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1、病理技术的新进展放射自显影技术（autoradiograph)是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影术用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布与代谢径路，包括定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素（如14C和3H）或放射性同位素标记的化合物导入生物体内（注入动物体内或加入培养基中），间隔一定时间取材,制成标本（如切片或涂片），在暗室中涂上液体原子核乳胶（卤化银乳胶），置暗处经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。数日后再经显影、定影处理，
2、或经染色后光镜观察，在放射性同位素或其标记物存在的部位，溴化银被还原成黑色的微细银颗粒，即可得知标本中标记物的准确位置和数量，放射自显影的切片还可再用染料染色，这样便可在显微镜下对标记上放射性的化合物进行定位或相对定量测定。这种技术与电镜样品处理，则为电镜放射自显影术(electron microscope autoradiography)。 在生物学研究中，常用的放射性同位素主要是能量低、射程短、电离作用强的射线如3H，14C，32P，35S，125I，45Ca，等或其它化合物。放射自显影优点：定位精确，灵敏度高，分辨率好，能保存相当长时间；操作简便，无需复杂设备；可供定量研究和双同位素示踪
3、；将形态、机能和代谢地研究统一起来；研究某些大分子在体内地动态变化过程。 原位杂交原位杂交的概念原位杂交是用标记的核酸探针与细胞和组织切片中的核酸进行杂交并对其进行检测的方法。即使用DNA或者RNA探针来检测与其互补的另一条链在细菌或其他真核细胞中的位置。分细胞原位杂交和组织切片原位杂交。原位杂交技术(In situ hybridization，ISH)是在研究DNA分子复制原理的基础上发展起来的，由分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术。原位杂交的发展简史ISH始于20世纪60年代。由于分子生物学技术的迅猛发展，特别是20世纪70年代末到80年代初，分子克隆、质粒和噬菌体DN
4、A的构建成功，为原位杂交技术的发展奠定了深厚的技术基础。原位杂交的基本原理两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能通过氢键结合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 双键分子，应用已知碱基序列并具有标记物的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、荧光素生物素、地高辛等非放射性物质)RNA或DNA片段作为核酸探针，与组织切片或细胞内的待测核酸互补配对，结合成专一的核酸杂交分子，通过标记物的显示（例如放射自显影等方法），在光镜或电镜下观察目的mRNA或DNA的存在与定位。为显示特定的核酸序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、
5、有与探针结合的标记物。原位杂交的实践应用原位杂交技术可在原位研究和检测细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达，进一步从分子水来探讨细胞的功能表达及其调节机制。随着相继建立的生物素和地高辛等非放射性标记技术，并结合应用免疫组织化学的显示技术，使原位杂交技术迅速推广应用于基础理论研究和临床诊断。如在肝炎病毒，肾综合征出血热病毒，人乳头瘤病毒，结核菌等检测中该法被迅速推广应用。由于其存在的不足，国外用微波加热技术进行改良，在节省杂交时间和蛋白酶K方面取得了良好的效果。经研究表明，微波加热的原位杂交可以取代普通原位杂交而用于石蜡标本的基因表达检测。目前在国内已逐步开展荧光标记原位杂交技术，能在荧光显微镜下
6、更加简便，清晰地观察结果。原位杂交的优点和缺点优点：(1)高特异性及灵敏性：抗原和抗体之间的特异识别及结合的特点，决定了荧光原位杂交的高度特异性，同时使检测的结果具有很高的灵感度；原位杂交技术因其高度的灵敏性和准确性而日益受到许多科研工作者的欢迎，并广泛应用到基因定位、性别鉴定和基因图谱的构建等研究领域。(2)结果直观：其结果在荧光显微镜下可直接观测。缺点：(1)费时：实验步骤较多，周期长；(2)成本高：蛋白酶K需要量大，所以成本较高。几种原位杂交技术1、基因组原位杂交技术基因组原位杂交(Genome in situ hybridization，GISH)技术是20世纪80年代末发展起来的一种
7、原位杂交技术。它主要是利用物种之间DNA同源性的差异，用另一物种的基因组DNA以适当的浓度作封阻，在靶染色体上进行原位杂交。GISH技术最初应用于动物方面的研究。2、荧光原位杂交技术荧光原位杂交(Fluorescence in situ hybridization，FISH)技术是20世纪80年代末在已有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性DNA分子原位杂交技术。FISH的基本原理是利用荧光标记（取代了同位素标记）的核酸片段为探针，将DNA(或RNA)探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或DNA纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单克隆抗体与探针分子特异性结合来检
8、测DNA序列在染色体或DNA纤维切片上的定性、定位、相对定量分析。FISH技术检测时间短，检测灵敏度高、安全无污染、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点, 不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核。同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术，已广泛应用于染色体的鉴定、基因定位和异常染色体检测等领域。3、多彩色荧光原位杂交技术多彩色荧光原位杂交(Multicolor fluorescence in situ hybridization，mFISH)是在荧光原位杂交技术的基础上发展起来的一种新技术，它用几种不同颜色的荧光素单独或混合标记的探针进行原位杂交，
9、能同时检测多个靶位，各靶位在荧光显微镜下和照片上的颜色不同，呈现多种色彩，因而被称为多彩色荧光原位杂交。它克服了FISH技术的局限，能同时检测多个基因，在检测遗传物质的突变和染色体上基因定位等方面得到了广泛的应用。4、原位PCR原位PCR技术是常规的原位杂交技术与PCR技术的有机结合，即通过PCR技术对靶核酸序列在染色体上或组织细胞内进行原位扩增使其拷贝数增加，然后通过原位杂交技术进行检测，从而对靶核酸序列进行定性、定位和定量分析。原位PCR技术大大提高了原位杂交技术的灵敏度和专一性，可用于低拷贝甚至单拷贝的基因定位，为原位杂交技术的发展提供了更广阔的发展前景。PCRPCR的概念： 聚合酶链式
10、反应(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一种在体外由引物介导的DNA酶促合成反应，也叫基因扩增技术。是在体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术，即无细胞分子克隆技术。它的出现使人们对微量甚至单个细胞DNA的分析成为可能，并且表现出了前所未有的敏感性和特异性。聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）是利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的特性，在离体条件下模仿细胞内DNA复制过程，用两种与相反链杂交并附着于靶DNA两侧的寡核苷酸引物经酶促反应合成特异的DNA片段的体外方法。包括模板变性、引物退火和用DNA聚合酶延伸退火引物在内的重复循
11、环，使末端被引物5端限定的特异性片段成指数形式积累。这种由Mullis发现的方法最早被美国Cetus公司的人类遗传学部的一个小组用于球蛋白DNA的扩增及镰刀形红细胞贫血病的产前诊断。近十几年来，PCR技术得到了迅速发展，并日益完善，在医学生物科学研究的许多不同领域中简化了分析工作。该技术在分子生物学、医学、法医学、考古学等领域中都有重要的应用价值，并且对已建立的基因克隆、DNA序列分析等现代分子生物学技术的发展起到巨大的推动作用。PCR的基本原理：类似于DNA的体内复制。首先待扩增DNA模板加热变性解链，随之将反应混合物冷却至某一温度，这一温度可使引物与它的靶序列发生退火，再将温度升高使退火引
12、物在DNA聚合酶作用下得以延伸。这种热变性-复性-延伸的过程就是一个PCR循环，PCR就是在合适条件下的这种循环的不断重复，前一轮扩增的产物又充当下一轮扩增的模板，目的DNA以2的指数方式积累，使皮克水平的起始物达到g数量级。PCR的应用：近2O年来，分子生物学突飞猛进，也开拓了分子病理学领域。分子病理学应用分子生物学一些基本技术，结合病理形态学的特点，将核酸原位分子杂交、聚合酶链反应(PCR)、核酸测序等应用于病理研究和诊断。PCR技术已广泛应用于分子生物学各个领域，并成为分子病理学的一个强有力的手段，被列为20世纪90年代生物学技术十大热点之首，已被广泛应用于分子克隆、DNA序列分析、癌相
13、关基因的检测、遗传病和分子病理诊断等多个领域。它不仅可用于基因的分离、克隆和核酸序列的分析，还可用于突变体、重组体的构建、基因表达调控研究、遗传病、传染病的诊断及肿瘤发生机理的探讨等。如应用PCR技术检测瘤细胞的基因重排诊断淋巴瘤，检测相关病毒、细菌等诊断结核、SARS等感染性疾病。荧光定量PCR技术利用荧光素标记探针，PCR扩增时会发出荧光，通过检测荧光的强度可实时(real time)监测PCR反应，定量准确，易于标准化。该技术解决了PCR产物的污染和PCR模板定量的问题，在临床观察患者病情发展及预后，判断药物疗效等方面的用途和前景十分广阔。在肿瘤细胞基因组DNA的PCR实验中，应用显微切
14、割技术在显微镜下将单个肿瘤细胞与正常组织细胞或瘤旁细胞中分离出来，避免非肿瘤细胞基因组DNA的干扰。新鲜组织和福尔马林固定石蜡包埋的病理组织切片或细胞涂片、培养细胞、血、痰液、乳汁和各种体液及尿液均可应用PCR技术进行DNA水平的相关研究。PCR技术的发展：RT-PCR，即 Reverse transcript反转录PCR。 原位PCR(In situ PCR)技术是继PCR技术之后又发展起来的一门新技术。是将PCR的高效扩增与原位杂交技术的细胞定位相结合，在组织切片或细胞涂片上原位对特定的DNA或RNA进行高效扩增再用特异性的探针作原位杂交检测。既能检出细胞内单拷贝及低拷贝的核酸序列，又能对
15、含靶序列的组织细胞进行形态学分析。极大提高了在细胞原位检测核酸及抗原的敏感性。原位逆转录PCR(In situ RT-PCR) 是将逆转录反应和PCR结合，检测细胞内低拷贝mRNA以mRNA为模板合成cDNA，再以cDNA为模板在DNA聚合酶作用下进行扩增，rTth逆转录酶具有分别依赖RNA或DNA的耐热I)NA聚合酶活性。可同时执行RT和PCR，使反应时间缩短。实时荧光定量PCR：开始阶段的PCR只局限于DNA的定性研究，随着科技的发展，定量PCR应运而生。然而，其精确性与特异性也不是绝对的，直到实时荧光定量PCR的出现，人们才真正实现了PCR从定性到定量的飞跃。 基本原理：聚合酶链式类似体
16、内的DNA复制过程，主要是利用DNA聚合酶依赖DNA模板的特性，在一对引物诱发聚合酶反应。整个过程包括模板变性、模板与引物的结合和引物延伸3个步骤。而实时荧光定量PCR是在常规的PCR反应体系中加如入荧光标记探针，通过荧光信号积累实时检测整个PCR进程，来实现其定量功能。实践应用：实时荧光定量PCR在肿瘤学方面应用较广泛。(1)检测微量残渣疾病：目前血液肿瘤患者的高度复发是痊愈的一个主要障碍，而微量残渣疾病的检测是提供血液肿瘤患者有效治疗方案的关键一步，可以根据不同患者在分子水平的不同反应来指导个性化治疗；(2)检测单核苷酸多态性(SNP)：单核苷酸是第3代遗传标记，即每一个核苷酸在任何一代人
17、群中大约每1lo9个个体就会发生一次变异，此种方法可以检测其差异，将在未来分子诊断中起重要的作用；(3)监测基因表达：实时荧光定量PCR技术即可以定量又可以定性的监测基因表达的变化，从而确定其是否有差异性表达；(4)甲基化的研究：实时荧光定量PCR在检测DNA甲基化方面更具有优越性，它避免了反应后的凝胶电泳，因而增加了灵敏度和通量；(5)实时荧光定量PCR技术还可以与显微镜切割技术或石蜡固定标本提取DNA技术相结合，使从石蜡固定的少量标本中提取完整的DNA并进行检测基因表达成为可能。优点和缺点：优点：(1)高特异性与准确性：由于其对模板DNA的定量是在PCR反应的指数增长期进行的，所以准确性很
18、高。而不同的模板DNA需要不同的探针，则决定了它的高特异性；(2)污染小：一般PCR产物都需要通过凝胶电泳，染色剂染色，紫外线观察，不仅费时费力，并且染色剂对人体有害，且过多的实验操作大大增加了污染的机会，而如果利用实时荧光定量PCR整个过程只需在加样时打开一次盖子，其后的过程完全是封闭的，并且不需要凝胶电泳PCR后操作，这样就大大减少污染的机会，高灵敏度、高通量，能够同时检测多样样品。 缺点：实时荧光定量PCR最大的缺点在于价格昂贵。流式细胞技术(FCM)基本概念：流式细胞仪(Flow Cytometer):是集光电子物理，光电测量，计算机，细胞荧光化学，单抗技术为一体的高科技细胞分析仪。流
19、式细胞术(Flow Cytometry):是利用免疫或荧光细胞化学的原理，以激光激发荧光，结合计算机处理信息和快速分拣系统进行定量检测。利用流式细胞仪对处于快速流动的单细胞或生物颗粒进行多参数、快速（每秒可达1000-10000个）的定量分析和分选（纯度可达99%以上）的检测技术。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数，与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。优点：1.测量速度快2. 高通量：一次可以检查上万个细胞，PCR的测量是以整个样品为单位，FCM的测量是以样品中的每一个细胞为单位。 3.可进行多参数测量4.是一门
20、综合性的高科技方法（ FCM综合了光学，电子学，流体力学，细胞化学，免疫学，激光和计算机等多门学科和技术）；5.既是细胞分析技术，又是精确的分选技术。局限性：1. 需要新鲜没有固定过的样品；2. 样品采集和样品制备的过程中可能有选择性的细胞丧失；3. 得到的形态学信息很有限。工作原理：将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过检测区域。流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在
21、样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号，再转换为数字信号通过计算机处理、分析。可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。应用范围：可用于白血病的分型、肿瘤细胞染色体的异倍性测定，以及免疫学研究，并已开始用于细菌鉴定，病毒感染细胞的识别合爱滋病感染者T4、T8细胞的记数。自70年代以来，随着流式细胞技术水平的不断提高，其应用范围也日益广泛。流式细胞术已普遍应用于免疫学、血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学、生物化学等临床医学
22、和基础医学研究领域。FCM可以发挥最大优势的领域是细针穿刺(FNA)以及各种体液、血液和骨髓的检查。组织芯片生物芯片技术包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片以及元件微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片，对DNA、RNA、多肽、蛋白质、细胞、组织以及其它生物成分进行高效快捷的测试和分析。组织芯片概念组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissuemicroarray，TMA)，是一种新兴的生物高科技技术。是将数十甚至数千个不同个体的小组织标本整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片。可以了解组织形态、组化特性、蛋白和核酸(RNA和DNA)在组织细胞中的定位和分布组织芯片发
23、展简史1986年Battfora 多组织块和多组织片，是组织芯片的前身。他制备多组织片的目的是提高测试抗体的效率。20世纪90年代初西方国家如丹麦也用手工方法制出多组织片，其目的是为了测试各级病理医师的诊断水平和进行免疫组化的质量检控。1998年Kononen等采用机器(组织芯片机，tissue arrayer)通过钻洞取样，将645个直径06 1TITI组织从不同的蜡块转移到一个新的蜡块中，并井然有序地排列在一起，然后切片制成了乳腺癌的组织芯片，并应用荧光原位杂交、免疫组织化学和mRNA原位杂交技术研究了6种基因及其表达产物的表达状态。他们制作组织芯片的目的是为了高效地检测肿瘤组织中相关基因
24、及其表达，从而建立肿瘤的分子文库。目前组织芯片主要用于肿瘤特异性基因的筛选和功能基因组的研究。组织芯片的应用领域包括与生命科学相关的基础研究、临床研究、应用研究和新药开发等。组织芯片可用于常规苏木素-伊红染色(HE)、组织化学、免疫组织化学（IHC）染色、原位杂交（ISH）、荧光原位杂交（FISH）、原位PCR、原位RT-PCR和寡核苷酸启动的原位DNA合成（PRINS）等。可以广泛地与核酸、蛋白质、细胞、组织、微生物相关技术相结合，分别在基因、转录和表达产物的生物学功能这三个水平上进行研究，可对病人的疾病诊断，预后和治疗相关的标志物的分析。组织芯片的广泛应用将会极大地促进现代医药学、基因组学
25、和蛋白组学研究的深入发展。在掌握组织芯片基本应用范围的基础上可以演绎出很多种用途。有的已成为现实，如：HE 染色：其目的是展现组织细胞的形态，据此，可以做成正常组织芯片、肿瘤组织芯片、炎性病变组织芯片、心血管疾病和神经疾病等系统性疾病组织芯片、疑难疾病组织芯片、少见病组织芯片、寄生虫组织芯片、基本病理改变组织芯片等等。这些组织芯片可用于教学、水平测试，亦可作为缩微的组织学和病理学图谱。组化染色和免疫组化染色：目的是了解组织细胞和病原中的组化成分或抗原表达，可以根据需要做成各种组织芯片，研究各种组织细胞以及病原的表型和表达，在这方面有很大的科研潜能。另一方面，可以通过已知的组织细胞和病原了解各种
26、试剂和或抗体的特异性和敏感性。根据需要做成各种组织芯片测试新试剂和新抗体，进行组化染色和免疫组化染色的质量监控，也可用于常规组化染色和免疫组化染色阴性和阳性对照。与HE染色片配合，亦可用于教学、水平测试和作为缩微的图谱。原位杂交和荧光原位杂交：目的是了解组织细胞的基因或基因表达，可以根据需要做成各种组织芯片，如乳腺癌组织芯片、膀胱癌组织芯片、肾癌组织芯片等，研究各种组织细胞的基因情况。组织芯片的优点优点是：体积小，信息含量大，一次实验可获得大量结果。实验误差小：组织芯片中的众多组织都处在相同条件下进行实验，因此较传统的1个病例1张切片的实验误差小，试验结果可比性强；对原始组织蜡块损坏差小；成本
27、低：组织块较小，试剂的用量较少，故成本低廉；连续性：可以将病变的许多不连续过程集中到一起，使之连续化并微型化，由此可了解病变的整个过程； 应用范围广泛。 高效，快速。局限性：由于构成组织芯片的组织很小，因此必然会出现一个问题，即这些小组织是否能够代表其原来的组织?特别是在对有多种组织起源组成的肿瘤进行研究时，这个问题是很难避免的。芯片技术的出现是生物信息分析领域的一个革命性的里程碑，它使以往的繁多、复杂的基因序列分析和基因检测研究工作变得省时、省力、准确、高效率，该技术的广泛应用必将使人类对生物体的生长、发育、分化、遗传、疾病等重大生命问题，有更加本质的认识。组织芯片的制作方法：(1)收集和选
28、择病例。(2)复查组织切片，审查病理诊断，(3)收集相应组织蜡块(称为供体蜡块donor)、标记相应靶点。可采用打点或画圈法。(4)制作空白蜡块(即受体蜡块recipient)：(5)用组织芯片制作机(Beecher Instnnnents，usA)在受体蜡块上打洞。(6)获取供体蜡块组织芯 (7)用距离调节器准确地将打洞针前后或左右移动适当的距离，再重复上述(5) (6)的操作方法，如此反复即可将数十至上千的组织芯整齐地安插于受体蜡块中。最后，用三张载玻片叠放在一起将所有组织芯按平，使制成的组织芯片蜡块表面平坦光滑。(8)将制成的组织芯片蜡块再放入蜡块制作模具，放入60 烤箱内1 h，使组织
29、芯与受体蜡块的蜡融为一体。冷却后取出。组织芯片蜡块便制做成功。(9)制作好的芯片蜡块，可进行切片或放入4冰箱内保存备用。(10)对组织芯片蜡块进行切片。用于免疫组织化学染色或原位杂交。组织芯片技术目前仍处于不断完善的过程中，但已显示了重要的科研和应用价值，也具有很大经济价值，不仅为人类基因组研究发挥作用，也将为病理学的发展起重大推动作用。现在，已有公司生产出自动组织芯片打孔仪、点样仪等仪器，有助于提高组织芯片的制作速度。诊断细胞学技术诊断细胞学的涂片制作和染色技术是一直使用传统的方法，脱落细胞学检查通过采集病变处脱落的细胞，涂片染色后进行观察。其作用可以普查肿瘤；为细胞培养提供标本；并测定激素
30、水平。然而，传统的宫颈涂片制作有近80以上的细胞包括异常的细胞未能收集在玻片上，而且制片质量不佳，有诊断价值的细胞重叠严重，或被炎症细胞、血细胞和黏液等遮盖而影响诊断。近年来液基薄层细胞学制片技术的应用使细胞学涂片，特别是宫颈涂片制作技术有了很大的发展。液基薄层细胞学制片技术包括膜式液基薄层细胞技术(ThihprepCytolosy Test，TCT)和离心沉淀式液基薄层细胞学制片技术(AutoCyte Prep)，制作出的涂片几乎可以收集到取样器上的所有细胞，细胞呈单层平铺，背景清晰少有血细胞和黏液等的干扰。与传统涂片相比，异常细胞的检出率有了显著提高。液基薄层细胞制片技术与TBS(The
31、Bethesda System)报告方式结合在宫颈病变筛查及诊断中起着越来越大的作用。该技术还可用于非妇科标本，如尿、痰、体腔渗出液、支气管冲洗液、食管拉网标本以及细针穿刺的标本检测。但是该技术仪器和耗材成本较高，在一定程度上影响了该技术的推广和普及。图像分析技术与网络技术图像分析技术在病理学中的应用标志着我国已进入定量病理学的新阶段。在对组织细胞或细胞的微小结构定性和定位的形态基础上，利用图像分析仪能较客观而精确地以数字表达存在于标本中的各种信息，进行半定量或定量分析。如在研究和诊断中应用该技术对胃肠粘膜上皮重度增生和腺癌细胞核中DNA含量进行测定，以及开展定量免疫组织化学研究。其结果较人工
32、观察计算更客观、精确，重复性好，可比性强，但也受到制片质量不均一、采集图像是否恰当、不同厂家的分析软件系统的差异诸多因素的影响。同时，在病理教学中多媒体技术广泛应用，大大地提高了教学改革的进行。随着网络技术的飞速发展，促进了病理专业网站的建立，网上的病理读片，疑难病理讨论，技术论坛，诊断经验交流，极大地方便了病理学工作者之间交流、沟通和共同提高。医院局域网的建立，使各科室间能方便快捷地交流信息，共享资源。全自动显微镜系统及超强计算机技术的应用，成就了病理远程会诊。其它技术20世纪80年代初激光扫描共聚焦显微镜问世，它在显微镜高分辨率成像的基础上加装激光扫描装置对组织内或细胞内部微细结构进行光学非侵入式分层扫描，然后通过计算机进行图像处理，迅速完成对图像立体、多层面、动态的全面观察，再转换成具有三维效果的图像从屏幕上显示并拍摄。是当今生物组织形态学研究的先进手段之一，在整个生物学研究领域都有着广阔的应用前景。新近由Microbright Field开发的虚拟切片技术，可使整张切片的图像存储在固定媒体上，实现了无切片无显微镜的病理时代，开创病理诊断及教学新模式。