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1、禽流感H7 血凝与血凝抑制试验,检测的目的（与H7N9的关系）,H7抗体检测为阴性（） 无H7抗体（也就无H7N9抗体) H7抗体检测为阳性（） 分子生物学方法进行病原检测,H7-Ab-HI试验方法,同H5检测方法，附后。 （GB/T 18936-2003）,H7-Ab-HI阴阳性判定标准,HI效价4，判定为阳性（） HI效价4，判定为阴性（）,质量控制 （抗原及标准阴阳性对照）,4U抗原,试剂相关信息,抗原-20冷冻保存 血球4冷藏保存 生理盐水需要调整PH值到7.2-7.4 配制好的4U抗原若当天不能用完，需冷冻保存，若量大可分装冷冻保存，再次使用融化即可（冻融可能会影响效价，每次使用需测
2、4U抗原HA价）,效价判定,非特异凝集,ND-HI,H7-HI,血凝板竖起后观察,非特异凝集,H7-HI,阿氏（Alsevers）液的配制：,加蒸馏水至100mL，散热溶解后，调PH=6.1 69kPa 15min高压灭菌，4保存备用。,附录：血凝与血凝抑制试验 1、试验准备,1%鸡红细胞悬液的配制： 采集至少3只SPF公鸡（非免疫的公鸡）或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡的血液与等体积阿氏液混合（4可保存7天左右）。配制前用PH 7.2的生理盐水洗涤3次每次均以离心机上1500-2000r/min (不得超过2000r/min，否则会导致红细胞破裂，引起溶血)，离心10分钟左右。洗涤后，吸取
3、沉积于管底的红细胞泥1mL，混合于99mL生理盐水中混匀。即得1%RBC。4可保存3天左右，若出现溶血应重新采血，重新配制。,4单位抗原的配制 根据血凝试验测新城疫病毒抗原的血凝效价。如测得病毒原液HA=27 ，即27 =128，则配制4单位抗原需将病毒原液稀释1284=32倍 那么如果需要32mL 4单位抗原，需要（3232=1）mL病毒原液和（32-1=31）mL生理盐水。,血清中非特异性凝集素的去除： 鸡和火鸡血清极少出现非特异性抑制或凝集反应，可不进行处理直接进行试验，其他禽类及哺乳动物血清需进行预处理。 处理方法：56水浴30分钟灭活、RDE（受体破坏酶）处理、红细胞吸附、胰酶处理等
4、。,90血凝板,血凝试验 试验过程,4、加1%RBC各25L，作用40min,PBS也可用PH 7.0-7.2的生理盐水代替（下同）,附录：血凝与血凝抑制试验 2、血凝试验,血凝试验 结果判定,4、加1%RBC各25L，作用40min,血凝抑制试验 试验过程,90血凝板,附录：血凝与血凝抑制试验 3、血凝抑制试验,HI注意事项 每次试验需做1份标准阴阳性血清的对照，对照成立方可判定试验结果。 阴性血清滴度不应超过2log2 阳性血清滴度应与标定的滴度相差不超过1个稀释度。 每次进行HI试验必须做4U抗原的反滴定，即测一下4U抗原的HA价是否准确。 如果HA价高1滴度（实际为8U），则HI价1 如果HA价低1滴度（实际为2U），则HI价1,血凝抑制试验 结果判定,附录：血凝与血凝抑制试验 4、试验原理,HA试验原理 病毒表面血凝素与鸡红细胞表面糖蛋白受体发生结合而发生凝集 检测病毒的存在，滴定病毒的血凝效价，大致估计病毒颗粒的数量 （1个血凝单位106病毒颗粒）,凝 集,红细胞,抗原,凝集反应,HA试验原理,红细胞,不凝集,不凝集,HA试验原理,HI试验原理,红细胞,抗原,凝集抑制反应,抗体,血凝抑制,HI试验原理,红细胞,抗原,不抑制,不抑制,