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1、重构微循环,保护线粒体，恩必普全面保护缺血性脑卒中患者,缺血性脑卒中,定义：指各种病因所致脑部血液供应障碍，导致脑组织缺血、缺氧性坏死，出现相应神经功能缺损 流行病学：全国每年新发脑卒中约200万人 死亡率：人类三大致死病因之一，每年死于脑卒中的患者约150万人 致残率：每年存活的600-700万人中，约75%不同程度地丧失劳动能力，其中重度致残者约占40%,缺血性脑卒中后缺血区的病理变化,缺血半暗带 (阶梯式细胞坏死、凋亡和存活),缺血中心区 (细胞坏死),大脑中动脉,血栓,Sallustio F, et al. Saving the ischemic penumbra: potential
2、 role for statins and phosphodiesterase inhibitors. Curr Vasc Pharmacol 2007;5(4):259-265.,脑梗死中心区(0%-20%CBF)：细胞死亡，不可挽救 半暗带(20%-40%CBF)：细胞损伤，可以挽救 半暗带CBF低于25%时，95%以上都会发展为梗死区 半暗带CBF高于50%时，只有5%会发展为梗死区,急性缺血性脑卒中患者普遍存在半暗带,Ledezma CJ, et al. Modern imaging of the infarct core and the ischemic penumbra in ac
3、ute stroke patients: CT versus MRI. Expert Rev Cardiovasc Ther 2009;7(4):395-403. Ebinger M, et al. Imaging the penumbra-strategies to detect tissue at risk after ischemic stroke. J Clin Neurosci 2009;16(2):178-187.,90%-100%的患者在脑梗塞发生3小时后都存在缺血半暗带 75%-80%的患者发病6小时后仍存在缺血半暗带 超过44%的脑卒中患者在发病18小时后仍然存在缺血半暗带
4、不同患者缺血半暗带的存活时间短至3小时，长至48小时不等,半暗带是治疗缺血性脑卒中的关键,Ledezma CJ, et al. Modern imaging of the infarct core and the ischemic penumbra in acute stroke patients: CT versus MRI. Expert Rev Cardiovasc Ther 2009;7(4):395-403. Ebinger M, et al. Imaging the penumbra-strategies to detect tissue at risk after ischemi
5、c stroke. J Clin Neurosci 2009;16(2):178-187.,半暗带的细胞损伤是可逆的，因此挽救半暗带是治疗缺血性脑卒中的最终目标 延长半暗带细胞的存活时间，恢复半暗带细胞的血液供应是挽救半暗带的最主要方法,恩必普如何挽救半暗带？ 独特的双重作用机制,重构微循环，增加缺血区灌注1-7 保护血管结构完整 恢复血管管径 增加缺血区血流量 增加缺血区周围微血管数量 保护线粒体，减少细胞死亡8-14 保护线粒体结构的完整 提高线粒体复合酶IV的活性 提高线粒体ATP酶的活性 维持线粒体膜的稳定性,1.Liu CL,et al.Journal of the Neurolog
6、ical Sciences2007;260:106-113. 2.徐皓亮等.中国药理学与毒理学杂志1999;13:281-284. 3.Yan CH,et al.Acta Pharmacol Sin1998;19:117-120. 4.徐皓亮等.药学学报 1999;34:172-175. 5.阎超华等.药学学报 1998;33:881-885. 6.Liao SJ,et al.Brain Res 2009;1289:69-78. 7.李其富等.四川大学学报(医学版) 2008;39:84-88. 8.董高翔等.中国医学科学院学报2002;24:93-97. 9.高钟生等.脑与神经疾病杂志200
7、8;16:420-422. 10.熊杰等.药学学报1999;34:241-245. 11.熊杰等.中药药理与临床2007;23:73-76. 12.Li L,et al.Brain Res2009;1290:91-101. 13.董高翔等.中国医学科学院学报2002;24:93-97. 14.Chang Q,et al.Acta Pharmacol Sin2003;24:796-804.,恩必普独特的双重作用机制之一,重构微循环，增加缺血区灌注 保护血管结构完整 恢复血管管径 增加缺血区血流量 增加缺血区周围微血管数量,大脑血液供应是维持正常脑功能 和结构的根本保证,增加缺血区脑灌注的主要途径
8、,微循环,侧支循环,微循环,微循环是指微动脉和微静脉之间的血液循环，是血液与组织细胞进行物质交换的场所。,微循环和微淋巴管一起组成微循环功能单元，承担血液与组织液之间氧、营养必需物质和代谢产物的交换，能量、信息传输，承担血液流通、分配、组织灌注，以及一系列反馈调节、内环境稳定机制。,微循环的组成,动脉,动脉毛细血管,静脉毛细血管,静脉,前毛细血管,末端小动静脉间通路,前毛细血管括约肌,微循环的主要调节方式,侧支循环,脑侧支循环是指当供血动脉严重狭窄或闭塞时，血流可以通过其他血管(侧支或新形成的血管吻合)到达缺血区，使缺血组织得到不同程度的灌注代偿。,脑侧支循环既是发生缺血性卒中后机体重要的代偿
9、机制，也是临床有效干预措施的重要途径。,侧枝循环的分级,动脉侧支循环可以来自硬膜内、硬膜或硬膜外血管，根据开放层次大致可分为三级：,一级侧支血管Willis环,Willis环是颅内最重要的侧支代偿途径，它将两侧半球和前、后循环联系在一起。 前交通动脉平衡两侧大脑前部区域的血液供应。 后交通动脉可为前、后循环提供侧支代偿。,Willis环,颈内动脉,大脑中动脉,基底动脉,前交通动脉,后交通动脉,大脑前动脉,大脑后动脉,二级侧支血管颅内动脉间的血管吻合,Liebeskind DS. et al. Collateral circulation. Stroke 2003;34(9):2279-2284
10、.,b：大脑前动脉和大脑中动脉在软脑膜的吻合支 c：大脑中动脉和大脑后动脉在软脑膜的吻合支 d：大脑前动脉和小脑上动脉的吻合支 e：小脑动脉远端吻合支,二级侧支血管颅外动脉间的血管吻合,Liebeskind DS. et al. Collateral circulation. Stroke 2003;34(9):2279-2284.,a：面动脉与眼动脉的吻合支 b：上颌动脉与眼动脉的吻合支 c：脑膜中动脉与眼动脉的吻合支 d：硬脑膜微动脉与脑膜中动脉的吻合支 e：枕动脉通过乳突孔的吻合支 f：枕动脉通过顶骨孔的吻合支,三级侧支血管,Adams RH, et al. Molecular regu
11、lation of angiogenesis and lymphangiogenesis. Nat Rev Mol Cell Biol 2007;8(6):464-478.,外膜细胞,细胞外基质降解,VEGF浓度梯度,内皮细胞极性改变,PDGFB,细胞外基质,内皮细胞增生,侵润性生长,VEGF浓度梯度,PDGF,顶端细胞间相互粘附,柄细胞增生,内皮细胞间稳定粘附,外膜细胞稳定贴附,内皮细胞增生停止,通过血管发生和血管生成等方式使缺血区血管新生，VEGF在此过程中发挥着重要作用,恩必普保护血管内皮细胞的完整性,血管内沉积的实质成份,微血栓,内皮细胞肿胀破裂，脱入管腔， 细胞间连结松散，基膜拧曲裂
12、开,恩必普治疗组,Liu CL, et al. dl-3n-butylphthalide prevents stroke via improvement of cerebral microvessels in RHRSP. Journal of the Neurological Sciences. 2007;260:106-113.,恩必普治疗后的大脑微血管形态（H&E染色，100倍）,恢复血管管径 恩必普增加脑缺血大鼠软脑膜微动脉管径,徐皓亮,等. 丁基苯酞对局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍的影响. 药学学报 1999;34(3):172-175.,大脑右中动脉阻断术后20分钟腹腔注射NBP
13、25mg/kg,21,恩必普提高低糖低氧细胞外液 6-酮-PGF1/ TXB2比值减轻血管痉挛,阎超华, 等. 丁基苯酞对原代培养的大鼠皮层神经细胞外液6-keto-PGF1和TXB2及其比值的影响. 药学学报 1998;33(12):881-885.,0,0.01,0.02,0.03,0.04,6-keto-PGF1/TXB2,阿司匹林组,NBP组,低糖低氧处理5小时，处理同时加入药物,*,*,*,*,*P0.05, *P0. 001 vs 相应对照组,增加缺血区血流量 恩必普增加脑缺血大鼠软脑膜微动脉血流速度,徐皓亮,等. 丁基苯酞对局灶性脑缺血大鼠软脑膜微循环障碍的影响. 药学学报 19
14、99;34(3):172-175.,缺血,*,*,*,*,*,*,*P0.001 vs 模型对照组,大脑右中动脉阻断术后20分钟腹腔注射NBP25mg/kg,恩必普增加脑缺血大鼠局部脑血流,Yan CH, et al. Effects of dl-3-n-butylphthalide on regional cerebral blood flow in right middle cerebral artery occlusion rats. Acta Pharmacol Sin 1998; 19(2):117-120.,脑缺血后时间,60分钟,90分钟,120分钟,180分钟,0,2,4,6,
15、8,10,12,局部脑血流(mL/s/kg),脑缺血术后10分钟腹腔注射NBP10mg/kg,*,*,*,*,*P0.01 vs 模型对照组,恩必普抑制血小板的聚集，增加缺血区血流量,*,*,*,*,*,*,*P0. 001, *P0.01 vs 对照组,徐皓亮等. 丁基苯酞对大鼠血栓形成及血小板功能的影响. 药学学报 2001;36(5):329-333.,血小板聚集率(%),ADP(二磷酸腺苷) 花生四烯酸(AA),结果可见， 恩必普组（100umol/L）与 阿司匹林组（100umol/L）对不同类型的血小板聚集诱导剂的作用有区别，提示其机制各异。,恩必普增加梗死周围脑组织 VEGF的表
16、达,Liao SJ, et al. Enhanced angiogenesis with dl-3n-butylphthalide treatment after focal cerebral ischemia in RHRSP. Brain Res 2009;1289:69-78.,VEGF阳性单位/高倍视野,75,50,25,0,假手术,12h,24h,48h,72h,起始用药距脑梗塞手术的时间,RHRSP 8w,RHRSP 8w + NBP,RHRSP 16w,RHRSP 16w+ NBP,RHRSP模型，诱发脑缺血后13天，NBP口服每天80mg/kg，连续10天,*,*,*,*,*P
17、0. 05 vs 同时间模型对照组,恩必普增加脑梗塞模型脑组织 VEGF的表达,李其富,等. 丁基苯酞对大鼠局灶缺血脑组织VEGF及bFGF表达的影响. 四川大学学报(医学版) 2008;39(1):84-88.,0,5000,10000,15000,20000,25000,30000,梗死周围区,海马区,梗死中心区,梗死周围区,梗死周围区,梗死周围区,积分光密度值,VEGF mRNA,VEGF蛋白,假手术组,模型对照组,NBP组,脑缺血术后NBP灌胃每次25mg/kg，每天两次，连续3天,*,*,*,*,*P0. 01 vs 模型对照组,恩必普增加脑组织中vwF标记阳性 微血管数量,脑组织内
18、vwF阳性微血管数量/HPF,*,*P0.05 vs Asp组,NBP治疗组,Asp治疗组,RHRSP模型，诱发脑缺血前 NBP口服80mg/kg，每天两次， 或者Asp 40mg/kg，每天两次，连续7天,Liu CL, et al. dl-3n-butylphthalide prevents stroke via improvement of cerebral microvessels in RHRSP. J Neurol Sci 2007;260(1-2):106-113.,恩必普增加脑组织中有效灌注微血管数量,#,#,#,#,#,#,#,#,*,*,*,*,#P0.05 vs 假手术组
19、 *P0.05 vs 模型对照组和Asp组,脑组织内FITC标记微血管数量HPF,假手术组,模型对照组,NBP组,Asp组,RHRSP模型，诱发脑缺血前NBP口服80mg/kg，每天两次， 或者Asp 40mg/kg，每天两次，连续7天,Liu CL, et al. dl-3n-butylphthalide prevents stroke via improvement of cerebral microvessels in RHRSP. J Neurol Sci 2007;260(1-2):106-113.,恩必普独特的双重作用机制之二,保护线粒体，减少细胞死亡 保护线粒体结构的完整 提高线
20、粒体复合酶IV的活性 提高线粒体ATP酶的活性 维持线粒体膜的稳定性,脑能量代谢的生理特点,能量代谢 旺盛,原料的 连续供应,供应形式 是ATP,能量储备低,线粒体：细胞的能量“加工厂”,细胞内产生ATP的主要场所 细胞80%-90%的ATP由线粒体提供 为细胞各种生物活动提供能量，在维持细胞正常生理功能和活性方面发挥着重要作用,线粒体,张均田等. 神经药理学2008 人民卫生出版社.,线粒体呼吸链传递电子，产生ATP,线粒体膜电位是产生ATP的驱动因素！,在线粒体呼吸链中，线粒体复合酶负责将电子传递给氧形成终产物水，是ATP产生过程中的重要步骤,张均田等. 神经药理学2008 人民卫生出版社
21、.,线粒体的主要生物功能,调节钙浓度 和钙信号,自由基产生和清除,细胞凋亡,张均田等. 神经药理学2008 人民卫生出版社.,线粒体损伤是细胞损伤的核心环节,Brouns R, et al. The complexity of neurobiological processes in acute ischemic stroke. Clin Neurol Neurosurg 2009;111(6):483-495. Schbitz WR, et al. Perspectives on neuroprotective stroke therapy. Biochem Soc Trans 2006;3
22、4(Pt 6):1271-1276.,恩必普减轻OGD后血管内皮细胞线粒体的裂解,Li L, et al. DL-3-n-butylphthalide protects endothelial cells against oxidative/nitrosative stress, mitochondrial damage and subsequent cell death after oxygen glucose deprivation in vitro. Brain Res 2009;1290:91-101.,正常 对照组,低糖低氧 对照组,低糖低氧 NBP组,OGD后3小时，OGD处理同时
23、加入NBP,*P0.05 vs 正常对照组 # P0. 01 vs 低糖低氧对照组,0,10,20,30,40,50,*,#,*,线粒体裂解细胞比例(%),正常 对照组,低糖低氧 对照组,低糖低氧 NBP组,恩必普明显改善低糖低氧引起的神经元 线粒体复合酶活性的降低,复合酶活性(mol/mg/minn),正常组,低糖低氧组,NBP 10-6mol/L,NBP 10-5mol/L,NBP 10-4mol/L,*,*,*,*P0. 01 vs 低糖低氧组,熊杰, 等. 丁基苯酞对原代培养神经元线粒体功能的保护作用. 中药药理与临床 2007;23(5):73-76.,低糖低氧处理6小时，低糖低氧处
24、理同时加入NBP,提高线粒体ATP酶的活性,董高翔,等. 丁基苯酞对局部脑缺血再灌注大鼠线粒体ATPase, 抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响. 中国医学科学院学报 2002;24(1):93-97.,局灶性缺血2小时，再灌注24小时，缺血前10分钟腹腔注射NBP。NBP有助于维持线粒体膜电位，保护线粒体结构和功能,ATPase活力(活力单位),Na+-K+-ATPase,Ca2+-ATPase,#,#,*,*,*,*,*,*,*P0.05, *P0. 01 vs 对照组 # P0. 01 vs 假手术组,维持线粒体膜的稳定性 恩必普减轻线粒体膜电位的降低,熊杰, 等. 丁基苯酞对原代培养神经元
25、线粒体功能的保护作用. 中药药理与临床 2007;23(5):73-76.,低糖低氧处理同时加入NBP,维持线粒体膜的稳定性 恩必普改善线粒体膜的流动性,微粘度,正常组,低糖低氧组,NBP 10-6mol/L,NBP 10-5mol/L,NBP 10-4mol/L,*,*,*,*,*P0. 01 vs 低糖低氧组,熊杰, 等. 丁基苯酞对原代培养神经元线粒体功能的保护作用. 中药药理与临床 2007;23(5):73-76.,低糖低氧处理6小时，低糖低氧处理同时加入NBP,恩必普对线粒体和脑皮层总SOD活性的影响,*P0. 01 vs 对照组 # P0. 05, # P0. 01 vs 假手术
26、组,SOD活性(NU/mg protein),局灶性缺血2小时，再灌注24小时，缺血前10分钟腹腔注射NBP,董高翔,等. 丁基苯酞对局部脑缺血再灌注大鼠线粒体ATPase, 抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响. 中国医学科学院学报 2002;24(1):93-97.,#,*,#,*,*,*,恩必普对线粒体和脑匀浆GSH-Px活性的影响,#,*,局灶性缺血2小时，再灌注24小时，缺血前10分钟腹腔注射NBP,董高翔,等. 丁基苯酞对局部脑缺血再灌注大鼠线粒体ATPase, 抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响. 中国医学科学院学报 2002;24(1):93-97.,*P0. 01 vs 对照组 # P
27、0. 05 vs 假手术组,恩必普对线粒体和脑匀浆MDA含量的影响,#,*,*,#,*P0. 05 vs 对照组 # P0. 05, # P0. 01 vs 假手术组,MDA含量(nmol/mg protein),局灶性缺血2小时，再灌注24小时，缺血前10分钟腹腔注射NBP,董高翔,等. 丁基苯酞对局部脑缺血再灌注大鼠线粒体ATPase, 抗氧化酶活性和脂质过氧化的影响. 中国医学科学院学报 2002;24(1):93-97.,减少神经细胞凋亡 恩必普减少缺血再灌注大鼠线粒体Caspase3的激活,Acta Pharmacol Sin 2003;24(8):796-804.,#,*,*,*,
28、*,*,#,MCAO大鼠2小时后再灌注24小时，缺血后10分钟腹腔注射NBP,*P0.05, *P0. 01 vs 对照组 # P0. 01 vs 假手术组,恩必普抑制缺血再灌注大鼠神经细胞的凋亡,MCAO大鼠2小时后再灌注24小时，缺血后10分钟腹腔注射NBP,. Acta Pharmacol Sin 2003;24(8):796-804.,*,*,*,*,*P0.05, *P0. 01 vs 对照组,恩必普降低低糖低氧引起的 神经细胞坏死和凋亡,坏死/凋亡率(%),*,*,*,*,*,*P0.05, *P0. 01 vs 低糖低氧组,*,*,熊杰, 等. 丁基苯酞对原代培养神经元线粒体功能
29、的保护作用. 中药药理与临床 2007;23(5):73-76.,低糖低氧处理后6小时，处理同时加入NBP,双重狙击，对抗卒中,1.Liu CL,et al.Journal of the Neurological Sciences2007;260:106-113. 2.徐皓亮等.中国药理学与毒理学杂志1999;13:281-284. 3.Yan CH,et al.Acta Pharmacol Sin1998;19:117-120. 4.徐皓亮等.药学学报 1999;34:172-175. 5.阎超华等.药学学报 1998;33:881-885. 6.Liao SJ,et al.Brain Res 2009;1289:69-78. 7.李其富等.四川大学学报(医学版) 2008;39:84-88. 8.董高翔等.中国医学科学院学报2002;24:93-97. 9.高钟生等.脑与神经疾病杂志2008;16:420-422. 10.熊杰等.药学学报1999;34:241-245. 11.熊杰等.中药药理与临床2007;23:73-76. 12.Li L,et al.Brain Res2009;1290:91-101. 13.Chang Q,et al.Acta Pharmacol Sin2003;24:796-804.,