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1、非小细胞肺癌患者靶向治疗前后自身配对血清差异蛋白的筛选,张绪超 广东省人民医院肿瘤中心 广东省肺癌研究所,背景,EGFR TKI 越来越多用于晚期NSCLC患者，包括I线及II线治疗及老年患者。 患者使用EGFR TKI最终会出现耐药进展，其耐药机制（EGFR T790M等，尚不完全清楚），预测耐药的研究有助于及早更改治疗方案。 能否从血清中获得患者对TKI耐药相关的生物标志物？,目的,探索晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者接受上皮细胞生长因子受体 （EGFR）酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗疗效相关的血清生物标志物。,方法,晚期NSCLC患者选择: 男性2个、女性7个。中位年龄57岁（4471
2、）。IIIB 期患者2例及 IV期7例。均为腺癌。TKI疗效4例SD，5例PR。均接受过以前化疗( 3 PR 及6 PD)。中位进展时间为172天（127 378），中位生存为 429天（191-801）。 自身配对血清样本的收集：按照质谱检测标准程序，收集患者在接受EGFR TKI前及治疗后出现进展前一周时的血清，冻存于80备用。,Tab 1. numbering of pairs of serum samples of NSCLC patients sent for MALDI-TOF MS analysis,所有样本同步采用弱阳离子分离微珠（WCX microbead）预处理血清样本。采
3、用Bruker公司的AutoflexTM基质辅助激光解析离子化时间飞行（MALDI-TOF）质谱仪平台检测。 数据用ClinPro Tools （Version 2.1）分析耐药前后血清差异蛋白质峰。,方法,Samples collection: all serum samples were from advanced NSCLC patients receiving EGFR TKI (Gefitinib/Elotinib) therapy. Sampling time was 9:00am without breakfast, and serum was collected from pe
4、ripheral blood and kept under -70,MALDI-TOF MS analysis: All samples were pre-separated by WCX microbeads, and then detected on the MALDI-TOF-MS platform of Bruker AutoflexTM. ClinProTools (Version: 2.1) Software was used to analyze the differentially expressed proteins.,Patients characteristics: Me
5、dian age 57 ( range 44-71) 2 males and 7 females Stage: IIIB (2); IV (7) All adenocarcinoma Effects: 4 SD, 5 PR All received former chemotherapy ( 3 PR and 6 PD ) Median TTP: 172, range 127 - 378 Median Survival: 429, range 191-801,结果,18份自身配对血清样本均成功获得质谱检测分析。分析发现7个蛋白质峰在两组间表达有统计学显著性差异（P 0.05）。 分子量分别是3
6、242.09、8690.36、2952.64、3224.04、1450.51、1887.8及3935.73（m/z）。,与基线对照相比，耐药时血清中有三个差异蛋白（3242.09、2952.64及3224.04）显著下调。四个蛋白（8690.36、1450.51、1887.8及3935.73）显著上调。 其身份有待于进一步富集后分析或通过二级质谱分离鉴定。 初步分析提示蛋白差异峰的改变与患者的TTP有相关性，而与总生存时间（OS）无相关性。,结果,Fig 1. Significantly differential expression of protein peak of 2952.64 Da
7、 (m/z) between paired sera samples at the time-points of one week before and just PD after EGFR TKI therapy,结果,Tab 2. significant proteomic peaks between the self-matched serum samples befor and after EGFR TKI therapy,means the protein peak (left column) down-regulated at the time point of PD after
8、TKI therapy compared with one week before or the first week after TKI therapy, whileasmeans up-regulated. indicates significant correlation with TTP (P0.02), but not with OS.,结果,小结与展望,血清差异蛋白 3242.09, 8690.36, 2952.64, 3224.04, 1450.51, 1887.8 and 3935.73 (m/z)在NSCLC患者接受EGFR TKI治疗出现耐药前后自身配对血清中表达显著改变. 初步分析提示上调或下调的血清蛋白与患者的疾病进展时间（TTP）相关（P0.02)，但与总生存无相关性。 该差异表达谱可能具有对TKI耐药预测 的意义。这些差异蛋白的身份（ID）鉴定及其产生耐药的相关分子机制需要进一步研究。,MALDI-TOF技术可用于检测晚期NSCLC患者接受EGFR TKI治疗耐药前后血清中的差异蛋白。但质谱检测的稳定性及数值的重复性需要进一步研究。 进一步能够用于NSCLC患者的EGFR TKI 耐药预测的分子标签（molecular signature）需要进一步严谨设计并扩大样本量进行鉴定和验证。,谢 谢 !,