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1、第3节 基因工程的基本内容 制作者 陆勤华,基因工程的基本内容,引入 基因工程的概念 基因操作的工具 基因操作的基本步骤 资料扩展 小结 习题训练,结 束,引入,基因决定性状（一）,基因决定性状（二）,基因决定性状（三）,主 页,定向基因改造设想,基因决定性状（一）,青霉菌能产生对人类有用的抗生素青霉素,返 回,基因决定性状（二）,家蚕能够吐出蚕丝为人类利用,返 回,返 回,基因决定性状（三）,豆科植物的根瘤能够固定空气中的氮,定向基因改造设想,设想一,能否让禾本科的植物也能够固定空气中的氮？,能否让细菌“吐出”蚕丝？,设想二,能否让微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物？,设想三,经过多
2、年的努力，科学家于20世纪70年代创立了可以定向改造生物的新技术基因工程。,返 回,基因工程概念,基因工程：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出所需要的基因产物。,主 页,基因操作的工具,基因的剪刀限制性内切酶,基因工程过程示意图,基因的针线DNA连接酶,主 页,基因的运输工具运载体,基因工程过程示意图,从细胞中分离出DNA,限制酶截取DNA片断,分离大肠杆菌中的质粒, DNA重组,用重组质粒转化大肠杆菌,培养大肠杆菌克隆大量基因,返 回,限制性内切酶,分布：主要在微生物中。 特
3、点：特异性，即识别特定核苷酸序列， 切割特定切点。 结果：产生黏性未端（碱基互补配对）。 举例：大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。,返 回,DNA连接酶,连接酶的作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 连接的部位：磷酸二酯键，不是氢键。 DNA连接酶的作用过程,返 回,运载体,作用：将外源基因送入受体细胞。 条件： （1）能在宿主细胞内复制并稳定地保存。 （2）具有多个限制酶切点。 （3）具有某些标记基因 种类：质粒、噬菌体和动植物病毒。 质粒的特点,要让一个从甲生物细胞内取出来的基因在乙生物体内进行表达，首先得将这个基因送到乙生物
4、的细胞内去。能将外源基因送入细胞的工具就是运载体。,返 回,基因操作的基本步骤,提取目的基因,目的基因与运载体结合,将目的基因导入受体细胞,主 页,目的基因的检测和表达一,目的基因的检测和表达二,提取目的基因,将需要的基因从供体生物的细胞内提取出来。,取 出DNA,用限制酶切断DNA,目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。,返 回,提取目的基因的方法（一）,直接分离基因鸟枪法,将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基
5、因工程就算成功了。 该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。,用限制酶切成许多片断,下一页,提取目的基因的方法（二）,人工基因合成法,逆转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。,DNA合成仪,PCR扩增仪,返 回,目的基因与运载体结合,用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，
6、在连拉酶的作用下连接形成重组DNA分子。,提取质粒并用限制酶切割,用连接酶将目的基因和质粒连接,返 回,将目的基因导入受体细胞并扩增,基因工程中常用的受体细胞有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌和动植物细胞等。 导入受体细胞常用的方法是借鉴细菌或者病毒侵染细胞的途径。通常还要对一些受体细胞进行增大通透性的处理。 目的基因可以随着受体细胞进行快速的繁殖，在很短的时间内获得大量的基因。,将目的基因导入受体细胞,将受体细胞进行扩增,返 回,目的基因的检测和表达（一）,前三步的处理十分繁锁，为保证目的基因得到有效利用，通常用大量的受体细胞来接受不多的目的基因。这样，处理的受体细胞中真正摄入了目的基因的很少
7、，必须将它从中检测出来。,细菌的检测，将每个受体细胞单独培养形成菌落，检测菌落中是否有目的基因的表达产物。淘汰无表达产物的菌落，保留有表达产物的进一步培养、研究。,返 回,目的基因的检测和表达（二）,多细胞生物的检测，将每个受体细胞单独培养并诱导发育成完整个体，检测这些个体是否摄入目的基因，摄入的基因是否表达（是否表现出相应的性状）。淘汰无变化的个体，保留有相应变化的个体进一步培养、研究。,例：用棉铃饲喂棉铃虫，如虫吃后不出现中毒症状，说明未摄入目的基因或摄入目的基因未表达。如虫吃后中毒死亡，则说明摄入了抗虫基因并得到表达。,返 回,DNA连接酶的作用原理,主 页,小 结,主 页,一种限制酶只
8、能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA 分子切断。目前已发现的限制酶有200多种。,返 回,DNA连接酶的作用过程,返 回,质 粒,返 回,质粒的特点,细胞染色体外能自主复制的小型环状DNA分子； 质粒是基因工程中最常用的运载体； 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒； 存在于许多细菌及酵母菌等生物中； 质粒的存在对宿主细胞无影响； 质粒的复制只能在宿主细胞内完成。,返 回,2、(05年全国理综)科学家通过基因工程的方法，能使马铃薯块茎含有人奶主要蛋白。以下有关基因工程的叙述，错误的是（ ） A、采用反转录的方法得到的目的基因有内含子 B、基因非编码区对于目的基因在块茎中的表壳是不可缺
9、少的 C、马铃薯的叶肉细胞可用为受体细胞 D、用同一种限制酶，分别处理质粒和含目的基因的DNA，可产生粘性末端而形成重组DNA分子,3.下列说法正确的是（ ） A.DNA连接酶最初是从人体细胞中发现的 B.限制酶的切口一定是CAATTC碱基序列 C.质粒是基因工程中唯一用做运载目的基因的运载体 D.利用运载体在宿主细胞内对目的基因进行大量复制的过程可称为“克隆” 9.用珠蛋白的DNA探针可以检测出的遗传病是（ ） 下一页,1.鸟枪法不适于从下列何种生物中获取目的基因？( ) A枯草杆菌 B.放线菌 C.酵母菌 D.病毒,19如图将人的生长激素基因导入细菌B细胞内制造“工程菌”示意图，所用载体为
10、质粒A。已知细菌B细胞内不含质粒A，也不含质粒A上的基因，质粒A导入细菌B后，其上的基因能得到表达。请回答下列问题： （1）人工获得目的基因的途径一般有几条？ （2）如何将目的基因和治理相结合形成重组质粒？ （3）目前把重组质粒导入细菌细胞时，效率还不太高；导入完成后所得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒，只有少数导入的是重组质粒。此处可以通过如下步骤来鉴别得到的细菌是否导入了质粒A或重组质粒：将得到的细菌涂布在一个有氨苄青霉素的培养基上，能够生长的就是导入了质粒A或重组质粒，反之则没有。用这种方法鉴别的原理是 。 （4）若把通过鉴定证明导入了普通质粒或重组质粒的细菌放在含有四环素的培养基上培养，会发生的现象是 。原因是 。 （5）导入细菌B细胞中的目的基因成功表达的标志是什么？,