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1、复方茶和白茶辅助降血压作用研究【摘要】目的：以自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)为模型，明确复方茶和白茶对自发性高血压大鼠血压的调节作用并探讨其可能机制。方法：将40只15周龄SHR大鼠按体重随机分为5组，复方茶组、白茶组和空白对照组，同时，以8只同龄正常大鼠(Wistar-Kyoto，WKY)作为正常对照组。复方茶组和白茶组分别以复方茶组2g/(kg.d)、1g/(kg.d)和 0.2g/(kg.d)及白茶组1g/(kg.d)配成3ml水溶液灌胃4周，空白对照组和WKY组则分别灌胃等量蒸馏水和复方茶2g/(kg.d)。连续灌胃给药4周，
2、每天1次，每周称1次体重和测一次血压及心率（采用无创伤尾动脉血压仪）； 用药4周后，断头取血，ELISA法测血浆中的Ang、ET和CGRP,以及血清TNF-、NO；低温下快速取出心、肾、主动脉，固定于2.5戊二醛溶液中，4保存，超微病理切片观查；RT-PCR检测主动脉中NOS、SOD-1和p22phox，及心肌组织中胶原蛋白、MMP-2的表达量。结果：复方茶和白茶均可降低SHR的血压和体重，增加心率，且成剂量依赖性变化；与空白对照组SHR相比，复方茶和白茶均可降低血浆Ang含量，提高CGRP的浓度，白茶还可降低血浆ET的含量，但差异不显著； 复方茶和白茶均可改善心肌肥大和纤维化以及血管壁增厚现
3、象。结论：复方茶和白茶降低血压可能是通过降低血浆Ang含量，提高CGRP的浓度来发挥作用的。【关键词】复方茶，白茶，Ang，ET，CGRP,TNF-，NO，SHR大鼠原发性高血压是临床常见的多因素疾病，其发展极易导致心、脑、肾等脏器的器质性病变和功能损害；研究表明，血压升高与肾素-血管紧张素系统(RAS)和内皮素系统关系密切，而血管活性物质Ang和ET是RAS系统和内皮素系统的主要效应分子，二者均为强效的缩血管物质，并且相互作用，互为影响，同时参与和调节原发性高血压的血压变化和心、脑、肾等重要器官的病理学改变。NO是血管内皮细胞所释放的最重要最强大的舒血管物质，与Ang II及其他血管活性物质
4、一起调节着血管紧张度，对血压的短期调节和长期调节，都起着重要的作用。Ang除了参与血管紧张性和刺激血管增生肥厚等重要生物学功能，Ang还可以刺激血管细胞粘附分子的表达和1L-6.、TNF-a等炎性因子的释放，造成血管的炎症反应，参与重构。CGRP是辣椒素敏感感觉神经的重要肽类递质，CGRP有强效的扩血管效应，对阻力血管张力及血压的调节中起着重要的作用。已有研究表明，绿茶、菊花、苦丁茶、白茶和富硒茶均具有清热去火，改善血压的作用，但其联合应用是否有更好的疗效，至今尚未有研究报道。我们拟从这几种茶（复方茶）混合应用入手，研究复方茶及白茶对血压的调节作用及其调控机制是否与通过几种物质介导的。材料与方
5、法： 一、动物、动物饲养、分组及给药方法1、动物：清洁级15周龄的雄性自发性高血压大鼠(SHR)4 0只，体重36018g，同周龄的雄性Wistar-Kyoto (WKY)大鼠8只，体重34517g，以上动物均购自上海斯莱克实验动物有限公司。3、饲养:：所有大鼠均在动物房分笼饲养，每只大鼠一笼，所有大鼠均用标准鼠饲料和过滤自来水喂养，每天更换垫料1次，饲养室恒温(22士2 、恒湿(55士5%)，人工光照明暗各12小时。4、分组及给药方法：大鼠编号随机分为6组，每组8只:(1) SHR +蒸馏水组; (2) SHR+复方茶高剂量组(2g/kg.d)；(3) SHR+复方茶中剂量组(1g/kg.d
6、);(4)SHR+复方茶低剂量组(0.2g/kg.d)；(5) SHR+白茶中剂量组(1g/kg.d)； (6)WKY+复方茶高剂量组(2g/kg.d)。各组大鼠均灌胃给药，每日1次。连续给药4周。二、大鼠血压及心率的测量从用药前一周开始，每周六上午9点开始，在室温22士2条件下，将大鼠于40下预热(用温控器调节温度恒定)约15min，采用ZH-HX-Z型大鼠血压心率测定仪，测量大鼠安静、清醒状态尾动脉收缩压和心率，连续测量3次，取连续3次血压值不超过10mmHg差异的平均值作为应测血压值。直至实验结束，共测血压5次。三、一般行为观察每周一次观察大鼠的活动、神情、毛发、二便等状况，每周一次测量
7、大鼠体重。四、血液标本的收集和有关指标的测定1.血浆Ang、ET和CGRP含量测定 末次给药后24h禁食，不禁水。2%的戊巴比妥钠腹腔注射（0.25ml/100g体重），断头取血10ml，5ml血液注入含0.5ml抗凝剂（1ml血液加1/10体积2.0%EDTA.Na2）的血液标本收集管，43000rpm离心15分钟；仔细收集上清,所得血浆放-20冰箱中保存用以测定Ang、ET和CGRP含量2血清TNF-、NO含量测定上述所得血液的另5ml放置30min，43000rpm离心15分钟，分离的血清用以测定TNF-、NO浓度。以上所有血液生化指标均采用双抗夹心-ELISA法测定。试剂盒购自上海西唐
8、生物科技有限公司。五、脏器组织标本的采集、保存和检测1.组织标本的采集：大鼠处死后，剪开胸腔，取出心脏、肾脏和主动脉，冰生理盐水漂洗。（1）心脏分离去除右心和左心房及大血管，将左心室以滤纸吸干，称重；记录计算左心室重量，以左心室重量与体重的比值(LVwBW)作为心肌肥厚的指标，单位为gkg。（2）沿垂直于左心室长轴对称中点上下切取lmm X Imm X 2mm心肌组织，置于25戊二醛中固定24小时，按生物样品常规处理，制成切片，于透射电镜下观察。（3）剥离大鼠主动脉胸段和腹段，长约2.53.0cm，1/2放入2.5%戊二醛的磷酸盐缓冲液中固定，留作电镜标本，1/2留作进一步处理。（4）将左肾去
9、包膜后纵向切开，取上极部分靠皮质部米粒大小组织，置于含2.5%戊二醛的磷酸盐缓冲液固定24小时，按生物样品常规处理，制成切片，于透射电镜下观察。剩余心脏、主动脉和肾脏组织用锡箔纸包裹放入液氮冷冻并且放入-80低温冰箱保存以进行TR-PCR和Western blot检测。2组织病理超微结构观察将戊二醛固定的心、肾和主动脉标本，用02 molL磷酸缓冲液冲洗3次，1锇酸固定2 h，02 molL磷酸缓冲液再冲洗3次，乙醇梯度脱水，环氧树脂浸透、包埋，超薄切片，透射电镜下观察并拍照。六、统计学处理采用SPSSl 6.0统计软件进行数据处理，数据以“xs”表示，组间比较用单因素方差分析,以P0.05为
10、差异有统计学意义，P0.01为差异有非常显著意义。结 果一、各组大鼠实验全过程血压、心率及体重的的测定结果1. 灌胃茶叶4周后大鼠的血压变化如表1，图1所示：总体上，各组大鼠血压在实验过程中呈升高趋势。与同龄正常大鼠WKY比较，蒸馏水组SHR收缩压从灌胃第2周开始呈明显升高趋势；与蒸馏水组SHR相比，灌胃茶叶的各组大鼠在第4周收缩压开始下降，且剂量依赖性下降，但下降不显著。表1 各组大鼠各周血压测定结果血压（mmHg） 0周1周2周3周4周复方高量s1248192353425510*291122657*复方中量s2248192781826021291142797复方低量s32481927228
11、2567309727513蒸馏水s4248192102825510285242834复方高量w187219317179723962287白茶中量s5248193116271932262623注：与蒸馏水组SHR比较，*p0.05, *p0.01图1 各组大鼠各周血压变化曲线2. 连续灌胃4周期间各组大鼠的心率变化如表2，图2所示：蒸馏水组SHR大鼠心率几乎没有变化，其他各组灌胃茶叶的各组大鼠在灌胃茶叶的4周期间心率平稳增加，且随剂量依赖性显著变化。表2 各组大鼠心率测定结果心率（次/min）0周1周2周3周4周复方高量s1396214382646822*48514*50315*复方中量s239
12、621438264582445018*49710*复方低量s33962143827450334507*45112蒸馏水s439621382243955381338728复方高量w36411407284332846826*43023白茶中量s539621441264531746520*43836注：与蒸馏水组SHR比较，*p0.05, *p0.01图2 各组大鼠心率变化曲线3. 连续灌胃4周期间各组大鼠的体重变化如表2，图2所示：随着周龄的增加，SHR大鼠体重较正常WKY高剂量组呈增加趋势，且随灌胃茶叶剂量高低持续减少。图3 各组大鼠体重测定结果体重（kg）0周1周2周3周4周复方高量s1339
13、1033093365*3398*3577复方中量s234273435351635373658复方低量s33428340103541036553767蒸馏水s434183538368736783798复方高量w3455343630612*32410*32410*白茶中量s5341733073417*357603606注：与蒸馏水组SHR比较，*p0.05, *p0.01图3 各组大鼠各周体重变化曲线二、一般行为观察SH R蒸馏水组大鼠与正常组WKY相比神情较紧张，易激惹，毛色发黄而无光泽，毛发脱落较多，小便颜色偏黄，大便颗粒较小、质地较干等现象。灌胃茶叶后，与WKY组相比紧张、打架现象较模型组少
14、见，小便颜色较清，大便较湿润.。在实验前两周SHR大鼠部分患了坏尾症，而WKY大鼠没有感染，有两只老鼠死于灌胃；与SHR相比，WKY大鼠进食量减少。三、复方茶和白茶对各组大鼠血液主要生化指标的影响1.对血浆Ang、CGRP、ET含量的影响由表4、图4-14-3可知，与SHR蒸馏水组相比，WKY组、茶叶灌胃组在Ang上没有显著差异，随剂量增高，Ang浓度呈下降趋势；CGRP浓度随剂量增高而在血浆中的含量大大增加，但与SHR蒸馏水组、WKY组相比没有显著差异；SHR蒸馏水组的ET含量偏高，与WKY组比较具有极显著差异（p0.01）。2.对血清NO、TNF-a含量的影响 由表4、图4-4和图4-5可
15、知，SHR蒸馏水组血清NO浓度较正常WKY组略有偏高，但灌胃茶叶后的各剂量组与蒸馏水SHR组相比，NO浓度却降低了，但差异不显著。SHR蒸馏水组血清NO浓度较正常WKY组略有偏低，但灌胃茶叶后的各剂量组与蒸馏水SHR组相比，NO浓度却升高了，差异不显著。 表4 各组大鼠血液生化指标检测结果组别Ang(pg/ml)CGRP(pg/ml)ET(pg/ml)NO(pg/ml)TNF-a(pg/ml)复方高量s11.650.3585.7418.0022.481.862.210.2051.272.06复方中量s21.310.1584.699.079.672.931.800.2447.936.10复方低量
16、s31.390.2361.6816.308.871.951.800.1359.3326.72蒸馏水s41.650.3345.638.118.172.162.440.1733.073.63复方高量w0.950.1578.5417.2012.02.211.580.1847.125.28白茶中量s51.600.2270.6033.032.770.941.930.1534.425.57注：与蒸馏水组SHR比较，*p0.05, *p0.01图4-1各组大鼠血浆Ang浓度变化趋势图4-2 各组大鼠血浆CGRP浓度变化趋势图4-3 各组大鼠血浆ET浓度变化趋势图4-4 各组大鼠血浆NO浓度变化趋势图4-5
17、各组大鼠血浆TNF-a浓度变化趋势四、复方茶和白茶对各组大鼠心、肾和主动脉的超微结构的影响1.心肌组织超微结构的改变WKY复方茶高量组：心肌细胞核膜完整，肌原纤维排列整齐、紧密，无断裂，可见横纹；肌原纤维间线粒体丰富，嵴密集,基质密度适中,核仁明显,间质胶原纤维无增生,如图a所示。蒸馏水组（SHR）：心肌细胞核固缩呈凋亡状态，肌原纤维模糊，排列紊乱，部分溶解，常见肌节错位和过度收缩的肌节；线粒体肿胀，嵴部分断裂溶解，基质密度降低，部分空泡变性，间质胶原纤维重度增生，如图b所示。复方高剂量SHR组：肌细胞核膜结构发育较好，肌原纤维及各A带排列基本规整，未见肌丝明显溶解；线粒体无明显肿胀，线粒体嵴
18、较清晰，空泡化程度减轻，间质胶原纤维无明显增生，如图c所示。复方中剂量SHR组：肌原纤维模糊，排列紊乱，肌节断裂和错位，线粒体肿胀减轻，嵴清晰，空泡化减轻，间质胶原轻度增生如图d所示。复方低剂量SHR组：心肌细胞核固缩，肌原纤维排列紊乱，部分溶解，;线粒体肿胀略微减轻,嵴部分断裂溶解，基质密度降低,空泡现象稍有减轻，间质胶原纤维重度增生。如图e所示.白茶中剂量组：肌细胞核周围间隙增宽，膜结构发育良好，肌原纤维模糊程度减轻，排列较规整；线粒体减少，线粒体嵴较清晰，空泡化程度减轻，间质胶原纤维无明显增生，如图f所示。 复方高量s1复方中量s2复方低量s3蒸馏水s4白茶中量s5复方高量w左心室肥厚指数3.090.052.970.063.120.092.990.053.280.042.310.25