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1、,第三节 特殊用途的载体,一、插入或定点整合突变载体,(一)基因定点插入/基因敲除载体 将外源基因与靶细胞基因组DNA的同源序列进行同源重组， 使某一位点的基因发生定点突变 (二)随机插入突变载体 1.T-DNA插入突变载体 如：pFX-E24.2-15R 2.转座子插入突变载体 如：pEG922,二、启动子探针型表达载体,特点： 具有一个无启动子的易检测的基因。这种基因必须满足一个重要条件：基因编码区5端可以作较大的修改而不影响其产物的活性。 LacZ, GUS, Kanr基因可以满足该要求。在大多数载体中，检测基因不仅被除去了启动子序列，其翻译起始区也被除去（II型），有的则仅仅除去了转录
2、起始区 （I型）。 用途： i. 分离未知基因的启动子型启动子探针型载体 ii.鉴定已知基因的启动子和比较其强弱型启动子探针型载体,二、启动子探针型表达载体,启动子探针型载体结构,三、RNAi载体,RNA interference（RNAi） 是指将外源双链RNA(doublestranded RNA，dsRNA)导人细胞后引起与其序列同源的特异基因mRNA 降解的现象，属于转录后基因沉默 (posttranscriptional gene silencing，PTGS)的一种形式。,三、RNAi载体,RNA interference（RNAi）,三、RNAi载体,紫色为正义RNA段，蓝色为反义RNA段，绿色为目标信使RNA，dsRNA触发了高效的基因沉默机制并极大降低了靶mRNA水平，达到干扰目的,RNAi的机制,三、RNAi载体,商品化载体的siRNA策略示意图,小结,几种基因载体的比较,本章重点掌握的内容,掌握载体、克隆载体、表达载体、穿梭载体、质粒、-互补、插入失活、人工染色体载体的概念。 克隆载体DNA分子具备的条件。 标记基因的分类及其作用。 pUC18/19质粒载体的组成、优点及质粒克隆载体用途。 -DNA载体的构建、类型及其优点。 植物表达载体的组成、启动子的类型等,OVer!,