据其不同性质采用鉴别： 化学法 光谱法 色谱法 其他方法 各国药典一般选用2 4种不同原理的分析方法组成一组鉴别试验，对所收载的吩噻嗪类药物进行鉴别。,盐酸异丙嗪片 （ ChP20
4、10）,氧化显色反应,氯化物的鉴别反应,薄层色谱法(TLC)或高效液相色谱法(HPLC),提取后红外分光光度法 (IR),盐酸氯丙嗪 （ USP32-NF27）,红外分光光度法 (IR),薄层色谱法 (TLC),氯化物的鉴别反应,奋乃静 （ EP7）,熔点测定,红外分光光度法(IR),盐酸硫利达嗪 （ JP15）,氧化显色反应,红外分光光度法(IR),氯化物的鉴别反应,一、化学法,（一）与生物碱沉淀剂反应,吩噻嗪类药物10位的含氮取代基有碱性，可与生物碱沉淀剂反应。测定生成物的熔点，可鉴别本类药物及其制剂。,【示例11-1 】,盐酸氯丙嗪鉴别 （JP15 ）,取本品约0.1g，加水20ml溶解
5、后，加稀盐酸3滴与三硝基苯酚试液10ml，静置5小时，生成沉淀，滤过；沉淀用水洗涤后，以少量丙酮重结晶，于105干燥1小时，熔点为175179。,（二）氧化显色反应,硫氮杂蒽母核的氧化显色反应被国内外药典用于吩噻嗪类药物及其制剂的鉴别。反应所显颜色随药物的取代基及氧化剂不同而不同,常用的氧化剂：,硫酸、硝酸、过氧化氢和三氯化铁试液。,（三）与钯离子配合呈色反应,硫氮杂蒽母核与钯离子配合呈色的反应被ChP2010用于吩噻嗪类药物及其制剂的鉴别。该反应不受氧化产物亚砜和砜的干扰，专属性强。,（四）含卤素取代基的反应,1、焰色反应,【示例11-8 】,奋乃静 （ JP15）,卤化物的焰色反应: 取1
6、.5cm5cm的铜网(网孔0.25mm，丝径0.174mm)，将一段铜线的一端缠绕于铜网上。在无色火焰中剧烈加热铜网，直至火焰不再显示绿色或蓝色，冷却。重复此操作数次，使铜网表面完全被氧化铜覆盖。除另有规定外，置约1mg供试品于铜网上，点火燃烧。重复此操作3次后，在无色火焰中检视铜网。,本品火焰显绿色,2、显色反应,吩噻嗪类药物2位的含氟取代基，可经有机破坏使共价结合的氟元素分解成氟化物，在酸性条件下与茜素锆试液反应显色，用于本类药物及其制剂的鉴别。,【示例11-9 】,癸氟奋乃静 ChP（2010）,取本品 15 20mg，加碳酸钠与碳酸钾各约0.1g，混匀，在 600 炽灼 1520分钟，
7、放冷，加水2ml 使溶解，加盐酸溶液（12）酸化，滤过，滤液加茜素锆试液 0.5ml，应显黄色。,（五）氯化物的鉴别反应,国内外药典均要求对吩噻嗪类药物的盐酸盐及其制剂进行氯化物的鉴别。,鉴别反应,与硝酸银的沉淀反应,与二氧化锰等氧化剂的氧化还原反应,注意点： 采用与硝酸银的沉淀反应进行鉴别时，由于硫氮杂蒽母核具有还原性，稀硝酸的加入将使吩噻嗪类药物发生氧化显色反应。可在供试品溶液中加氨试液使成碱性，吩噻嗪类药物析出，滤除沉淀，取滤液进行试验。,二氧化锰等氧化剂的氧化还原反应进行鉴别： 如果硫氮杂蒽母核和氯离子均被氧化，由于正反应为具有挥发性的氧化产物氯气所致（用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色）
8、 ，吩噻嗪类药物的存在不干扰氯化物的鉴别反应。,二、光谱法,（一）红外分光光度法,ChP2010收载的吩噻嗪类原料药均采用红外分光光度法(IR)鉴别。本类药物的制剂可采用提取后红外分光光度法(IR)鉴别。,（二）紫外分光光度法,【示例11-16 】盐酸氯丙嗪鉴别 （ChP2010）,取本品，加盐酸溶液(91000)制成每1ml中含5g的溶液，在254nm与306nm的波长处有最大吸收，在254nm的波长处吸光度约为0.46。,ChP2010和EP7在用紫外分光光度法鉴别盐酸氯丙嗪时，由于205nm为紫外末端波长，其最大吸收未作为鉴别的依据；又因为306nm波长处的吸光度及吸收系数较低，也未作为
9、鉴别的依据。,三、色谱法,（一）薄层色谱法,USP32-NF27和EP7采用薄层色谱法（TLC）鉴别吩噻嗪类药物及其制剂，以药物对照品制备对照品溶液。,（二）高效液相色谱法,ChP2010采用高效液相色谱法(HPLC)鉴别盐酸氟奋乃静及其制剂，以药物对照品制备对照品溶液。,四、其他方法,吩噻嗪类药物还可以通过熔点测定进行鉴别。,【示例11-22】,EP7奋乃静鉴别法：照毛细管法测定，本品的熔点 为96100。,第三节 有关物质检查,吩噻嗪类药物的有关物质主要包括：,残留的原料及中间产物,副产物,药物的氧化产物,检查方法,高效液相色谱法（HPLC）,薄层色谱法（TLC）,一、盐酸氯丙嗪及其制剂的
10、有关物质检查,（一）合成路线与有关物质,1、 合成路线,2、有关物质及其编号代码,残留的中间产物：,贮藏不当或存放时间过长而产生的有关物质：,（二）有关物质检查方法,1、 盐酸氯丙嗪的有关物质检查,【示例11-23】,ChP2010,检查方法：,HPLC高低浓度法,色谱条件,色谱柱：C8(0.25m4.0mm，5m),流动相：乙腈-0.5%三氟乙酸(pH5.3)(5050),检测波长：254nm,判断标准：,供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(0.5%)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(1.0%)。,【示例11-24】 EP7检查法,检查方法
11、：HPLC杂质对照品法,色谱条件,色谱柱：C8(0.25m4.0mm，5m),流动相：硫二甘醇-乙腈-0.5%三氟乙酸（pH 5.3)(0.25050),检测波长：254nm,流速：1.0ml/min,系统适用性试验：,杂质编号代码分别为，A()、B()、C(3-(10H-吩噻嗪-10-基)-N,N-二甲基-1-丙胺(丙嗪)、D()和E(),以氯丙嗪(保留时间约为8分钟)为参比，杂质A、B、C、D和E的相对保留时间分别约为0.4、0.5、0.7、0.9和3.4。用对照D溶液进行试验，杂质D峰与氯丙嗪峰的分离度不得小于2.0。,限 度：,供试品溶液中，杂质A的峰面积不得大于对照溶液(c)的峰面积
12、(0.1%)； 杂质B、C、D各峰面积均不得大于对照溶液(b)主峰面积的0.6倍(0.3%)； 杂质E的峰面积不得大于对照溶液(d)的相应峰面积(0.1%) ； 其他各杂质峰面积均不得大于对照溶液(b)主峰面积的0.2倍(0.1%)； 各杂质峰面积的和不得大于对照溶液(b)主峰面积的2倍(1.0%)； 任何小于对照溶液(b)主峰面积0.1倍的杂质峰面积可忽略不计(0.05%)。,EP7检查法特点：,规定了各杂质峰与主峰的相对保留时间。,采用主成分自身对照法控制杂质B(0.3%)、杂质C(0.3%)、杂质D(0.3%)、其他杂质(0.1%)、杂质总量(1.0%)和可忽略杂质(0.05%)，采用杂
13、质对照品法控制杂质A(0.1%)和杂质E(0.1%)。,制备溶液时，称量和量取的精度要求随溶液及其溶质的用途不同而不同。,【示例11-25】 其他烷基化吩噻嗪类化合物的检查（USP32-NF27 ）,检查方法：TLC高低浓度法,TLC条件,固定相：硅胶薄层板,展开剂：新鲜配制的、氨水饱和的乙醚-乙酸乙酯(11),判断标准： 供试品溶液除主斑点外的其他斑点，其面积和强度均不得大于对照品稀释液的主斑点(0.5%)。,2、 盐酸氯丙嗪(糖衣)片的有关物质检查,【示例11-26】,ChP 2010 检查法,检查方法：,HPLC 高低浓度对比法,判断标准：,供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积
14、不得大于对照溶液主峰面积(0.5%)。, 采用过滤法排除片剂辅料的干扰；,说 明：, 取消了对杂质总量的控制，在一定程度上减 弱了控制。,3、 盐酸氯丙嗪注射液的有关物质检查,【示例11-27】,ChP2010 检查法,检查方法：,HPLC高低浓度对比法,判断标准：, 供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，大于对照溶液主峰面积(0.5%)且小于对照溶液主峰面积10倍(5%)的杂质峰不得多于一个。, 其他单个杂质峰面积均不得大于对照溶液主峰面积(0.5%)。,说 明：,与盐酸氯丙嗪片的有关物质检查相比，允许有一个杂质大于0.5%，但应小于5%，减弱了对单个杂质的控制。,【示例11-28】氯丙嗪亚砜的限
15、量检查（USP32-NF27）,检查方法：,TLC法,判断标准：,TLC条件,固定相：硅胶薄层板,展开剂：新鲜配制的、氨水饱和的乙醚-乙酸乙酯(11),供试品溶液除主斑点外的其他斑点，其面积和强度均不得大于对照品溶液的主斑点(5.0%) 。,二、奋乃静及其制剂的有关物质检查,（一）合成路线与有关物质,（二）有关物质检查方法,【示例11-29】,奋乃静的有关物质检查 （ChP2010）,检查方法：,HPLC 高低浓度对比法,色谱条件,色谱柱：C18,流动相：甲醇和0.03mol/L醋酸铵溶液,洗脱方式：梯度洗脱,检测波长：254nm,系统适用性试验：,奋乃静峰保留时间约为27分钟，与相对保留时间
16、约为0.73的降解杂质峰的分离度应大于7.0。,判断标准：,供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于 对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%),各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(2.0%)。,供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.01倍的色谱峰 可忽略不计,说 明：,少量30%过氧化氢溶液使部分奋乃静氧化用于系统分离能力的测试；,因氧化还原反应速度较慢，溶液需放置1.5小时 ；,奋乃静 与降解产物之间分离度达到7.0 。,【示例11-30】,奋乃静(糖衣或薄膜衣)片的有关物质检查（ ChP2010）,检查方法：,HPLC 高低浓度对比法,判断标准：,供试品溶液
17、的色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍(0.5%) ；,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的3倍(3.0%)。,供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的色谱峰可忽略不计。,说 明：,样品处理过程中采用离心法及过滤法以排除片剂辅 料对检查的干扰,第四节 含 量 测 定,一、酸碱滴定法,（一）非水溶液滴定法,【示例11-31】,盐酸氯丙嗪的含量测定,取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸10mL与醋酐30 mL溶解后，照电位滴定法，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于3
18、5.53mg的C17H19ClN2SHCl。,（ChP2010，USP32-NF27和JP15 ）,溶 剂：,冰醋酸与醋酐的混合溶液,由于醋酐解离生成的醋酐合乙酰离子CH3CO+(CH3CO)2O比醋酸解离生成的醋酸合质子H+CH3COOH酸性强，更利于增强氯丙嗪的碱性，因此能够显著增大滴定突跃范围。,滴定剂：,高氯酸滴定液(0.1mol/L),指示终点方法：,电位法,指示电极：玻璃电极,参比电极：,饱和甘汞电极(玻璃套管内装氯化钾的饱和无水甲醇溶液),空白试验：一定程度上校正溶剂等对测定的影响,高氯酸滴定液温度校正：,若滴定供试品与标定高氯酸滴定液时的温度差10，应重新标定；,若10，则用下
19、式校正：,式中：0.0011为冰醋酸的膨胀系数； t0为标定高氯酸滴定液时的温度； t1为滴定供试品时的温度； N0为t0时高氯酸滴定液的浓度； N1为t1时高氯酸滴定液的浓度。,【示例11-32】,盐酸氯丙嗪注射液的含量测定 （JP15）,精密量取本品适量(约相当于盐酸氯丙嗪0.15g)，置分液漏斗中，加水30ml与20%氢氧化钠溶液10ml，用乙醚30ml提取2次，再用乙醚20ml提取3次，合并提取液；用水10ml逐次洗涤上述提取液，直至水层遇酚酞指示液不再显红色。水浴浓缩乙醚层至20ml，加无水硫酸钠5g，静置20分钟，脱脂棉过滤，乙醚洗涤，合并洗液与滤液，水浴挥干乙醚。残渣加丙酮50m
20、l与冰醋酸5ml使溶解，加溴甲酚绿-结晶紫混合指示液3滴，用高氯酸滴定液(0.05mol/L)滴定至溶液由紫红色变为蓝紫色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.05mol/L)相当于17.77mg的C17H19ClN2SHCl。,说明：,通过碱化、有机溶剂提取游离碱氯丙嗪，排除了水的干扰(为减少水分对测定的干扰，在乙醚提取液中加入无水硫酸钠脱水)。,（二）乙醇-水溶液中的氢氧化钠滴定法,吩噻嗪类药物盐酸盐的水溶液显酸性，在乙醇-水溶液中，可采用氢氧化钠滴定液测定其含量。,反应体系中加入适量的盐酸，采用电位法指示滴定终点。,第一个等当点：,第二个等当点：,根据两个等当点间相应
21、的氢氧化钠滴定液的体积，即可计算吩噻嗪类药物的盐酸盐的含量。,【示例11-33】,盐酸异丙嗪的含量测定（ ChP2010）,取本品约0.25g，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液5 mL与乙醇50mL使溶解。照电位滴定法，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定，出现第一个突跃点时记下消耗的毫升数V1，继续滴定至出现第二个突跃点时记下消耗的毫升数V2，V2与V1之差即为本品消耗滴定液的体积。每1ml氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于32.09mg的C17H20N2SHCl。,EP7采用该法测定盐酸异丙嗪、盐酸氯丙嗪和盐酸三氟拉嗪的含量。,二、分光光度法,（一）直接分光光度法,本法适用
22、于纯度较高、杂质及辅料无干扰或干扰易排除的吩噻嗪类药物的含量测定。,【示例11-34】,盐酸氯丙嗪(糖衣)片的含量测定 （ChP2010）,取本品10片，除去包衣后，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸氯丙嗪10mg)，置100ml量瓶中，加溶剂盐酸溶液(91000)70mlL，振摇使盐酸氯丙嗪溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置100ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在254nm的波长处测定吸光度，按C17H19ClN2SHCl的吸收系数 (E1% 1cm)为915计算，即得。,（二）提取后分光光度法,通过提取排除辅料等干扰以测定吩噻嗪
23、类药物制剂,【示例11-36】,盐酸异丙嗪口服液的含量测定(USP32-NF27),提取方法：,在碱性条件下采用三氯甲烷提取分离游离碱异丙嗪,样品溶解：,挥干三氯甲烷后，用稀硫酸溶解异丙嗪残渣,测 定,波长：298nm,空白对照液：稀硫酸,计 算：,式中：C(mg/ml)为对照品溶液的浓度； V(ml)为所取供试品的体积； AU和AS分别为供试品溶液及对照品溶液的吸光度。,（三）提取后双波长分光光度法,提取后分光光度法能够除去一些干扰物质，但却不能除去吩噻嗪类药物的氧化物。提取时，氧化物随游离碱进入有机相；测定时，因结构相近，氧化物在吩噻嗪类药物的测定波长处产生吸收，干扰测定。,【示例11-3
24、7】,盐酸氯丙嗪注射液的含量测定 （ USP32-NF27）,测定波长：,254nm（最大吸收波长）及277nm（等吸收波长）,空白对照液：0.1mol/L盐酸溶液,计算公式：,式中：C(mg/ml)为对照品溶液的浓度； V(ml)为所取供试品的体积； 括号内的公式分别为供试品溶液(U)和对照品溶液(S)在下标所 示波长处的吸光度差。,（四）二阶导数分光光度法,吩噻嗪类药物制剂中其他成分对含量测定的干扰，虽然可以采用提取后分光光度法或提取后双波长分光光度法消除，但操作烦琐。,盐酸氯丙嗪注射液,抗氧剂维生素C的二阶导数光谱近似为接近基线的一条直线，不干扰盐酸氯丙嗪的测定.,因此盐酸氯丙嗪可从其二
25、阶导数光谱量取 峰266nm谷254nm距离，标准曲线法定量,（五）钯离子比色法,吩噻嗪类药物在pH 20.1的缓冲溶液中，与钯离子(Pd2+)形成红色配合物，在500nm波长附近具有最大吸收.,由于钯离子仅与未被氧化的硫元素配合显色，消除了药物中氧化物对测定的干扰。,比色液的浓度：50 250 g/mL,显色稳定性：10分钟后可稳定约2小时,三、高效液相色谱法,（一）反相高效液相色谱法,在分离具有弱碱性的吩噻嗪类药物时，未硅烷化的硅醇基与吩噻嗪类药物发生吸附或离子交换作用，使分离效能下降，表现为吩噻嗪类药物的色谱峰拖尾、保留时间过长(甚至不能被洗脱)。通常在流动相中加入含氮碱性竞争试剂(扫尾
26、剂)，以抑制碱性药物与未硅烷化的硅醇基作用。,常用的扫尾剂：醋酸铵、三乙胺、二乙胺、乙腈等。,【示例11-39】,盐酸氯丙嗪片的含量测定（JP15）,色谱条件,色谱柱：ODS柱(15cm4.6mm, 5m),流动相：0.05mol/L磷酸二氢钠溶液的稀释液(12)-乙腈(2713),柱温：25,检测波长：256nm,系统适用性试验,内标物质与氯丙嗪分离度不得小于10,氯丙嗪与内标物质峰面积比值的RSD不得大于1.0%（n=6),定量方法：,内标法进行定量分析,内标物：对羟基苯甲酸乙酯,【示例11-40】,氟奋乃静注射液的含量测定（ChP2010）,色谱条件,色谱柱：ODS柱,流动相：,碳酸铵甲
27、醇溶液(1%碳酸铵溶液-甲醇(75450)，用醋酸调节pH至7.50.1)-乙腈(525450),检测波长：260 nm,系统适用性试验：,出峰顺序依次为降解物、与氟奋乃静，降解物、两峰的分离度应大于2.0 ；,理论板数按氟奋乃静峰计算不低于5000。,定量方法：,外标法以峰面积计算,（二）离子对高效液相色谱法,在分析具有碱性的吩噻嗪类药物时，常用的离子对试剂为烷基磺酸盐阴离子对试剂，如戊烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、十二烷磺酸钠等。,影响离子对形成的条件,pH,反离子的性质与浓度,流动相的组成,离子强度等,影响待测组分的保留,【示例11-42】,盐酸异丙嗪注射液的含量（USP32-NF27）,色谱条
28、件,色谱柱：苯基柱（30cm4.6mm）,流动相：0.2%戊烷磺酸钠溶液-乙腈-冰醋酸(1001001),流速：1.5mL/min,检测波长：254nm,系统适用性试验：, 异丙嗪与吩噻嗪色谱峰的分离度不得小于3.0；,重复进样的相对标准偏差不得大于2.0%。,计算公式：,式中：C(mg/mL为对照品溶液的浓度； V(mL)为所取供试品的体积； rU和rS分别为供试品溶液及对照品溶液的主峰响应值。,四、液相色谱-质谱联用技术,液相色谱-质谱联用技术集HPLC的高分离效能和MS的高专属性及高灵敏度于一体，已经成为目前测定复杂生物样本中微量药物的首选方法，同时也是进行药物及有关物质定性分析的常用方
29、法。,【示例11-43】,液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)同时测定7种抗抑郁类和5种抗精神病类药物,用乙腈以沉淀法处理样品,血清样品处理：,色谱条件,色谱柱：Xbridge Phenyl柱(150mm2.1mm，5m),流动相：0.02%甲酸水溶液-0.02%甲酸乙腈溶液(3565),流速：0.3mL/min,进样量：20L,电喷雾正离子化多反应监测(MRM),MS：,色谱图：,图11-4 血浆中7种抗抑郁类和5种抗精神病类药物的LC-MS/MS检测典型色谱图,1.五氟利多；2.匹莫奇特；3.氯普噻吨；4.硫利达嗪；5.三氟拉嗪；6.阿米替林；7.氯米帕明；8.氟西汀；9.丙米嗪；10.马普替林；11.地昔帕明；12.舍曲林；IS.还阳酚,