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1、河南科技大学毕业设计（论文）葛根总黄酮缓释制剂研究摘要针对葛根黄酮的溶解性差和其生物利用度低的问题，本研究通过对葛根黄酮采用生物粘附材料，制备胃内滞留型的缓释制剂，以提高葛根黄酮的生物利用度。同时在葛根黄酮生物粘附性胃滞留剂的基础上通过加入漂浮剂也对漂浮和生物粘附协同型的胃内滞留系统进行了考查。本研究以羟丙基甲基纤维素(HPMC)与卡波姆(CP)为骨架粘附材料，乳糖为致孔剂，同时选用硬脂酸镁为润滑剂，分别采用湿法制粒压片和直接粉末压片的方法制备葛根总黄酮缓释骨架粘附片。采用桨法测定其溶出度检测试验，以葛根素为检测对象，考察了HPMC用量，CP用量，乳糖用量以及三者之间的比例关系对葛根总黄酮缓释
2、骨架粘附片释放度的影响，同时本实验也考查了压力的影响。另外，本研究在葛根总黄酮缓释骨架粘附片缓释配方的基础上通过加入适量比例的柠檬酸和碳酸氢钠，采用以上两种压片方法，制备了漂浮-生物粘附协同型制剂，并对其释放效果进行了考查。HPMC与CP作为缓释制剂的制备材料，均可以延缓葛根黄酮药物的释放，其中CP的缓释效果较强，当两者联合应用于葛根黄酮时，通过调整二者之间的比例，可以达到更好的缓释效果，本研究中当葛根黄酮、HPMC、 CP、乳糖的比例为100:90:21.3:73.7和100:60:45:73.7时，药剂在12小时内可以达到较好的缓释效果和较高的累积释放度(可以达到88.9%)。研究发现乳糖
3、在葛根黄酮的药物制备中作为致孔剂可以促进主药的释放，同时制片时压力的大小也对释放度有影响。泡腾性漂浮材料的加入有效促进了药物的漂浮性，使药物达到较好的缓释效果。关键词 葛根总黄酮，缓释制剂 ，胃滞留系统，体外溶出实验 STUDIES ON THE SUSTAINED-RELEASE FOR-MULATIONS OF GEGEN TOTAL FLAVONOIDSABSTRACTTo improve the poor solubility and low bioavailability of Gegen flavonoids, this study prepared stomach-strande
4、d sustained-release formulations with bioadhesive materials. Based on stomach-stranded sustained-release formulations, by joining the floating-materials, the study test collaborative floating-bioadhesive stomach-stranded system.We choose HPMC and CP as matrix adhesive materials, lactose as to pore a
5、gent, and magnesium as lubricant. Respectively with wet granulation compression way and pressed powder directly way, we chose propeller law as dissolution-testing way and puerarin as detected target, to test the effect of HPMC dosage, CP dosage, lactose dosage and the ratio between the three factors
6、 on drug release. At the same time this experiment has also examined the effects of pressure on drug release. In addition, by joining citric acid and sodium bicarbonate in stomach-stranded sustained-release formulations related above, this study tested the effect of collaborative floating-bioadhesiv
7、e system on dug release. As matrix adhesive materials, HPMC and CP could keep release of Gegen flavonoids. In test, we found the effect of CP is stronger. When two materials were joined, we found drugs were able to keep drugs release better at proper ratio of two materials. In study, we found when t
8、he ratio of Gegen flavonoids、HPMC、CP、lactose were 100:90:21.3:73.7 and 100:60:45:73.7, drug could keep better release and reach higher release rate in 12h.(88.9%) At the same time we found the lactose could improve the release of drug and the compression had important effect on the release of drug.
9、In test, floating-materials could keep drug floating, and made drug get better release.KEY WORDS: Gegen flavonoids, sustained-release formulations, stomach-stranded system, dissolution test in vitro.目 录第1章 前 言11.1 葛根黄酮的理化性质与药理作用11.1.1 葛根总黄酮的理化性质11.1.2 葛根药理作用的研究11.2 目前已经开发的葛根黄酮类产品21.3 葛根黄酮的临床研究31.4 目
10、前缓控释制剂的主要研究31.4.1 缓控释制剂的定义与类型31.4.2 胃内滞留给药系统41.5 目前葛根黄酮缓控释制剂产品研究71.5.1 葛根素的固体分散体71.5.2 葛根黄酮口服微丸制剂71.5.3 葛根总黄酮生物粘附片71.5.4 葛根黄酮缓释胶囊81.5.5 葛根总黄酮骨架缓释片81.5.6 葛根黄酮 EC-PEG载药系统81.6 结语9第2章 实验部分102.1 前言102.2 仪器与试药102.2.1 仪器102.2.2 药品与试剂102.3 实验方法112.3.1 葛根总黄酮缓释片的制备112.4 标准曲线112.4.1 葛根素最大吸收波长的确定112.4.2 标准样的配制1
11、22.5 桨法测定溶出度的操作方法13第3章 结果与讨论103.1 药物溶出过程153.2 HPMC用量对释放度的影响153.3 CP用量对释放度的影响173.4 乳糖用量对释放度的影响183.5 压力对释放度的影响203.6 粉末压片与湿法制粒压片对药物释放度的影响对比213.7 漂浮剂对药物释放的影响23第4章 结 论25参考文献26致 谢281河南科技大学毕业设计（论文）第1章 前 言1.1 葛根黄酮的理化性质与药理作用葛根为豆科植物野葛或干葛藤的干燥根，干葛藤又可称为粉葛。葛根为常用中药，始载于神农本草经，被列为中品。我国为葛属植物分布的中心，集中分布在西南部、中南部至东南部。葛属植物
12、中野葛和粉葛，也叫甘葛，可入药，具有发表解肌、开阳透疹、解热生津等作用，对心血管系统、免疫系统等疾病有较好的治疗效果1-2。1.1.1 葛根总黄酮的理化性质 葛根总黄酮来源于豆科植物野葛Pueraria lobata (Willd.)Ohwi的根，外观为棕黄色至淡黄色粉末，无臭。其主要成分为大豆素(daidzein)、大豆苷(daidzin)、葛根素(puerarin)、葛根素-7-木糖甙(puerarin-7-xyloside)等。由于其主要为黄酮类化合物具有黄酮类化合物的性质：黄酮类化合物因分子中多具有酚羟基，故显酸性，可溶于碱性水溶液、吡啶、甲酰胺及二甲基甲酰胺中。黄酮类化合物因分子中7
13、吡喃环上的1位氧原子，因有未共用的电子对，故表现微弱的碱性，可与强无机酸，如浓硫酸、盐酸等生成盐，但生成的盐极不稳定，加水后即可分解。黄酮类化合物溶于浓硫酸中生成的盐，常常表现出特殊的颜色，可用于鉴别。某些甲氧基黄酮溶于浓盐酸中显深黄色，且可与生物碱沉淀试剂生成沉淀。葛根总黄酮类在水中的溶解度较低，如葛根素在水中溶解度仅为1.110-2molL-1，葛根黄酮在体内吸收不完全，有50%以上以原形药物从粪便排出，生物利用度低，一般在服用 23wk甚至 23mo后才起效，给病人服药带来不便。1.1.2 葛根药理作用的研究近年来对葛根的药理作用进行了大量研究工作，主要有以下方面:对平滑肌的作用，抗癌及
14、诱导癌细胞的分化作用，抗氧化作用，降血糖作用，对冠状动脉的影响，对心律失常的作用，对心脏功能和心肌代谢的影响，对血压和外围血管的用，抑制血小板聚集作用，对记忆的作用，对免疫功能的作用，解热作用，解痉作用以及对视网用膜的影响。临床上葛根黄酮主要用于解肌退热，生津，透疹，升阳止泻。临床主要用于治疗酒精中毒、视网膜、动静脉阻塞、突发性耳聋、心肌梗塞、冠心病、心绞痛、高血压、高血脂等病症。3-6通过研究表明葛根含有多种营养物质和活性物质(异黄酮中葛根素、大豆甙等具有多种药效作用，是一种很有开发利用价值的资源。可以用葛根来开发各种药用产品，也可用它来制造营养保健性食品。1.2 目前已经开发的葛根黄酮类产
15、品目前葛根药品开发中，最具意义的是葛根素。它属于近年来新开发的一种较高端产品，效果好，应用面广，价值高。例如功能与主治于解肌退热，生津，透疹，升阳止泻。用于外感发热头痛、项背强痛，口渴，消渴，麻疹不透，热痢，泄泻;高血压颈项强痛的葛根素浸膏粉，剂型包括颗粒剂、粉剂。葛根素剂型还有注射液、胶囊剂、片剂。如从葛根中提取分离得到的 8-2-D-2-葡萄吡喃糖2472二羟基异黄酮。葛根素能扩张冠状动脉，降低血压，减慢心率，降低心肌耗氧指数而无明显负性肌力作用，还可降低胆固醇和血粘度，改善血液微循环，保护心肌，葛根素用于心肌梗塞、冠心病、心绞痛、视网膜动静脉阻塞、突发性耳聋。愈风宁心片:葛根经加工制成的
16、浸膏片。功能与主治:解痉止痛，增强脑及冠脉血流量。用于高血压头晕，头痛，颈项疼痛，冠心病，心绞痛，神经性头痛，早期突发性耳聋等症。心血宁片:主要成分:葛根、山楂。功能与主治:活血通脉，舒心降压。用于冠状动脉硬化心脏病、心绞痛、高血脂及高血压引起的颈项强痛等症。葛根岑连片：成分：葛根，黄芩，黄连，甘草。功能与主治:解肌，清热，止泻止痢。用于泄泻痢疾，身热烦渴，下利臭秽。1.3 葛根黄酮的临床研究葛根总黄酮类在水中的溶解度较低，如葛根素在水中溶解度仅为1.110-2 molL-1，葛根黄酮在体内吸收不完全，有50%以上以原形药物从粪便排出，生物利用度低，一般在服用 23wk甚至 23mo后才起效，
17、给病人服药带来不便。为了提高起其生物利用度，减少给药次数，增加病人顺应性，增加血药浓度平稳性，现在相继开发出新的葛根黄酮产品都着力于改善上述不利因素。葛属植物黄酮类化合物药理活性强，药效明显，临床应用广泛，是一类很有发展前途的药物。利用前药、软药等原理对其结构进行修饰改造，以改善其水溶性和脂溶性，改变其在体内的脂水分布系数，提高其生物利用度及选择性，最终增强其药理活性，将成为今后对葛属植物黄酮类化合物研究的重点如其临床使用的注射剂中需加入助溶剂，以提高溶解度。目前用于临床的葛根素注射剂配方中，只有加入较高浓度的丙二醇作为助溶溶媒时，才能达到该注射剂要求的药物浓度，这样不仅使制剂成本增加，而且由
18、于药液黏稠度较高，在制剂生产中较难过滤。研究发现，赖氨酸、精氨酸、组氨酸、烟酰胺、聚乙烯吡咯烷酮( PVP)能使葛根素在水中的溶解度增加12倍，可作为葛根素注射液处方中的助溶剂。同时，当前生产上尚难以获得纯度较高的葛根素原料药，用于临床的葛根素中含5% 10%的甲氧基葛根素，有人测定了甲氧基葛根素和葛根素的溶解度，分别为1. 7710 - 1 molL-1和1. 11 10 - 1 molL-1，发现随着甲氧基葛根素含量的增加，葛根素的溶解性明显升高且大于两者的溶解度之和，表明这两种结构相近的化合物有相互助溶作用，也提示随着葛根素提取分离工艺的改进，葛根素纯度将逐渐提高，溶解性则会随之降低。因
19、而有必要寻求提高葛根素溶解度的方法来扩大其临床应用。1.4 目前缓控释制剂的主要研究1.4.1 缓控释制剂的定义与类型缓释制剂(sustained-release system) 有时亦称长效制剂或延效制剂，是指通过适宜的方法延缓药物在体内的释放、吸收、代谢以及排泄的过程， 从而延长药物的作用时间或者减轻其毒副作用的给药系统， 动力学为一级释药。主要类型有： 不溶性骨架制剂、生物溶蚀性骨架制剂、亲水凝胶骨架制剂及缓释包衣制剂等。常见剂型有片剂、胶囊剂、颗粒剂等7，如阿司匹林缓释胶囊、硫酸吗啡缓释片等。控释制剂(controlled-release system) 能够控制药物释放速率使其符合药
20、物动力学需要， 保持较长时间体内药物治疗浓度的恒定， 免除峰谷现象， 药物以受控形式恒速(以零级或接近零级速率)释放或者被控制在作用器官等特定吸收部位释放， 动力学为零级或接近零级释药。主要类型有：定速释放制剂， 如骨架型、薄膜包衣型、渗透泵型、离子交换树脂型、包合物型、微球(囊)型等8缓控释制剂等；定位释放制剂， 如胃内滞留漂浮制剂、结肠释药制剂；定时释放制剂， 如通过调节聚合物材料的溶蚀度来实现在预定的时间内释放药物， 或用生理反馈原理和计算机调节技术来达到定时释药目的脉冲释药制剂 、膜控剂等。控释不仅包含缓释作用， 而且药物的释放控制在某一定值， 其动力学比缓释制剂有预见性和重现性。有时
21、把靶向给药系统、透皮给药系统、黏膜给药系统、植入给药系统等也归属于广义的控释制剂范畴。Seong Hoon Jeong 9以水胶体分散乙基纤维素和聚醋酸乙烯酯共聚体作为流化床涂层，制定的缓释快速崩解片可以增加药物表面积的树脂复合，进而提高释放度。Nobuyuki Tanaka10等以蜂蜡和含有崩解剂的固体分散颗粒制备的尼伐地平崩解缓释骨架片(DCMT)通过实验证明了可以维持难溶性药物的吸收，达到缓释效果，并且证实了制备的制剂可以消除胃肠道的影响。Claudia Reitz 11用固体脂质挤压的方法并利用熔融技术制备的缓释制剂也有较好的应用。1.4.2 胃内滞留给药系统胃内滞留给药系统系指延长胃
22、内停留时间的一类制剂。一般来说，胃内漂浮滞留给药系统是根据流体动力学平衡原理设计，口服后该体系能较长时间在胃中呈漂浮状态而不受胃排空速率的影响。为达到漂浮的目的，制剂的密度一般须低于胃液的密度。但漂浮动力学研究表明，制剂的松密度并不是描述漂浮特性的最具权威性的参数，因为漂浮力的大小随时间而变化，且食物对制剂的潜在影响不可忽略。作为一种新型的缓、控释制剂，胃内滞留制剂不仅可以促进药物的吸收，而且也可以起到胃部靶向作用。其制剂按剂型大致上可以分为：漂浮片剂、漂浮胶囊剂、微球剂和微丸剂等。主要采用的技术包括：漂浮体系、膨胀体系、生物粘附体系及其他延迟胃排空的装置。Ninan Ma12等通过离子凝胶化
23、的方法，以碳酸钙作为气体形成剂，制备多单元浮动海藻酸钠微球，来提高药物包封率并通过把壳聚糖加入到凝胶介质中以及用涂层包封，可以使药物在胃肠中达到良好的漂浮性能。这种方法可以用于制备胃漂浮片。Srisagul Sung thong jeen 13等在多股的浮动给药系统的基础上形成的气体技术，延长了胃停留时间，并可以增加整体的生物利用度。王海刚14等制备壳聚糖包覆葛根素脂质体，采用逆相蒸发法制备葛根素脂质体，并用壳聚糖包覆，以延长药物在吸收部位的滞留时间而提高药物的生物利用度。1.4.2.1 漂浮型胃内滞留系统漂浮型胃内滞留系统主要指根据流体动力学平衡原理设计的、能够在胃液中保持漂浮状态的系统。一
24、般认为，该系统的堆密度小于胃液密度，使其在胃内保持漂浮状态以降低或消除胃排空影响，提高胃内滞留时间。但随着泡腾系统的出现，制剂的堆密度小于胃内容物密度不再是必要条件。根据漂浮的机制该系统又可分为非泡腾型漂浮系统和泡腾型漂浮胃内滞留系统。1.4.2.2 生物粘附型胃内滞留系统生物粘附型胃内滞留系统借助于某些高分子材料对生物粘膜产生的特殊粘合力而粘附于粘膜上皮部位，从而延长药物在重点部位的停留和释放时间，促进药物的吸收，提高生物利用度。生物粘附的机制主要有：(1)电荷理论：系材料和粘膜表面物质的电子扩散，在表面产生一个双电层产生粘附；(2)吸附理论：系材料和粘膜表面物质通过范德华力、氢键、疏水键力
25、、水化力及立体化学构象力等产生粘附；(3)润湿理论：系材料溶液在粘膜表面扩散，润湿粘膜产生粘附，此理论可解释具有表面活性的材料在粘膜上粘附；(4)扩散缠绕理论：系材料和粘膜表面物质的相互扩散，导致分子之间的相互缠绕产生粘附；(5)细胞粘附理论：系通过受体配体亲和作用而实现，这种作用具有专一性和靶向性。对不同材料与生物粘膜产生粘附的机制可用一种或几种理论进行解释，目前比较被广泛接受的是扩散缠绕理论。多年来，人们已经测定了许多物质如海藻酸盐、纤维素衍生物、葡聚糖、明胶、果胶、聚氨基葡糖和聚丙烯酸类等的生物粘附性，认为具有较大生物粘附性的物质在本质上大多为聚合物，而聚合物粘附性大小与其分子结构、分子
26、量、浓度、粘附部位的水分及pH等均有关。通常阴离子聚合物与粘液或粘膜层的相互作用最强，而在阴离子聚合物中，聚丙烯酸类具有很好的粘附性。所有粘附材料中只有植物凝集素等带有糖基的物质能与细胞发生特异性粘附，但因植物凝集素只在中性或碱性条件下粘附性较好而使其使用受到限制。Tao15 等 用聚甲基丙烯酸树脂(PMMA)与植物凝集素连接，然后再与抗生物素蛋白共价结合，成功地制备了生物粘附制剂。1.4.2.3 漂浮型和生物粘附型协同胃内滞留系统单纯漂浮型或生物粘附型胃内滞留系统均有其不足之处，两者相互结合形成协同系统，能达到较好的滞留效果。有人用异丁烯酸和丙烯酸交联的生物粘附聚合物制备了异山梨醇硝酸酯漂浮
27、片，然后用卡波姆混悬液或含生物粘附聚合物的卡波姆凝胶溶液包衣结果表明，含生物粘附聚合物的包衣片在pH 1.0 时，具有更好的粘着性，并具有更低的密度。Umamaheshwari16等制备了漂浮粘附型考来烯胺(colestyramine)微囊。其中包衣材料乙酸丁酸纤维素(CAB)具有粘膜粘附性，漂浮机制为碳酸盐，遇酸产生二氧化碳。结果表明，考来烯胺微囊分布在整个胃中，并表现出了较长的胃内滞留时间。经研究发现，影响泡腾生物粘附型系统的因素主要有：泡腾剂用量、聚合物的粘度及用量、溶出介质的pH、系统的密度和体积等。据报道，在制备以HPMC和卡波姆为主要材料的协同系统时，卡波姆的加入可能会对系统的漂浮
28、性能和释药性质不利17。但该协同系统相对于单独的漂浮型或生物粘附型胃内滞留系统来说更为可靠。1.5 目前葛根黄酮缓控释制剂产品研究1.5.1 葛根素的固体分散体采用固体分散技术，提高葛根素的体外溶出速率。分别以聚乙二醇6000，泊洛沙姆，聚乙二醇6000与聚氧乙烯(40) 硬脂酸酯(又名S240) 的熔合物(13) 为载体，熔融法制备葛根素的固体分散体。自微乳口服后，遇体液在胃肠道蠕动下自发分散成粒径在10-100 nm O /W型的微乳，克服了大分子药物通过胃肠道上皮细胞膜时障碍，可在胃肠道快速、均匀分布，提高了药物的溶出度和渗透率。也可经淋巴吸收，减少了胃肠黏膜的清除和首过效应，一定程度上
29、可防止药物被酶水解，也可降低个体吸收差异，适合于口服吸收差、生物利用度低的药物。1.5.2 葛根黄酮口服微丸制剂 葛根素是一种在水、油中溶解度都较小，在吐温280中溶解度较大的药物，制成自微乳制剂后，增加了葛根素的溶解度。于爱华18等研制的葛根素固体自微乳稳定性好，分散后形成的乳滴粒径小，分布均匀，自微乳化效率高。将葛根黄酮开发成口服微丸制剂，提高葛根黄酮的生物利用度，克服静注后继续滴注给药和频繁服用片剂的不便。微丸制剂19因具有生物利用度高、局部刺激小、很少受消化道输食物节律影响等优点日益受到中药制剂的关注。1.5.3 葛根总黄酮生物粘附片向大雄20等以羟丙基甲基纤维素 (HPMC) 和卡波
30、姆 (CP) 为生物粘附材料，制备了葛根总黄酮生物粘附片，并对影响片剂体外释放度的因素如HPMC用量、CP用量、致孔剂种类、乳糖用量、压片颗粒大小、介质pH 等进行了考察 ， 根据合适的因素条件制备出了葛根总黄酮生物粘附片，有效提高了其生物利用度，延长了其体内作用时间。这种方法制备出的葛根总黄酮生物粘附片不仅能延长药物在胃肠道的滞留时间，还能增加药物经粘膜吸收的接触面积，改变细胞膜的流动性，增加药物在小肠上皮细胞的穿透力。因此，该葛根总黄酮骨架缓释片给药系统具有促进药物的吸收、提高生物利用度的特点。1.5.4 葛根黄酮缓释胶囊 魏凤环、田景振21等以EC为骨架材料， HPMC为致孔剂，糊精为填
31、充材料，采用固体分散技术，研制长效的葛根黄酮缓释胶囊。此方法中固体分散体一方面能提高药物的分散度，增加其溶出速率，达到突释效果。另一方面，由于药物在载体辅料中高度分散，尤其在这种水不溶性辅料中，辅料将药物紧密的包裹在其中，减慢了药物的溶出从而使药物缓慢释放达到缓释的要求。1.5.5 葛根总黄酮骨架缓释片 彭海龙22等以HPMC和卡波姆(CP)联合应用为阻滞剂研制成的葛根总黄酮骨架缓释片可以达到每12 h给药一次的缓释效果， 提高起其生物利用度，减少给药次数，增加病人顺应性，增加血药浓度平稳性。1.5.6 葛根黄酮 EC-PEG载药系统 郭建平、孙其荣23等以乙基纤维素(EC)与聚乙二醇(PEG
32、)为载药系统制备了葛根黄酮EC-PEG载药系统，由于乙基纤维素、聚乙二醇及葛根黄酮三者的用量，乙基纤维素、聚乙二醇载药系统粒径大小，制备温度等对葛根黄酮的释放均有影响，郭建平、孙其荣等通过试验确定了当EC-PEG4000:混合载体EC-PEG:药物=5:0.4:1时制备的葛根黄酮载药系统可以达到30 min药物释放为65.51 %，10 min释放95.57 %的预期目的，达到理想的释药效果。1.6 结语葛根是一种尚未完全开发利用的天然野生植物资源，随着葛根的药理、药化、临床应用、有效成分提取、分离和检测技术等方面研究的不断深入，其药理功能、保健作用和应用价值将会日益引起人们的重视。值得强调的
33、是，葛根对严重威胁人类生命健康的心脑血管疾病具有重要的药理和治疗作用，在心脑血管系统疾病高发的今天，葛根将会更加引人注目。葛根资源丰富、价格低廉、无毒副作用，继续开展葛根在保健品中的应用研究，必将具有重要的社会意义和经济价值。第2章 实验部分2.1 前言 缓释制剂近来是一种研究较多的给药系统，它能够延长药物在胃肠道的滞留时间，促进难溶药物的吸收，进而提高生物利用度24。葛根黄酮在体内吸收不完全，其中葛根素在肠道内的吸收呈现一级吸收动力学过程，其吸收机制为被动扩散25。仍有50%以上以原型药物从粪便排出，生物利用度低，一般在服用2wk3wk甚至2mo3mo后才起效，为了提高其生物利用度，羟丙基甲
34、基纤维素(HPMC)和卡波姆(CP)为生物缓释材料，制备葛根总黄酮骨架粘附片，并对影响片剂体外释放度的因素如HPMC用量、CP用量、乳糖用量、压力大小等进行考察，以为葛根总黄酮缓释片的处方设计与筛选提供依据。2.2 仪器与试药 2.2.1 仪器TDF型单冲压片机(上海超亿制药机械设备有限公司)AL104电子天平(梅特勒托利多仪器有限公司，上海)RC806溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司)80目分样钢筛(浙江上虞市五四建材仪器厂)HANGPINGJA3003电子天平(上海天平仪器厂)SY2200T医用超声波清洗器(上海生源超声波仪器设备有限公司)UV-2501PC紫外分光光度计 (SHIM
35、ADZU)Wfz UV-2000型紫外可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公司，上海) 2.2.2 药品与试剂80%葛根黄酮(西安天一生物技术有限公司) 交联聚丙烯酸树脂(卡波姆，PVP934P)(广州伊高化工有限公司)羟丙基甲基纤维素K15M(上海赫力斯特化工有限公司)聚乙烯吡咯烷酮K30(沁阳成达贸易有限公司)葛根素对照品(纯度99.0%，南阳张仲景中药发展有限公司)乙醇(分析纯，天津市化学试剂三厂) 盐酸(分析纯，莱阳市双双化工有限公司)2.3 实验方法2.3.1 葛根总黄酮缓释片的制备2.3.1.1 5%PVP乙醇液的配制首先通过计算求出定量PVP934P所需要95%的乙醇(密度约791gm
36、L)的体积，定量称取PVP后放入干净的烧杯中，用量筒量取所需95%乙醇的量，倒入烧杯中充分混合后用保鲜膜密封保存待用。2.3.1.2 葛根总黄酮粘附片的制备方法 先对葛根总黄酮，HPMC，CP，乳糖分别过80目筛，再把葛根总黄酮，HPMC，CP，乳糖按一定比例用电子天平称取，混合过80目筛，喷洒5%的PVP乙醇溶液制软材，过16目筛制粒，在干燥箱中干燥，整粒并与占总量0.5%的硬脂酸镁进行总混，进行压片即可。2.3.1.3 葛根总黄酮粉末直接压片葛根总黄酮，HPMC， CP，乳糖分别过80目筛，然后按比例用电子天平分别称取，过80目筛混合后直接压片。2.4 标准曲线2.4.1 葛根素最大吸收波
37、长的确定采用紫外分光光度扫描仪对葛根素标准品进行波长扫描，以确定最大吸光度时的波长。选择人工胃液为基液，配制10.08g/mL的葛根素标准品溶液，用紫外双通道分光光度扫描仪进行波长扫描，扫描结果见下图：图2-1 葛根素紫外吸收测定图Fig.2-1 The UV spectra of puerarin 由以上图表可知在最大吸光度0.799处的吸收波长为250.10nm，确定在250nm处测定各溶液的吸光度。2.4.2 标准样的配制用电子天平精确称取葛根素0.0072g，置于100 mL容量瓶中，用人工胃液溶解并稀释至刻度，于20恒温水中超声2 0min，分别用移液管吸取标准液1.0，2.0，3.
38、0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0mL置于50ml容量瓶中，用人工胃液稀释至刻度，可得到不同浓度的标准溶液。见下表2-1，以人工胃液为空白，在250nm波长处用紫外分光光度计测定各浓度的吸光值，见表2-1及图2-1：表2-1葛根素标准曲线Table2-1 The standard curve of puerarin浓度(g/mL)吸光度1吸光度2吸光度3吸光度平均值1.440.1070.1070.1040.1062.880.2150.2140.2130.2144.320.3250.3210.3200.3225.760.4360.4370.4340.4367.200.5560.5460.
39、5480.5508.640.6530.6470.6480.64910.080.7560.7540.7550.75511.520.8680.8700.8660.868图2-2 葛根素标准曲线Fig.2-2 The standard curve of puerarin以上标准曲线经线性归化后方程为:Y=13.238*X+0.0264 R2 =0.9998 n=82.5 桨法测定溶出度的操作方法测定前，先对仪器装置进行调试，使桨叶底部距溶出杯的内底部25mm2mm。分别量取人工胃液(溶出介质)900mL，置各溶出杯中，加温，待溶出介质温度恒定在370.5，按照药典规定调节电动机转速100r/h，待其
40、稳定后，取葛根黄酮片6片，分别投入6个溶出杯中，自葛根黄酮片接触人工胃液起，立即计时；至规定取样时间，吸取溶出液5mL(取样位置应在桨叶顶端至液面的中点，距溶出杯内壁10mL处)，立即用适当的微孔滤膜滤过，自取样至滤过应在30秒内完成。取澄清滤液1mL，稀释至十倍，待用紫外分光光度计测定。第3章 结果与讨论3.1 药物溶出过程药物在人工胃液中的溶解释放过程见下图：图3-1 药物的溶出过程图3-1中上图为压出的葛根黄酮缓释片，下图为6小时后药物的照片，可见药物在溶出过程中主要是以骨架为基础上的扩散溶出。3.2 HPMC用量对释放度的影响保持葛根黄酮、 CP、以及乳糖的量不变，通过改变HPMC的量
41、，使葛根黄酮、CP、乳糖、HPMC四者分别以100:21.3:73.7:60，100:21.3:73.7:90，100:21.3:73.7:135的比例称取，过80目筛，喷洒5%PVP乙醇液，过16目筛制粒，在烘箱里60下干燥五十分钟，经整粒后加入硬脂酸镁进行总混，然后按以上方法压片，用电子天平对片剂称量，求质量差异，以桨法测定其溶出度实验，采用紫外分光光度计测定吸光度并通过葛根素的标准曲线方程计算其相应浓度，进而计算其累计释放度，见下表：表3-1 HPMC用量对药物累计释放度的影响Table3-1 Effect of the amount of HPMC on drug release 释放
42、时间/h不同比例葛根黄酮：CP：乳糖：HPMC100:21.3:73.7:60100:21.3:73.7:90100:21.3:73.7:13500000.50.11560.178850.1740210.217630.225440.1994320.383290.380990.280740.61910.568090.3762660.846930.703620.4730980.841710.771490.53143100.854970.851990.60669120.864570.886450.66867100：21.3:73.7：60100:21.3:73.7:90100:21.3:73.7:1
43、35图3-2 HPMC用量对药物累计释放度的影响曲线Fig.3-2 Effect curve of the amount of HPMC on drug release 由以上表图可知，随着HPMC量的增加，药物的释放度减少，但2小时内影响并不明显，这是因为缓释片在刚接触介质时，亲水凝胶水化速度慢，还没形成凝胶层，药物释放主要以表面药物脱落溶解为主；随着时间延长，HPMC的加入量对释放度的影响逐渐明显，因此时凝胶层已形成，随着HPMC的加入量增加，则形成的凝胶层增厚，药物穿透困难，故释药速率缓慢。同时由图表可知当主药：CP：乳糖：HPMC为100:21.3:73.7:90， 6小时内可以达到7
44、0.36%的累计释放度，12小时内可以达到很好的缓释效果且累计释放度可以达到88.6%。3.3 CP用量对释放度的影响保持葛根黄酮、HPMC、乳糖的量不变，通过改变CP的量，使葛根黄酮，乳糖，HPMC，CP分别以100:73.7:60:21.3，100:73.7:60:45，100:73.7:60:90的比例称取，过80目筛混合，加入5%的PVP乙醇溶液，过16目筛制粒，在烘箱里60下干燥五十分钟，经整粒后加入硬脂酸镁进行总混，然后按以上方法压片，按上述方法称重，并用桨法作其溶出度实验，并计算平均累计释放度，见以下表图：表3-2 CP用量对药物累计释放度的影响Table3-2 Effect o
45、f the amount of CP on drug release 释放时间/h不同比例葛根黄酮：乳糖：HPMC：CP100:73.7:60:21.3100:73.7:60:45100:73.7:60:9000000.50.11560.12220.1532510.217630.170530.180820.383290.24910.2539840.61910.533310.3928260.846930.746850.5096980.841710.830130.5995100.854970.880040.66904120.864570.888690.78838100:73.7：60：21.310
46、0:73.7:60:45100:73.7:60:90图3-3 CP用量对药物累计释放度的影响曲线Fig.3-3 Effect curve of the amount of CP on drug release 由表图可知，与HPMC的效果相似，药物中的CP在人工胃液中也是形成凝胶层，阻碍药物的溶出，从而达到缓释的效果。由表图可知CP形成的凝胶层比同量的HPMC形成的凝胶层更厚，阻滞药物溶出的能力更强。同时当主药：HPMC：乳糖：CP为100:60:73.7:45时药物6小时内可以达到74.7%的累计释放度，12小时内可以达到很好的缓释效果且累计释放度可以达到88.9%。3.4 乳糖用量对释放度的影响保持葛根黄酮、CP、HPMC的量不变，通过改变乳糖的量，使葛根黄酮、HPMC、CP、乳糖分别以100:60:21.