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1、A文档6 螺旋藻1.名称：螺旋藻中提取藻蓝蛋白2.提取方法: 将螺旋藻粉与中性磷酸盐缓冲液充分搅拌混匀,冻融2-4次离心得滤液冰冻除水,加硫酸铵,沉降5-8h,离心得蛋白粗品将蛋白溶于去离子水,透析冰冻除水,喷雾干燥得藻蓝蛋白3.规模:实施例1实施例2实施例3实施例4实施例5螺旋藻粉质量1kg10kg20kg1kg1kg磷酸钾缓冲液10kgpH:7.0100kgpH:7.3200kgpH:6.910kgpH:6.810kg搅拌时间2h2h3h3h1h冻融次数和离心时温度2次202次152次203次204次20冷冻速度4/h5/h6/h5/h5/h冷冻恢复温度至2020201518硫酸铵加入质量
2、400g4000g8000g400g400g沉降时间6h6h6h7h8h去离子水质量900g10kg65kg800g1100g透析袋分子截流量12kd12kd12ku12kd12kd透析时间12h12h12h10h11h含量58%63%55%56%58%7 螺旋藻1. 名称：一种螺旋藻蛋白及其提取方法2. 提取方法：螺旋藻粉悬浊液反复冻融并机械破碎得螺旋藻细胞破碎液用30%和50%硫酸铵分级盐析沉淀细胞破碎液得藻蓝蛋白粗提液1加入PEG20000和NaCl沉淀出藻蓝蛋白粗提物用磷酸盐缓冲液溶解粗提物得藻蓝蛋白粗提液2粗提液2用PEG20000/Na2SO4双水系萃取，下相经透析除盐可得藻蓝蛋白
3、精提液，冷冻干燥的藻蓝蛋白成品3. 规模：步骤 特征步骤1螺旋藻悬浊液比例：螺旋藻粉：盐酸缓冲液=0.04g-0.05g：1ml（0.01mol/L，pH：7）步骤2冻融破碎三次：4-10静置4-8h后-15 - -25冰冻，冰块绞碎，再次以以上温度反复冻融破碎直至三次，离心转速：6000-9000rpm，时间20-30min步骤3硫酸铵分级沉析：硫酸铵溶解至破碎液之30%饱和度，4-10静置12-15h，9000-12000rpm离心20-30min取上清，再加入硫酸铵之50%饱和度，4-10静置12-15h，9000-12000rpm离心20-30min取沉淀步骤4PEG20000-NaC
4、l组分：20%（w/v）PEG20000和0.8mol/L，4-10静置12-15h，离心速：9000-12000rmp时间：20-30min步骤5PEG20000/Na2SO4双水相体系：10.5%（w/w）PEG20000，5.9%（w/w）Na2SO4和0.2mol/L，分配平衡1-2h，5000-7000rpm离心20-30min分相步骤6透析除盐：将下相溶液置于透析袋透析30-40h，换5-7次透析袋成品特征羟自由基半清除率IC50=0.19mg/ml，DPPH半清除率IC50=0.296mg/ml，荧光强度与计量成比例，650nm有最大荧光发射峰11 节旋藻1. 名称：一种节旋藻蛋
5、白的分离纯化方法2. 提取方法：藻粉1kg在PBS中充分浸泡，混匀后常温避光放置24-72h离心得上清液上清液超滤浓缩，浓缩液加入甲壳胺使pH达到6.5-7.2，搅拌搅拌的混合液离心取上清液，加水进行超滤浓缩，超滤置换钠离子得纯化浓缩液浓缩液喷雾干燥，得药品级节旋藻蛋白3. 规模：步骤实施例1实施例2实施例3步骤120升PBS,常温放置：24h15升PBS，常温放置：24h30升PBS，常温放置：72h步骤2离心：离心力20000g，20min离心：离心力18000g，30min离心：离心力22000g，20min步骤4甲壳胺含量：0.29%，pH：6.9，搅拌20min甲壳胺含量：0.25%
6、，pH:6.5，搅拌15min甲壳胺含量：0.35%，pH:7.2，搅拌30min步骤5离心：20000g，20min离心：18000g，30min离心：22000g，20min步骤6超滤：加入浓缩液3倍体积的去离子水，再浓缩至原体积超滤：加入浓缩液3倍体积的去离子水，再浓缩至原体积超滤：加入浓缩液2倍体积的去离子水，再浓缩至原体积步骤7喷雾干燥条件：进风温度150，出风温度：70喷雾干燥条件：进风温度150，出风温度：90喷雾干燥条件：进风温度200，出风温度：90产品藻蓝蛋白纯度大于3.0，藻蓝蛋白含量大于61.5%,别藻蓝蛋白含量小于3%，其他蛋白含量小于2% 22 藻类1. 名称:从藻
7、类中分离制备食用级藻蓝蛋白的方法2. 提取方法：低温下超声波辅助提取技术处理藻类10.0g，用蛋白提取缓冲溶液提取藻类蛋白，得粗提液将粗提液pH调至酸性，静置，离心10min得上清液，调上清液pH至中性（将粗提液pH调至酸性，静置，膜过滤，得滤液）喷雾干燥，得食用级藻蓝蛋白3. 规模：步骤实施例1实施例2实施例3步骤1用磷酸盐缓冲体系配置pH7.0浓度0.15mol/L缓冲液100ml用醋酸盐缓冲体系配置pH6.0浓度0.05mol/L缓冲液10ml用乳酸盐缓冲体系配置pH8.0浓度0.10mol/L缓冲液100ml步骤2200w功率超声破碎5min，时间4s间隔2s50w功率超声破碎30mi
8、n，时间4s间隔2s100w功率超声破碎20min，时间4s间隔2s步骤35低温离心4低温离心6低温离心步骤4食用级磷酸溶液调pH至3.5-4.5，静置1h高速离心10min得上清液，沉淀加入1/4上清液体积的缓冲液离心后得上清液，与原上清液合并食用级柠檬酸溶液调pH至5.5-6.0，静置1h，上清液用膜孔径0.45m滤膜过滤食用级HCl溶液调pH至4.5-5.5，静置1.5h高速离心10min得上清液，沉淀加入缓冲溶液充分溶解，再次离心得上清液，与原上清液合并，调至中性产品干燥粉藻蓝蛋白纯度A620/A2800.70，回收率大于45%43 螺旋藻1. 名称：一种食用级藻蓝蛋白及其制备方法2.
9、 提取方法：螺旋藻粉破壁加入弱酸盐缓冲液浸提将浸提液固液分离，得上清液过滤上清液，得粗提液纯化粗提液，得浓缩液浓缩液喷雾干燥，得食用级藻蓝蛋白3. 规模：步骤实施例1实施例2实施例3步骤1藻粉：5公斤，4等量磷酸盐缓冲液，湿混时间3min，16目尼龙网摇摆颗粒机，研磨温度小于4藻粉：10公斤，4等量磷酸盐缓冲液，湿混时间3min，16目尼龙网摇摆颗粒机研磨，温度小于4藻粉：15公斤，4等量磷酸盐缓冲液，湿混时间3min，5目尼龙网摇摆颗粒机，研磨温度小于4步骤225升0.01-0.05M，pH6.0-7.0磷酸缓冲液，冷柜浸提8h以上50升0.01-0.05M，pH6.0-7.0磷酸缓冲液，冷
10、柜浸提8h以上75升0.01-0.05M，pH6.0-7.0磷酸缓冲液，冷柜浸提8h以上步骤35000转/min卧式离心，8000转/min管式离心8000转/min卧式离心，12000转/min管式离心6000转/min卧式离心，10000转/min管式离心步骤4200目袋式过滤，0.22微米平板过滤500目袋式过滤，0.45微米平板过滤500目袋式过滤，0.45微米平板过滤步骤5截留分子量300KD、100KD中空纤维超滤器，压力0.1Mpa，流量：20升/h截留分子量200KD、50KD中空纤维超滤器，压力0.1Mpa，流量：20升/h截留分子量300KD、100KD中空纤维超滤器，压力
11、0.02Mpa，流量：20升/h步骤6喷雾干燥机进风温度220，出风温度：90喷雾干燥机进风温度220，出风温度：90喷雾干燥机进风温度180，出风温度：60产品纯度大于1.0，食品级，藻蓝蛋白50%,别藻蓝蛋白10%,藻红蛋白2%,其他蛋白2%54 紫菜1. 名称:一种紫菜中食用级藻胆蛋白的制备方法2. 提取方法:紫菜磨碎至粉末(颗粒大小3-5mm),加入缓冲液,再加入纤维素酶和果胶酶酶解间断均质5-10min,离心取上清液加入硫酸铵,保留25%-60%硫酸铵饱和度之间的盐析物盐析物用超滤脱盐,离心去藻胆蛋白变形物，冷冻干燥得藻胆蛋白(藻红蛋白和藻胆蛋白)3. 规模:步骤实施例1实施例2步骤
12、1紫菜50g,固液比=1:20,pH6.8紫菜500g,固液比=1:15,pH7.0步骤2间断均质5min，4静置过夜。离心：4，8000rpm，中速，15min，取上清液间断均质20min，4静置过夜。离心：4，10000rpm，中速，10min，取上清液步骤3加硫酸铵至饱和度25%，离心：10000rpm，中速，15min，得上清液再加硫酸铵至饱和度60%，离心：12000rpm，中速，15min取沉淀加硫酸铵至饱和度25%，离心：12000rpm，中速，18min，得上清液再加硫酸铵至饱和度60%，离心：15000rpm，中速，15min取沉淀步骤4超滤膜分子截留量1400071 螺旋藻
13、 1. 名称：一种藻胆蛋白提取物的制备和应用2. 提取方法：螺旋藻粉在-20-4用反复冻融法破碎螺旋藻细胞壁得粗提物，离心取上清用质量分数50-60%硫酸铵沉淀粗提液得蛋白质粗提物采用双水向萃取纯化蛋白质粗提物，后超渗除盐，得藻蓝蛋白提取物溶液将其对S180肉瘤小鼠进行不同剂量给药3. 规模：步骤 特征步骤110g藻粉，150ml水搅拌，9000rpm离心10min步骤2加入约44g硫酸铵，4静置4h，9000rpm离心10min得沉淀步骤330ml纯水溶解，1.2kg双水相体系（4%PEG，15%KCl，10%pH7.0磷酸二氢钾-磷酸氢二钾水溶液），充分振荡后40静置2h取上相。用30KD
14、a的滤膜步骤4证明有良好的肿瘤抑制效果，并且对脾脏和胸腺没有明显的毒性。74 螺旋藻1. 名称：一种重金属污染螺旋藻的处理方法2.提取方法：用反复冻融、超声破碎等传统方法获受污螺旋藻藻蓝蛋白粗提液（上清液），用改进硫酸铵分级盐析技术和离子交换层析柱纯化获高纯度藻蓝蛋白用海藻酸钠固化破壁后剩余藻渣与粉碎花生壳（100：1）混合物，获螺旋藻渣生物吸附剂，用于污染水体的清洁处理3. 规模：步骤 特征步骤110000g离心30min，上清用20%硫酸铵固体盐析沉淀，搅拌30min，10000g离心10min，上清加硫酸钠固体大50%饱和度，搅拌10min静置2h，10000g离心10min，沉淀用0.
15、1M冰醋酸溶液pH4.8溶解，体积不超200ml，离心10000g，10min上清脱盐，用0.001M硫酸铵缓冲液稀释到100ml，加硫酸铵之饱和度25%，缓慢搅拌30min，10000g离心10min，上清加硫酸铵至饱和度40%，静置2h，10000g离心10min，沉淀用不超20ml（0.001M，pH7.0）溶解后快速脱盐，磷酸缓冲液预平衡，从0-0.25M的NaCl洗脱，速度2ml/min，收集A615/2804.0的组分，再次脱盐，后用聚乙二醇浓缩，冻干保存。步骤23%藻酸钠：藻渣：40目颗粒花生壳=200：100：1体积混合，匀速滴入0.05mol/LCaCl2溶液，搅拌，倾去溶液
16、，去离子水冲洗一次，加0.05mol/LCaCl2，平衡6h，倾去CaCl2溶液，去离子水清洗2次。80 蓝藻1. 一种蓝藻藻蓝蛋白的富集分离方法2. 提取方法：蓝藻破壁液的制备JDN-3型树脂富集蓝藻破壁液中藻蓝蛋白洗脱分离藻蓝蛋白JDN-3型树脂层析分离洗脱液脱盐后冷冻干燥，获一定纯度藻蓝蛋白3. 规模：步骤实施例1实施例2实施例3步骤1藻粉：去离子水1：10，-20冷冻4h，37融解反复冻融4次4800-18000r/min离心10-30min藻粉：自来水=1：2，-20冷冻4h，37融解反复冻融4次4800-18000r/min离心10-30min藻粉：自来水=1：5，-20冷冻4h，
17、37融解反复冻融4次4800-18000r/min离心10-30min步骤21L搅拌釜加入40g氯球和420mlN,N-二甲基甲酰胺，通氮气，100r/min分散溶胀4h，加多乙烯多胺200g和0.2g二氯化锡，加热至70搅拌4h，后用甲醇、四氢呋喃、去离子水依次洗涤至中性，1%硝酸银检测1L搅拌釜加入40g氯球和380ml1,4-二氯六环，通氮气，100r/min分散溶胀6h，加多乙烯多胺158g和0.08g氯化镁，加热至80搅拌10h，后用甲醇、四氢呋喃、去离子水依次洗涤至中性，1%硝酸银检测1L搅拌釜加入40g氯球和360ml吡啶，通氮气，100r/min分散溶胀8h，加多乙烯多胺200
18、g和0.05g氯化钴，加热至90搅拌4h，后用甲醇、四氢呋喃、去离子水依次洗涤至中性，1%硝酸银检测步骤3500ml具塞三角瓶加50ml蓝藻破壁液（蛋白质浓度：22.5mg/L）和10gJDN-3型树脂，密闭，振荡器32振荡6h转速100r/min，抽滤500ml具塞三角瓶加50ml蓝藻破壁液（蛋白质浓度：11.5mg/L）和5gJDN-3型树脂，密闭，振荡器25振荡8h转速100r/min，抽滤500ml具塞三角瓶加50ml蓝藻破壁液（蛋白质浓度：30.5mg/L）和10gJDN-3型树脂，密闭，振荡器30振荡6h转速100r/min，抽滤步骤4将JDN-3型树脂用0.25mol/L磷酸缓冲
19、液（含0.3mol/LNaCl）多次洗涤，透析脱盐30真空浓缩至蛋白含量35mg/ml将JDN-3型树脂用0.3mol/L磷酸缓冲液（含0.2mol/LNaCl）多次洗涤，透析脱盐30真空浓缩至蛋白含量32mg/ml将JDN-3型树脂用0.5mol/L磷酸缓冲液（含0.25mol/LNaCl）多次洗涤，透析脱盐30真空浓缩至蛋白含量32mg/ml步骤5湿法装柱，加量约柱床体积1/10藻蓝蛋白液，静置1h，用0.005、0.05、0.1、0.2、0.4mol/L磷酸缓冲液（含0.2mol/LNaCl）梯度洗脱，洗脱液透析脱盐，冷冻干燥湿法装柱，加量约柱床体积1/10藻蓝蛋白液，静置1h，用0.0
20、05、0.05、0.1、0.2、0.4mol/L磷酸缓冲液（含0.2mol/LNaCl）梯度洗脱，洗脱液透析脱盐，冷冻干燥湿法装柱，加量约柱床体积1/10藻蓝蛋白液，静置1h，用0.005、0.05、0.1、0.2、0.4mol/L磷酸缓冲液（含0.2mol/LNaCl）梯度洗脱，洗脱液透析脱盐，冷冻干燥82 螺旋藻1. 名称：一种水溶性螺旋藻藻胆蛋白的提取方法2. 提取方法:将10g螺旋藻原料浸入10倍水中，搅拌后在-20冷冻48h取出快速融冻，离心过滤离心液纯化、浓缩、喷雾干燥成螺旋藻藻胆蛋白，藻渣留存提取螺旋藻多糖3. 规模：无96 螺旋藻1. 名称：从螺旋藻中提取藻蓝蛋白、叶绿素和螺旋
21、藻多糖2. 提取方法：取新鲜螺旋藻，称重，离心洗涤，称重藻泥上清中加水，搅拌均匀，冻融2次第二次溶解，加水放置2-8h，离心得上清液和沉淀A沉淀A经乙醇索式提取，分为提取液和沉淀B沉淀A用于叶绿素锌钠盐的提取，上清液用于藻蓝蛋白的提取，沉淀B用于螺旋藻多糖的提取3. 规模：步骤实施例1实施例2步骤1新鲜螺旋藻6kg，离心洗涤，称重藻泥为2kg，上清加2L水，搅匀，冻融2次（20冷冻过夜室温溶解），二次溶解加入6L水，放置3h，离心新鲜螺旋藻10kg，离心洗涤，称重藻泥为4kg，上清加4L水，搅匀，冻融2次（20冷冻过夜室温溶解），二次溶解加入12L水，放置3h，离心步骤2上清液用6mol/L盐
22、酸调pH至4.2-4.5，搅拌0.5h后离心（4000rpm，15min）上清经分子量6k超滤膜超滤，再加4倍蒸馏水超滤，调pH至7.0后冷冻干燥上清液用5mol/L盐酸调pH至4.2-4.5，搅拌0.5h后离心（4000rpm，15min）上清经分子量6k超滤膜超滤，再加4倍蒸馏水超滤，调pH至7.0后冷冻干燥步骤3经复杂程序得叶绿素锌钠盐步骤4经复杂程序得螺旋藻多糖102 螺旋藻1. 一种螺旋藻提取液及其制备方法2. 提取方法：螺旋藻粉5g在无水酒精中浸泡，藻：酒精=1：2（重量比），室温下过夜，反复提取2-4次离心得提取过叶绿素的螺旋藻粉蒸馏水浸泡，藻水比1：2（重量比），室温搅拌过夜，
23、加复合酶1.5%(复合酶：藻=1.5：100（重量比）超声波反复提取2-3次，功率为900W，时间25min，离心取上清液，得藻蓝蛋白水溶液3. 规模：提取方法中已提出109 具潲微鞘藻1. 一种从具鞘微鞘藻中提取藻蓝蛋白的方法2. 提取方法：将硝酸钠（0.8-2.5g）、磷酸氢二钾（0.02-0.05g）、硫酸镁（0.06-0.09g）、氯化钙（0.02-0.05）、柠檬酸（0.004-0.008）、柠檬酸铁铵（0.004-0.008g）、乙二胺四乙酸二钠盐（0.001-0.003g）、碳酸钠（0.01-0.04g）、0.5-2ml微量元素溶液（每100ml蒸馏水加硼酸270-300mg、四
24、水氯化锰170-200mg、七水硫酸铜18-25mg、二水钼酸钠15-30mg、无水硫酸铜6-10mg）完全溶解配置成具鞘微鞘藻培养液具鞘微鞘藻置于培养液培养（一二三级培养），并制得具鞘微鞘藻粉从藻粉中提取藻蓝蛋白并纯化3. 规模：步骤 特征蛋白提取藻粉加入7-10倍重量的磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0），搅拌，置于-10- -20冰冻，20-30融溶，再冰冻，反复3-5次，3000-6000rpm离心10-15min集上清液的蛋白粗提液纯化冰浴在粗提液加入饱和度50-70%硫酸铵避光盐析20-40min，后在3-53000-6000rpm离心15-25min，沉淀用
25、一倍体积磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0）溶解，避光透析20-30h，离心上清用磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0）和0.1-0.3mol/LNaCl洗脱，冷冻干燥得纯化藻蓝蛋白110 纤细席藻1. 一种从纤细席藻中提取藻蓝蛋白的方法2. 提取方法：将硝酸钠（0.8-2.5g）、磷酸氢二钾（0.02-0.05g）、硫酸镁（0.06-0.09g）、氯化钙（0.02-0.05）、柠檬酸（0.004-0.008）、柠檬酸铁铵（0.004-0.008g）、乙二胺四乙酸二钠盐（0.001-0.003g）、碳酸钠（0.01-0.04g）、0.5-2ml微量元素
26、溶液（每100ml蒸馏水加硼酸270-300mg、四水氯化锰170-200mg、七水硫酸铜18-25mg、二水钼酸钠15-30mg、无水硫酸铜6-10mg）完全溶解配置成具鞘微鞘藻培养液纤细席藻置于培养液培养（一二三级培养），并制得纤细席藻藻粉从藻粉中提取藻蓝蛋白并纯化3.步骤 特征蛋白提取藻粉加入7-10倍重量的磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0），搅拌，置于-10- -20冰冻，20-30融溶，再冰冻，反复3-5次，3000-6000rpm离心10-15min集上清液的蛋白粗提液纯化冰浴在粗提液加入饱和度50-70%硫酸铵避光盐析20-40min，后在3-53000-
27、6000rpm离心15-25min，沉淀用一倍体积磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0）溶解，避光透析20-30h，离心上清用磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0）和0.1-0.3mol/LNaCl洗脱，冷冻干燥得纯化藻蓝蛋白113 1. 名称：一种纯化快速分离R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白的方法2. 提取方法：红藻经冻溶和低离子强度溶胀提取R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白硫酸铵沉淀初步纯化，后用阴离子交换层析吸附富集R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白阴离子交换层析分步洗脱大量制备得高纯度R-藻红蛋白、R-藻蓝蛋白3. 规模：步骤实施例1实施例2步骤1取多管藻10g，加2
28、0mM醋酸缓冲溶液（pH5.8）10ml，反复冻融，悬液410000rpm离心15min，取上清即粗提液步骤2粗提液加入硫酸铵固体至浓度60%（w/v）放4h410000rpm离心15min，沉淀溶于20mM醋酸缓冲液（pH5.6），后用20mM醋酸缓冲液（pH5.6）透析，集透析液粗提液加入硫酸铵固体至浓度500%（w/v）放4h410000rpm离心20min，收集沉淀沉淀步骤3将用20mM醋酸缓冲液（pH5.6，含50mMNaCl）平衡过的阴离子交换柱加入透析液，用20mM醋酸缓冲液（pH5.6含50mMNaCl）冲洗阴离子交换柱，先用20mM醋酸缓冲液（pH5.0，含50mMNaCl）
29、洗脱，再20mM醋酸缓冲液（pH4.0）冲洗进行洗脱117 蓝藻1. 名称：从蓝藻中快速分离纯化C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白的方法2. 提取方法：冻融和低离子溶胀快速提取C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白经硫酸铵沉淀进行初步纯化利用琼脂糖凝胶FF离子交换层析技术，用恒定离子强度、pH梯度的缓冲液进行洗脱得高纯度C-藻蓝蛋白和异藻蓝蛋白3. 规模：步骤实施例1实施例2步骤1螺旋藻按重量体积比1：1加入液氮研磨，后按重量体积比1：1加入0.02mol/L磷酸缓冲液（pH5.8），48000rpm离心15min得粗提液集胞藻按重量体积比1：1加入液氮研磨，后按重量体积比1：1加入0.02mol/L磷酸缓冲液（pH
30、6.0），410000rpm离心10min得粗提液步骤2加入硫酸铵固体至浓度为60%（w/v）放置5h，410000rpm离心10min得沉淀，溶于20mM磷酸缓冲液（pH5.8），透析得透析液加入硫酸铵固体至浓度为55%（w/v）放置6h，48000rpm离心10min得上清液步骤3取2ml溶液经离子交换色谱柱（20mmol/L醋酸缓冲液（pH5.6含0.05mol/LNaCl）预平衡）后用20mmol/L醋酸缓冲液（pH5.6含0.05mol/LNaCl）洗脱后再用20mmol/LpH5.8和pH4.0各100ml洗脱，速度1mL/min取2。5ml溶液经离子交换色谱柱（20mmol/L醋
31、酸缓冲液（pH5.8含0.05mol/LNaCl）预平衡）后用20mmol/L醋酸缓冲液（pH5.6含0.05mol/LNaCl）洗脱后再用20mmol/LpH5.8和pH4.0各100ml洗脱，速度1.2mL/min118 爪哇伪枝藻1. 名称：一种从爪哇伪枝藻中提取藻蓝蛋白的方法2.提取方法：磷酸氢二钾（0.02-0.05g）、硫酸镁（0.06-0.09g）、氯化钙（0.02-0.05）、柠檬酸（0.004-0.008g）、柠檬酸铁铵（0.004-0.008g）、乙二胺四乙酸二钠盐（0.001-0.003g）、碳酸钠（0.01-0.04g）、0.5-2ml微量元素溶液（每100ml蒸馏水加
32、硼酸270-300mg、四水氯化锰170-200mg、七水硫酸铜18-25mg、二水钼酸钠15-30mg、无水硫酸铜6-10mg）完全溶解配置成爪哇伪枝藻培养液爪哇伪枝藻置于培养液培养（一二三级培养），并制得爪哇伪枝藻粉从藻粉中提取藻蓝蛋白并纯化3.规模：步骤 特征蛋白提取藻粉加入7-10倍重量的磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0），搅拌，置于-10- -20冰冻，20-30融溶，再冰冻，反复3-5次，3000-6000rpm离心10-15min集上清液的蛋白粗提液纯化冰浴在粗提液加入饱和度50-70%硫酸铵避光盐析20-40min，后在3-53000-6000rpm离心
33、15-25min，沉淀用一倍体积磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0）溶解，避光透析20-30h，离心上清用磷酸缓冲液（0.05-0.1mol/LpH6.0-8.0）和0.1-0.3mol/LNaCl洗脱，冷冻干燥得纯化藻蓝蛋白123 螺旋藻1. 名称：从螺旋藻中提取藻蓝蛋白的技术2. 提取方法：将含水分的螺旋藻置于0以下冻结成冰，后取出解冻，破壁析出藻蓝蛋白3. 规模：步骤实施例1实施例2步骤1取含水率为95%新鲜螺旋藻0冷冻结冰，保持10min以上，取出让自然解冻，完全解冻后藻蓝蛋白析出干燥螺旋藻浸泡使含水率达50-95%，0冷冻结冰，保持10min以上，取出让自然解冻
34、，完全解冻后藻蓝蛋白析出1271. 名称：同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法2. 提取方法:制备藻胆蛋白提取物羟基磷石灰装柱及平衡层析分别洗脱藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白洗脱液浓缩、脱盐及冷冻干燥最终获得藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白3. 规模步骤实施例1实施例2实施例3羟基磷石灰的制备波棒搅拌下降2M磷酸氢二钾和2M氯化钙溶液等体积混合，以3ml/min滴入容器，连续搅拌并滴加2M KOH到pH11.0搅拌均匀到室温时pH为6.0再加2M KOH是pH稳定在6.7，用0.001M磷酸缓冲液（含0.1M氯化钠，pH6.7）乳洗新制成的羟基磷灰石，平衡用于层析波棒搅拌下降1.5M磷酸氢二钾和1.5M氯化钙溶液等体
35、积混合，以5ml/min滴入容器，连续搅拌并滴加1.5M KOH到pH11.0搅拌均匀到室温时pH为6.0再加1.5M KOH是pH稳定在6.9，用0.0015M磷酸缓冲液（含0.15M氯化钠，pH6.9）乳洗新制成的羟基磷灰石，平衡用于层析从市场购买的羟基磷灰石商品用0.002M磷酸缓冲液（含0.2M氯化钠，pH7.0）浸泡一天，用0.002M磷酸缓冲液（含0.2M氯化钠，pH7.0）平衡购买并浸泡过的羟基磷灰石，以用于层析步骤1螺旋藻粉溶于蒸馏水（含0.10M氯化钠）螺旋藻：水=1：5搅拌，一次性冻融（-10，5h）后4000转/min离心20min取上清螺旋藻粉溶于蒸馏水（含0.15M氯
36、化钠）螺旋藻：水=1：10搅拌，一次性冻融（-20，8h）后6000转/min离心30min取上清螺旋藻粉溶于蒸馏水（含0.20M氯化钠）螺旋藻：水=1：15搅拌，一次性冻融（-30，10h）后8000转/min离心40min取上清步骤2将羟基磷石灰混合液加入层析管，沉淀后用0.001M磷酸缓冲液（含0.1M氯化钠，pH6.7）平衡洗脱3次，待露出表面时加入蛋白粗提物量为羟基磷灰石柱长1/3将羟基磷石灰混合液加入层析管，沉淀后用0.0015M磷酸缓冲液（含0.15M氯化钠，pH6.9）平衡洗脱3次，待露出表面时加入蛋白粗提物量为羟基磷灰石柱长1/2将羟基磷石灰混合液加入层析管，沉淀后用0.00
37、2M磷酸缓冲液（含0.2M氯化钠，pH7.0）平衡洗脱3次，待露出表面时加入蛋白粗提物量为羟基磷灰石柱长2/3步骤3蛋白被完全吸附后，加0.001M磷酸缓冲液（pH6.7含0.1M氯化钠）洗脱，再加0.025磷酸缓冲液（pH6.7，含0.1M氯化钠）洗脱收集藻蓝蛋白，后再加0.045M磷酸缓冲液（pH6.7含0.1M氯化钠）洗脱收集别藻蓝蛋白蛋白被完全吸附后，加0.0015M磷酸缓冲液（pH6.9含0.15M氯化钠）洗脱，再加0.03磷酸缓冲液（pH6.9，含0.15M氯化钠）洗脱收集藻蓝蛋白，后再加0.05M磷酸缓冲液（pH6.9含0.15M氯化钠）洗脱收集别藻蓝蛋白蛋白被完全吸附后，加0.
38、002M磷酸缓冲液（pH7.0含0.2M氯化钠）洗脱，再加0.035磷酸缓冲液（pH7.0，含0.2M氯化钠）洗脱收集藻蓝蛋白，后再加0.06M磷酸缓冲液（pH7.0含0.2M氯化钠）洗脱收集别藻蓝蛋白步骤4收取的蛋白与-20分别冷冻保存，用40%饱和度硫酸铵分别沉淀，沉淀后用透析进行脱盐后冷冻干燥得两种蛋白粉末收取的蛋白与-20分别冷冻保存，用50%饱和度硫酸铵分别沉淀，沉淀后用透析进行脱盐后冷冻干燥得两种蛋白粉末收取的蛋白与-20分别冷冻保存，用60%饱和度硫酸铵分别沉淀，沉淀后用透析进行脱盐后冷冻干燥得两种蛋白粉末142 水华蓝藻1. 名称：一种水华蓝藻制备藻蓝蛋白的方法2. 提取方法：
39、鲜藻脱水后加入缓冲液，混匀冰冻取出于室温下融溶，冻融3-5次，板框过滤超滤纯化，用截留分子量为1000-20万道尔顿的中空纤维超滤器静置-澄清纯化经过超滤纯化的藻蓝蛋白的部分，同时进行浓缩，浓缩的部分在一定温度保存羟基磷灰石层析纯化3. 规模：步骤 特征步骤1脱水后，鲜藻：磷酸缓冲液重量体积比1：1-1：10比例加0.05M-0.2M磷酸缓冲液（pH5.0-9.0）混匀，-15冰冻，取出置20或22或25融溶，冻融4次板框过滤得粗提液步骤2依次通过孔径2-3m和0.45-0.22m微滤器压力0.02-0.1Mpa以下。再进行超滤，流量为1-5升/min，超滤纯化后的藻蓝蛋白浓缩步骤3将浓缩液在
40、3-5保藏2-3天，出现沉淀，后经1000-5000g离心或过滤处理步骤4将静置-澄清纯化工艺处理的材料上羟基磷灰石柱，使柱1/3着染，后用0.001M-1M磷酸缓冲液分步洗脱，按磷酸缓冲液浓度高低选用4-8种浓度洗脱液，每种缓冲液剂量为1-3个柱体积146 蓝藻、蓝绿藻1. 名称：一种大量提取藻蓝蛋白的方法2. 提取方法：螺旋藻培养并得新鲜藻泥、鱼腥藻和集胞藻培养得藻泥，微生物培养得上清液将各种菌的上清液冲洗藻泥，加至菌液和藻泥体积比约为2：1，密封静置，24h后蛋白析出，得粗提物所得粗提物用HITACHI20PR-520离心机5000g离心，取上清（此时蛋白纯度可达1.3-1.5）用60%
41、饱和度硫酸铵沉淀，上清液通过羟基磷石灰层析和Sephadex G-100柱层析的纯度4.8-5.2的试剂级藻蓝蛋白（另一方法不同之处在于刚开始将云南产香峰牌100%藻粉500g与各种菌液5000ml混合，静置25左右，0.5h后，蛋白析出，其他相同）3. 规模：不同固氮菌提取藻蓝蛋白的优劣不同，日勾维肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、产酸克雷伯氏菌都是不错的选择。147 1.名称：重组藻胆蛋白及其制备方法和应用2.重组方法：模板DNA的提取，用PCR（聚合酶链式反应）技术从中提取出蛋白基因基因的克隆与测序，重组蛋白在大肠杆菌或毕赤酵母或海带中表达。3.规模：实施例特征利用PCR技术从蓝藻中克隆别藻蓝蛋白
42、基因1.模板DNA的提取 2.PCR引物及其反应蛋白基因的克隆和测序利用PCR技术从蓝藻中克隆藻蓝蛋白基因利用PCR技术从红藻波登仙菜中克隆藻红蛋白基因利用PCR技术从原绿球藻中克隆藻红蛋白基因亚基基因重组藻胆蛋白在大肠杆菌中表达1.表达麦芽糖结合蛋白与藻胆蛋白融合蛋白载体的构建 2.镭普克的生产 3.表达6His tag-APC载体的构建 4.6His tag-APC的生产 5.表达6His tag-PE载体的构建与重组蛋白的生产重组藻胆蛋白亚基在大肠杆菌中表达1.表达麦芽糖结合蛋白与藻胆蛋白亚基融合蛋白载体的构建及重组蛋白的生产 2.表达6His tag-APC载体的构建及重组藻胆蛋白的生
43、产 重组藻胆蛋白亚基在大肠杆菌中表达1.藻胆蛋白亚基基因的克隆 2.表达麦芽糖结合蛋白与藻胆蛋白亚基融合蛋白载体的构建及重组蛋白的生产重组藻胆蛋白在毕赤酵母中的高效表达1.藻胆蛋白基因的定点突变 2.藻胆蛋白基因的毕赤酵母表达载体的构建 3.重组藻胆蛋白在毕赤酵母中小规模表达藻胆蛋白基因在海带中的表达1.表达载体的构建 2.转化海带 3.藻胆蛋白基因在海带孢子体中稳定表达重组藻胆蛋白的抗肿瘤作用静脉注射镭普克能显著抑制S-180实体瘤的生长，剂量从4.65-18.6mg/kg.d时抑瘤率从7.9%-61.9%重组藻胆蛋白提高白细胞数量作用CY(环磷酰胺)可抑制白细胞的数量,HAPC（重组藻胆蛋
44、白可对抗CY的抑制作用）151 节旋藻1. 名称：节旋藻藻蓝蛋白基因的启动子及其制备方法2. 制备方法：根据扩增得到的藻蓝蛋白操纵子编码亚基基因的部分序列设计引物，首先向亚基的上游序列移动（由两次PCR反应组出成，两次反应条件：94预变性5min，94变性60s，50复性60s，72延伸80s，30个循环，循环结束后72延伸10min。）最终得高效特异性的藻蓝蛋白和亚基基因启动子向亚基下游序列扩增的反应步移结果得cpcA基因的全序列将上述序列全部拼接的启动子及操纵子序列将启动子连接到启动子探测载体-绿色荧光蛋白质粒，用常规从超声转化法转到节旋藻中24h后观察荧光情况3. 规模：提取方法中已提到
45、163 海水螺旋藻1. 海水藻蓝蛋白的制备方法2. 提取方法：采收藻体，冲洗干燥，将干品加入含食品稳定剂、糖类、无机盐类、pH调节剂保护成分的水溶液中混合液在0-50搅拌提取，去残渣得蛋白粗提物上清液，纯化（上清液脱盐浓缩，加入用0.015-0.05M磷酸缓冲溶液平衡过的色谱分离材料，使溶液的浓度和pH参数刚好使C-藻蓝蛋白不被吸附，搅拌，去羟基磷灰石提取液加入硫酸铵搅拌，使沉淀，离心收集沉淀，超滤脱盐）脱盐溶液超滤浓缩，得蛋白液态制品，将浓缩液低温冷冻干燥或喷雾干燥得蛋白固体制品固体进一步纯化（加入用0.001-0.01M磷酸缓冲溶液平衡过的羟基磷灰石混合，除上清液，收集色谱材料，加入0.015-0.05M磷酸缓冲液浸泡，所得蛋白纯度接近或达到生化试剂标准）3. 规模：步骤实施例1实施例2实施例3实施例4步骤1螺旋藻接种于盐度60%的自然海水培养基得藻泥，30-60低温烘干得干燥210g，加5升0.005M磷酸缓冲液（含1%NaCl50ppm苯甲酸钠100ppm甘油）螺旋藻接种于盐度35%的人工海水培养基得藻泥，阴干得干燥1.8公斤，加20升0.04M磷酸缓冲液（含5%