临床病原学检查.ppt

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1、临床病原学检查,不同病原体(细菌、螺旋体、支原体、放线菌、衣原体、立克次体、病毒、真菌、原虫、蠕虫)所致感染性疾病的实验诊断方法各有其特点，但几乎都遵循以下基本原则：正确、规范采集和运送标本；通过直接显微镜查见病原体或检出病原体抗原成分；借助分子生物学的方法检测病原体核酸；利用免疫学方法检测机体对病原体抗原成分产生的免疫产物；对病原体进行分离与鉴定。在完成病原体的检出和鉴定任务后，结合病人的病史、症状或体征，快速作出诊断。并积极参与临床选择抗微生物药物，指导和监控微生物的治疗方案，避免耐药菌株的产生。,标本采集和运送 ： 根据各种病原体所致感染性疾病的病程确定标本采集的时间、部位和种类。所有采

2、集的标本均置于无菌或清洁容器中，不能接触消毒剂和抗菌药物。 标本必须注明姓名、年龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目等。标本采集后应按要求处理，立即送往病原学实验室，对于烈性传染病材料的运送需专人护送。,(一)血液标本 疑为菌血症、败血症和脓毒血症患者，一般在发热初期和高峰期采集，如已用抗菌药物治疗者，则在下次用药前采集。采样以无菌法由肘静脉穿刺，成人每次10-20ml，婴儿和儿童为1-2ml，血液置于盛有抗凝剂聚茴香脑磺酸钠无菌瓶中送检。大多数菌血症呈周期性，故血标本也需在24h内周期性收集，一般24h内收集2-3次血标本分别培养。,(二)脑脊液与其他无菌体液标本 无菌采集脑脊液，脑脊液通

3、常离心10000g lOmin，取沉淀作显微镜检查。引起脑膜炎的病原体脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等其抵抗力弱，不耐冷、容易死亡，故采集的脑脊液应立即保温送检或床边接种。胸水、腹水和心包液等因标本含菌量少宜采集较大量标本送检以保证检出Tc,(三)尿液标本 外尿道寄居有正常菌群，故采集尿液时更应注意无菌操作，常用清洁中段尿作为送检标本。对于厌氧菌的培养，采用膀胱穿刺法收集、无菌厌氧小瓶运送。排尿困难者可导尿，但应避免多次导尿所致尿路感染。,(四)呼吸道标本 鼻咽拭子、痰、通过气管收集的标本均可作为呼吸道标本。后者可避免正常菌群污染，为下呼吸道感染病原学诊断的理想标本。鼻咽拭子和鼻咽洗液

4、可供鼻病毒、呼吸道合胞病毒、肺炎衣原体、溶血性链球菌等病原学诊断。不合格的痰 标本(扁平上皮细胞25个低倍镜视野)富含上呼吸道正常菌群，在病原学诊断时需 加以注意。,(五)粪便标本 取含脓、血或粘液粪便置于清洁容器中送检排便困难者或婴幼儿可用直肠拭子采集。根据细菌种类不同选用合适运送培养液以提高阳性检出率，如副溶血弧菌引起腹泻的粪便应置于碱性蛋白胨水或卡一布运送培养液。一次粪便培养阴性不能完全排除胃肠道病原菌的存在，对于传染性腹泻患者需三次送检粪便进行细菌培养。对疑为寄生虫感染者，应尽快运送水样便，以保持原虫滋养体活力；若不及时送检，粪便标本置于含10甲醛和聚乙烯醇的小螺口塑料容器内保存。,(

5、六)泌尿生殖道标本 根据不同疾病的特征及检验目的采集不同标本，如性传播性疾病常取尿道口分泌物、外阴糜烂面病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物和前列腺液等。对生殖道疱疹常穿刺疱疹液，盆腔脓肿者则于直肠子宫陷凹处穿刺脓液。怀疑衣原体感染的标本不应使用木柄拭子，因为木质对该病原体有毒性作用。除淋病奈瑟菌保温 送检外，所有标本收集后40保存直至培养。,(七)创伤、组织和脓肿标本 对损伤范围较大的创伤,应从不同部位采集多份标 本。采集部位应首先清除污物,以碘酒,酒精消毒皮肤,防止表面污染菌混入标本影响 检测结果。开放性脓肿的采集,用无菌棉拭采取脓液及病灶深部分泌物。封闭性脓肿,则以无菌干燥注射器穿刺抽取;疑

6、为厌氧菌感染者,取脓液后立即排净注射器内空气， 针头插入无菌橡皮塞送检,否则标本接触空气导致厌氧菌死亡而降低临床分离率。用于病毒检测的组织标本宜放在有灭菌盐水纱布的培养皿内或病毒运送培养基内运送,用匀浆管匀浆、离心、过滤后,作病毒分离鉴定。,(八)血清标本 用于检测患者特异性抗体效价以辅助诊断感染性疾病。采集血液 置无菌试管中， 自然凝固、血块收缩后吸取血清，56 加热30min以灭活补体成分。灭活血清保存于20。,检测方法 由实验技术直接或间接获得病原体及病原体结构成分，是确诊感染性疾病的一个重要依据。临床实验室中细菌性疾病以培养分离技术为主，病毒性疾病以免疫学方法为主。,(一)直接显微镜检

7、查 标本直接涂片、干燥、固定后染色，或经离心浓缩集菌，涂片染色，置光学显微镜下观察病原体的形态、染色性或观察宿主细胞内包涵体的特征。另一种方法是采用悬滴法或压滴法，在不染色状态下借助暗视野显微镜或相差显微镜观察病原体的生长、运动方式、螺旋体形态和运动。湿式涂片有助于寄生虫虫卵检查。直接镜检结果对病原学诊断具有一定意义，尤其是无菌体液的直接镜检更具有诊断价值， 如脑脊液涂片中查见革兰染色阴性肾形双球菌，结合患者发热、喷射状呕吐、剧烈头痛和脑膜刺激体征，可作出流行性脑脊髓膜炎的诊断。,那些有正常菌群寄居的腔道分泌物，涂片镜检虽不能确定诊断，但对进一步检出的步骤、采用的方法和分离鉴定病原体所需培养基

8、有重要提示作用，如在米泔水样便的悬滴片动力检查，发现有运动活泼的鱼群样弧菌，常提示弧菌科细菌感染，可进一步用碱性蛋白胨水增菌，分离接种于硫代硫酸盐一柠檬酸盐一胆汁一蔗糖(thiosulfatecitrate-bile salts-sucrose，TCBS)选择培养基。组织标本和疱疹分泌物涂片经瑞特染色后，查见多核巨细胞和核内嗜酸性包涵体可早期诊断疱疹病毒感染。临床上不常规应用电镜检查，但对某些病毒感染有确诊价值，如婴幼儿急性胃肠炎腹泻粪便电镜下查见车轮状的双层衣壳病毒颗粒即可诊断为轮状病毒感染。常用的电镜技术有超薄切片标本电镜观察、负染标本电镜观察和免疫电镜技术。,(二)病原体分离、培养和鉴定

9、 分离培养是病原学检验中确诊的关键步骤，分离出病原体后，才能进一步鉴定病原体和作药敏试验。 分离培养细菌，应根据可疑菌生长培养特性，选择合适的培养基，提供合适的气体条件、温度和pH，使细菌在体外人工培养基中得以生长、繁殖形成菌落。根据菌落性状(大小、色泽、气味、边缘、光滑度、色素、溶血情况等)和细菌的形态、染色性，检测细菌生化反应结果和血清学试验，可对分离菌作出鉴定。为了尽快地对分离菌作出检验结论，应选择可靠而适用的特征作为鉴定指标，同时也可借助于微量鉴定系统，快速简便鉴定分离菌。,对于不能人工培养的病原体，如病毒、立克次体、衣原体，可将标本接种易感动物、鸡胚或行细胞培养，进行病原体分离。接种

10、动物后，可根据动物感染范围、动物发病情况及潜伏期，初步推测为某种病原体。接种于鸡胚的病毒，根据不同接种途径的敏感性及所形成的特殊病灶，有助于初步鉴定。进行细胞培养的病毒，因病毒在细胞内增殖后，可引起细胞病变或红细胞吸附、干扰现象、血凝性质等特性以缩小病毒的鉴定范围，最后用血清学方法作最后鉴定。,(三)病原体抗原检测 用已知抗体，借助免疫荧光技术、酶免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验等技术检测标本中未知的病原体抗原即为病原体的抗原检测。病原体抗原有细菌菌体抗原、鞭毛抗原、毒素、侵袭性酶、病毒的衣壳蛋白、包膜抗原等。病原体的抗原成分检测有助于早期诊断感染性疾病，阳性结果提示某种感染性病原体的存在

11、，但对那些存在正常菌群的标本，需考虑共同抗原引起的交叉反应，必须在有严格对照试验和排除试验时，对阳性结果才能作出正确判断。,抗原检查诊断价值常随不同标本各异。若在无菌体液、血液等标本中，检测出特异性病原体抗原，有诊断价值，如脑脊液中查到脑膜炎奈瑟菌抗原可诊断为流行性脑脊髓膜炎；若在宫颈拭子或男性尿道拭子检出淋病奈瑟菌或沙眼衣原体抗原有诊断意义，因为这些标本中没有或很少有其他微生物存在；若在肛拭中检出病原体抗原，则因肛拭中存在有多种微生物，可因交叉抗原存在而不能肯定诊断。使用特异性好、效价高的单克隆抗体尤为重要，在有严格的对照和排除试验时，选择和制备完好的细胞标本，检测只能在活细胞内增殖的病毒或

12、立克次体、衣原体，阳性的结果可作出准确的病原学诊断。,(四)病原体核酸检测 核酸检测技术主要有聚合酶链反应(PCR)和DNA探针杂交技术。 PCR是将待检标本经细胞裂解液裂解后，在加有引物、四种三磷酸核苷、TaqDNA聚合酶和含Mg，、缓冲体系中，经变性、退火、延伸三个不同反应温度进行多次循环，再将扩增DNA产物通过琼脂糖凝胶电泳染色法、Southern印迹法、酶谱分析法和序列分析法四种方法之一，检测出病原体的核酸。PCR只需在简便条件下，在短短数小时内可将病原体基因或DNA片段特异地扩增几十万倍。,它已广泛应用于感染性疾病的实验室诊断尤其是那些不易分离培养的病原体。由于PCR具有很高的敏感性

13、，试验影响因素很多，不适当的标本处理，外源性和内源性 蛋白酶、核酸酶、DNA多聚酶抑制剂等均可造成假阴性反应。反应体系中极微量待 测DNA序列的污染均可产生假阳性结果，故操作者必须制订严格的工作程序防止污 染发生，并设立阴性对照。,将放射性核素或非放射性物质标记的已知序列核酸单链探针和固定在固相载体上的标本中病原体核酸退火形成双链杂交体，通过杂交标记物的检测，鉴定标本中的相应病原体基因，此为核酸杂交法。杂交方法以固相法为多，其技术有斑点杂交、Southen印迹法、原位杂交法和Northen印迹法等。杂交信号的检测常用显色法、放射自显影、放射性核素脉冲数测量和发光法。核酸杂交法适用于目前尚不能分

14、离培养或很难分离培养的微生物检测。,(五)病原体抗体检测 是指用已知病原体抗原检测患者血清中相应抗体的方法诊断感染性疾病。常用的方法有凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、间接免疫荧光技术、放射免疫测定、酶联免疫吸附试验等。大多数的抗体检测试验中，所用的抗原为病原体特异性抗原(整个病原体、病原体成分或产物)，有一部分抗体检查使用病原体的共同抗原，如诊断梅毒病使用牛心提取的类脂抗原，这类试验为非特异性试验。,抗体检测的价值常用敏感性、特异性和预测值来评价。临床医生必须根据其目的要求达到确诊某一疾病、排除某一疾病或监测疾病治疗的效果。理论上所希望的一个高度敏感的导致高阴性预测值和高度特异的导致高阳性预

15、测值的试验并不存在，实践中常根据诊断的两个基本目的，权衡敏感性和特异性选择试验项目。当目的为排除某一疾病时，即选择高敏感度、高阴性预测值的试验；当目的为确诊某一疾病时，即选择高特异度、高阳性预测值的试验。,细菌感染检查,细菌感染检查 一、检验特点 各种细菌都有一定的形态、染色特性、生化反应和抗原结构。通过对标本直接显微镜检查、病原菌的分离培养鉴定、病原菌的抗原检测、核酸检测和细菌感染后机体免疫应答产物的测定及药物敏感性试验，对细菌感染性疾病可作出及时、准确的病原学诊断。在检查项目中，尤以细菌分离培养鉴定为主，在无菌标本中检查到细菌则此细菌为感染的病原，如血液中检查到细菌，诊断为败血症；脑脊液中

16、查到细菌即为细菌性脑膜炎。存在有正常菌群的标本中检查到细菌，应区分是正常寄居的菌群或是致病的细菌，常需作细菌定量计数，根据细菌数判断是否为感染的病原菌，如尿液中分离到革兰阴性杆菌，若定量在10ml cfu菌落形成单位菌数以上，则为尿路感染。,检测项目,染色标本显微镜检测 1革兰染色 革兰染色(Gram stain)和显微镜检查(microscopic examination)是细菌感染快速诊断的简单方法，用于各种渗出液、抽出液、尿液、脑脊液和血液的细菌检查。2。抗酸染色 抗酸染色(fast-acid stain)适用于痰标本分枝杆菌检查，对诊断结核病具有重要意义。 不染色标本显微镜检测 l。湿

17、片悬滴法检测(examination of wet mount)借助暗视野显微镜或相差显微镜观察标本中病原菌的生长和运动方式，有助于疾病病原体诊断。2。湿片细菌计数 湿片高倍视野镜检尿液，若每高倍视野发现1个或1个以上细菌有诊断其为尿路感染病原菌。,分离培养 分离培养(isolation and culture)是细菌学检查的关键，其目的是从临床标本中找出活的细菌，进一步进行鉴定，确定其致病性和耐药性，指导抗菌治疗和预测治疗效果。不同细菌培养所需条件及生长特征各异，因此必须根据临床要求、送检标本的性质和培养目的，选用不同的培养基，不同的接种方法和培养条件。,鉴定技术 鉴定(identifica

18、tion)是指对标本中分离的细菌按分类原则放入某系统合适位置，是细菌分类的实验过程。细菌鉴定技术有生化鉴定(biochemical identi-fication)、血清学鉴定(serologic identification)、在常量生化鉴定技术基础上发展而来的数码鉴定(numeral identification)和自动化仪器鉴定(automated identification)。 核酸检测 PCR技术适用于细菌感染诊断，尤其是人工培养基不能生长的细菌和营养要求高不易培养的细菌，如麻风杆菌、幽门螺杆菌、嗜肺军团菌。对生长缓慢的细菌(结核分枝杆菌)或一种临床症状内多种细菌感染的诊断也可采用

19、PCR方法。,抗体检测 抗体检查适用于经抗生素治疗后或慢性细菌性感染， 因为此时病原体的分离培养常为阴性，可用抗体检测诊断感染。由于感染后的抗体反应相当复杂，因此抗体检查结果需考虑其特异性和敏感性。 一次性较高效价抗体并不能完全说明问题，应同时检测双份血清(1份为急性期， 1份为1周或数周后的恢复期)，效价4倍增长，说明曾有感染。因此，血清学诊断更应用于流行病学调查。利用血清学方法诊断细菌感染有肥达反应、抗链球菌溶血素“0”试验、检查兔热病和波浪热的凝集反应、检查军团菌病的荧光抗体试验等。,细菌毒素检测 1外毒素(exotoxin)检测 有生物学法、免疫血清学法和PCR法及自动化仪器检测法。

20、2。内毒素(endotoxin)检测 革兰阴性菌的极小量内毒素(1ipopolysaCCharidC， LPS)可引起广泛生物学作用，因此对LPS检测有利于判定细菌感染严重程度，及早预防和发现内毒素休克的发生。,细菌感染检查项目的选择和应用 显微镜检查、分离培养、血清学试验、生化鉴定和PCR等核酸检测是细菌感染诊断的基本方法，无菌性标本(血液、脑脊液、体腔渗出液)，采用显微镜检查和直接药敏试验可作出病原学诊断和提供用药指导；脓血便，革兰染色无诊断意义，需用标记抗体染色镜检获初步报告，再经选择培养基分离培养，挑取可疑菌落作玻片血清凝集，阳性者可初步鉴定，配套生化反应可作出最后报告；尿液标本，显微

21、镜检查可初步估计细菌菌量，作出初步诊断，再经分离培养鉴定后和菌落定量计数可作出病原学诊断；痰标本，采用显微镜检查，判定是否为合格标本，经过接种培养，检出致病性菌落，再进行鉴定和药敏；对临床指征明确，只为获得病原学证实的细菌，常采用对某一种细菌检验程序。,病毒感染检查,真菌感染检查,真菌的抗体检测,1. 曲霉菌免疫扩散试验(immunodiffusion of Aspergillosiss) 血清学检测阳性者其培养结果阳性可考虑给予临床确诊。 2.芽生菌病血清学试验(serologic test of Blastomycosis) 包括有补体结合试验、免疫扩散试验和酶免疫试验。 3念珠菌病血清学

22、试验(serologic test of Candidiasis) 至今抗体检测无临床诊断价值。 4 球孢子菌病补体结合试验：具有临床诊断价值。对有症状患者而其双份血清抗体效价4倍增长或效价1：16可作出诊断。 5隐球菌病血清学试验(serologic test of Cryptococcosis) 抗体检测无临床意义。利用胶乳凝集试验检测脑脊液中隐球菌的多糖抗原具有诊断隐球菌性脑膜炎的价值。 6组织胞浆病血清学检测(serologic test of Histoplamosis) 补体结合试验单份血清抗体效价高于1：32或双份血清效价4倍增长可作现期感染诊断。 7孢子丝菌病胶乳凝集试验(1a

23、tex agglutination of Sportrichosis) 抗体效价高于1：80有诊断价值。,真菌感染检查项目的选择和应用,直接显微镜检查是诊断浅部真菌感染的主要手段，通过涂片镜检查找菌丝和孢子可作出真菌感染诊断，再经培养、菌落性状观察，镜下孢子和菌丝形态特点，可作出对菌种的鉴定。深部真菌感染常取标本作培养，在观察培养物性状后，需借助理化特性作出菌种鉴别。血清学方法对深部真菌感染及二相型真菌感染具有一定诊断价值，依各种不同血清学方法对不同真菌有不同诊断价值。分子生物学技术是近年来发展的技术，目前较为成熟的rDNA探针已有试剂盒应用于诊断。,寄生虫感染检查,检测项目 (一)显微镜检查

24、 1。粪便检查 新鲜粪便生理盐水涂片检查滋养体或包囊，根据滋养体和包囊形态特点，可诊断肠道阿米巴病、贾第虫病，查找带绦虫虫卵及孕节可作出带绦虫病诊断；粪便抗酸染色检查隐孢子虫卵以诊断隐孢子病，同时也可作金胺“。”染色粪便涂片、荧光显微镜检查，可作为隐孢子虫病的筛选；粪便重力沉淀法检查虫卵或孵化法检查毛蚴可有助于血吸虫病诊断；粪便湿片法查找虫卵是诊断肠道蠕虫感染的可靠方法，包括对蛔虫病、鞭虫病、类圆线虫病和钩虫病。 2十二指肠引流液检查 对粪便阴性者，可取十二指肠引流液直接镜检或离心浓集后镜检，其阳性率较高，可用于贾第虫病、阿米巴病、梨形虫病及隐孢子病检查。,3血液涂片检查 分血薄片和厚片检查，

25、血液涂片检查是确诊疟疾唯一根据，传统上用薄厚同时涂片方法，吉姆萨或瑞特染色，先在厚片中快速查找疟原虫，再在薄片中查找细胞内疟原虫。巴贝虫病的实验诊断也有赖于血涂片显微镜检查，形态颇似恶性疟原虫，不同的是无色素和配子体，在同一个红细胞内可见不同发育阶段的多个巴贝虫。 4痰和支气管灌洗液检查 标本用粘液溶解剂处理后离心浓缩，沉渣涂片，染色镜检，乌洛托品染色后见棕褐色包囊和特征性括弧样结构，具有诊断价值。 5。阴道、尿道、前列腺分泌物检查 保暖的新鲜标本生理盐水涂片见运动活泼虫体，也可用标本涂片固定后吉姆萨染色，同时还可观察微生物病原体。 6活检组织检查 组织切片或压片染色镜检，观察贾第虫原体、弓形

26、虫游离或胞内滋养体、利什曼原虫的利一杜体，可对上述寄生虫感染作出诊断，直肠活组织检查、厂叮橙染色或氯化三苯四氮唑一茚三酮复染法可检出血吸虫虫卵并能鉴别虫卵的死活。,(二)抗体检测 利用血清学方法检查各类寄生虫的虫体抗原或机体对此产生的抗体，随着单克隆抗体的出现，使用比先前广泛。 (三)核酸检测 应用DNA探针检测标本中寄生虫DNA或RNA，目前已有：“P标记恶性疟原虫全基因组DNA可检出00001虫体浓度；国内建立的杜氏利什曼原虫kDNA检测利什曼原虫；克氏锥虫克隆基因组DNA和全基因组DNA可检出样品中30个锥虫DNA；筛选出弓形虫特异性DNA片段的克隆，通过斑点杂交检测出500pg弓形虫D

27、NA；pBM68和pBM工5的两种丝虫病诊断探针可检出300500pg马来丝虫基因组DNA。 近年来发展的PCR技术，已应用与锥虫病、利什曼病、肺孢子虫病、肠球虫病、贾第虫病和弓形虫病等诊断。,医院感染检查,医院感染(nosocomial infection)是指患者在入院时既不存在，亦不处于潜伏期，而在医院内发生的感染，包括医院内获得而在出院后发病的感染。随着医疗技术发展，各种侵入性操作和器官移植推广，化疗、糖皮质激素、抗生素等广泛应用，医院感染是当今医学领域中的重要问题。,医院感染流行病学 (一)病原学 细菌为最常见的病原体，细菌的种类与分布因感染类型、医院类别、患者基础疾病和治疗措施不同

28、各异。 (二)感染源和易感人群 引起医院感染的病原体来源于住院病人、医务人员、探视者、陪住人员，来自于医院环境及未彻底消毒灭菌的医疗器械、血液制品的污染菌等，大多为条件性致病菌，且有程度不同的耐药性。 (三)常见的临床类型：1 .下呼吸道感染 为我国最常见的医院感染类型。 2尿路感染 住院期间有尿路器械操作史的患者，常由于保留导尿系统的交叉污染造成导管外上行性感染，常以大肠埃希菌、变形杆菌为主。3手术切口感染 清洁伤口感染大部分为外源性感染，医务人员手指皮肤的接触传播起了十分重要的作用。4。胃肠道感染 主要见于使用抗生素所致肠炎，如金黄色葡萄球菌和艰难梭菌所致伪膜性肠炎。5。血液感染 主要为菌

29、血症，可由静脉内输液、血液透析等引起，也可源于外科手术、下呼吸道感染或皮肤感染。6皮肤和软组织感染 由金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌等引起的蜂窝织炎、褥疮和烧伤感染等。,医院感染病原学监测 (一)标本采集和送检原则 标本采集和送检基本原则：发现医院感染应及时采集标本做病原学检查；严格执行无菌操作，避免正常菌群污染；应立即送检，床边接种可提高检出率；对混有正常菌群的污染标本应作定量(或半定量)培养，以判别是感染菌或定植菌；对分离到的病原菌应作药敏试验，提倡“分级报告”(即分阶段报告涂片镜检、初步培养、直接药敏、初步鉴定、最终鉴定与药敏结果)和“限时报告”(涂片报告2h，普通培养3天)。 (二)涂片

30、显微镜检查 常用于下呼吸道医院感染的痰标本，操作简便、结果快速，可取得最早期病原学初步诊断。 (三)分离、培养和鉴定 该法操作简单，结果直观，特异性高，同时可作药物敏感试验指导临床用药。,医院环境细菌监测和消毒灭菌效果监测 (一)医院环境污染的细菌监测方法 污染的环境是引起医院感染的危险因素，必须定期对空气、物体表面、医务人员手部和消毒灭菌效果等进行监测。 (二)消毒灭菌效果监测方法 消毒灭菌的效果监测包括对高压蒸气灭菌效果的监测、紫外线杀菌效果的监测和化学消毒剂的监测。前二者的灭菌效果监测常用生物学指标检查，化学消毒剂监测的目的是了解使用中消毒剂的细菌污染程度和消毒剂的最小杀菌浓度，杀菌率和

31、杀菌指数的测定。 医院感染监测是预防医院感染的主体，只有对病人、医务人员、医院环境进行深入细微的监测，才能采取针对性和有效的防治措施。 监测包括全面综合性监测和目标性监测。前者对医院各个科室、病房进行全面检查分析；后者是重点针对感染严重的科室，如手术室、产房、ICU、母婴同室、血液透析中心、供应室等定期进行微生物指标监测、消毒灭菌效果监测、医院感染病原学诊断、抗生素敏感资料动态分析等。监测结果的分析可及时发现医院感染，杜绝感染蔓延，研究医院感染发病机制，制定有效感染措施。,性传播疾病检查,性传播疾病(sexual transmitted disease，STDs)简称性病，是一组通过性行为传播

32、的，侵犯皮肤、性器官和全身多脏器损害的感染性疾病，有艾滋病、梅毒病、淋病、软雹下疳、性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器念珠菌等20余种疾病。,性传播疾病检查项目的选择和应用,一，艾滋病检查项目的选择和应用 抗体检查是目前最常用手段，主要方法有 ELISA，快速凝集筛选试验、Western印迹试验、放射免疫测定试验和间接免疫荧光试验。常以ELISA方法进行血清HIV抗体初筛、Western印迹法确证。由于ELISA可能存在的非特异性假阳性反应，常需进行2次、甚至3次血清学测定，如果3次均为阳性，可用确证试验，阳性者表明该患者感染了HIV。 二，梅毒病检查项目的选择和应用 暗视野显微

33、镜检查；二期和三期梅毒常用抗体检测方法，荧光密螺旋抗体查见组织切片中的荧光标记；新生儿梅毒的确罩 诊是在脐带、胎盘、鼻分泌物或皮肤病损区分泌物直接镜检查见梅毒螺旋体。,三，淋病检查项目的选择和应用 淋病奈瑟菌培养结果准确可靠、阳性即可确诊，故分离培养为广泛采用的实验项目。生殖道分泌物涂片、革兰染色镜检查见多形核白细胞内革兰染色阴性双球菌有诊断意义， 四，非淋菌性尿道炎检查项目的选择和应用 衣原体感染的尿道炎最常采用直接免疫荧光技术。斑点免疫吸附试验适用大批量标本检测。支原体感染检查以支原体的分离培养和定量计数为主要方法。 五，生殖道疱疹和尖锐湿疣检查项目的选择和应用 病毒抗原直接检查和查找多核

34、巨细胞、胞核内嗜酸性包涵体或用直接免疫荧光技术检查病变组织中的HSV和HPV抗原为主要的检查手段。,细菌耐药性检查,目前由于抗生素的广泛应用，及抗生素使用的不规范细菌通过其染色体基因的突变、质粒介导和转位因子插入，导致细菌细胞外膜对药物通透性改变、药物灭活酶和钝化酶产生、药物作用靶位改变和代谢改变，使细菌产生耐药性，感染性疾病治疗遭到失败。细菌耐药性的日趋严重，临床迫切需要进行抗微生物药物敏感性试验。,常用敏感性试验的方法 ：按习惯分成以下二组。预测治疗效果的试验：1、测量药物最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration，MIC)的稀缰法；2、测量含药纸片周围抑菌圈直径大小的KB纸片琼脂扩散法；3、E试验；4、最低杀菌浓度(minimal bactericidal concentration，MBC)测定；5、联合药物敏感试验。 监控治疗效果试验：1、血清抗菌药物浓度测定；2、血清杀菌滴度测定。,耐药性监测的特殊试验 1、-内酰胺酶检测 2、超广谱-内酰胺酶检测 3、琼脂筛选试验 4、耐药基因检测,