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1、同型半胱氨酸(Homocysteine),-在健康和疾病人群中的应用,杭州师范大学附属医院 陈兆军,Homocysteine（Hcy）,Du Vigneaud 1932 首次提出Hcy McCully 1969 首次在基因紊乱的患者中提出血管组织病理学 ， 叫高胱氨酸尿症 提示高Hcy可能引起早期血管疾病 Wilcken CVD 患者Hcy水平升高 通过补充维生素来纠正 Boushey 升高5mol/L ，在女性中风险性增加80%，而男性60%,Kilmer McCully,Du Vigneaud,Jacobsen DW, Ed. Robinson K, Homocysteine and Va
2、scular Disease, 2000, 15-39,带有巯基 的一个氨基酸 巯基是有活性的，可以进行氧化还原反应 Homocysteine 不包含在饮食蛋白中 从蛋氨酸 中形成 代谢依赖于几种B族维生素,Homocysteine（Hcy）,Ueland PM et al., J Nutr, 1996, 126(4 Suppl), 1281S-4S,Homocysteine（Hcy）,维生素B缺乏 B6, B12, 和叶酸对于参与Hcy的代谢的酶是必需的。 酶缺乏 酶基因编码的基因缺失，例如MTHFR 和 MS，因为这些酶参与Hcy代谢途径。 肾功能不全 肾功能不全患者Hcy水平非常高，由于
3、肾脏清除Hcy减少。 药物作用 某种药物如甲氨蝶呤和环孢霉素 A 可以引起Hcy升高。,什么因素可以引起血液中Hcy升高？,年龄 随着年龄的增长Hcy升高 性别 男性平均Hcy水平高于女性 生活方式 精神压力大, 体力活动缺乏, 吸烟, 饮用咖啡引起Hcy升高 健康状况 健康人群中Hcy水平低，但是亚健康人群会升高,什么因素可以引起血液中Hcy升高？,Hcy 和疾病的关系,叶酸和 B12 缺乏 这些是常见的，并且与多种疾病相关 tHcy 是这些维生素缺乏症的一个敏感指标 心血管疾病 (CVD) 增高的tHcy水平预示着 CVD 事件和死亡 增高的tHcy或许 是引起 CVD的病因 认知能力下降
4、, 痴呆,精神疾病 增高的tHcy或低水平的B族维生素是这类事件的病因/促进因素。 怀孕并发症 先兆子痫 , 低出生体重, 死胎常常是由于胎盘中的血管疾病引起。tHcy 或许是一个病因。,Hcy 和疾病的关系,1. At least one in two people die prematurely from potentially preventable diseases and more than one in two people have elevated homocysteine levels. 2. According to WHO estimates, each year 16.
5、7 million people die globally from cardiovascular disease. Those with dangerously high homocysteine levels increase their risk of a heart attack by 50%. 3. 32 million heart attacks and strokes occur globally each year with 12.5 million resulting in death. 40% of deaths due to stroke were associated
6、with high homocysteine levels. 4. Worldwide, nearly 18 million people suffer from a form of dementia, of which Alzheimers disease accounts for 55%. A homocysteine level above 14mol/L plasma amplifies your risk of developing Alzheimers disease by 150%.,Hcy 和疾病的关系,降低Homocysteine水平,吃优质蛋白质 每天5种水果和蔬菜 不要往
7、食物中加盐 减少茶和咖啡摄入 限制酒摄入,减压 戒烟 补充维生素（复合维生素） 吃蒜 锻炼,Patrick Holfords H Factor,Hcy在临床决策中建议的Cut-Off值,上图表示homocysteine的不同cut-off 值. 从蓝色到红色转变表示临床决策和采取行动的紧急程度增加。,Hcy浓度 (mol/L),年龄和性别,Ueland PM et al., Ed. Robinson K, Homocysteine and Vascular Disease, 2000, 59-84,Hcy 中风的独立风险因子？,The HOPE-2 研究表明补充叶酸，会使中风危险性降低 24%
8、,VISP 表明补充叶酸，会使 中风危险性减低21%,8 个相关实验进行的Meta-分析提示叶酸治疗可以降低中风危险性 18% . 长时间治疗且无中风病史的，结果更有意义,Framingham 研究中，1092 例 ( 无痴呆) 进行了平均8年的随访 111例患者发展为痴呆，包括83例已经确诊为老年性痴呆 在该研究中检测了Hcy水平,“血浆Hcy水平升高对于发展为痴呆和老年性痴呆是一个强大的，独立的危险因子”,Source: N Engl J Med., 346 (7), 476-483 (2002),血浆Hcy升高5 mol/L ，患老年性痴呆的危险性增加40%,Hcy & 老年性痴呆,美国
9、心脏病协会推荐内容,检查 tHcy有三个主要的指征: 1. 为诊断高胱氨酸尿。 2. 为识别B12和叶酸缺乏或有发展成为B12和叶酸缺乏的风险的人群。 3. 为评估tHcy作为心血管疾病和其他疾病的危险因子。 不建议对未进行选择的人群进行筛查。 越来越多的人达成共识，建议在高危患者和他们的兄弟姐妹中检测。此外，建议用Hcy测试来评估有心血管疾病患者的总的风险状况。,HCY 检测建议人群,结 论,tHcy水平升高，患严重疾病风险性增高 tHcy水平低，是健康的标志,全球 Hcy测试数量 2002 - 2009,Hcy测试的历史,Axis-Shield 是全球Hcy专利持有人 Axis-Shiel
10、d 在1995年第一次将免疫方法测试Hcy推向市场。 Axis-Shield 生产免疫测试，酶法(临床生化) &免疫沉淀反应的检测形式 Axis-Shield 合作伙伴如下: Siemens Centaur, Immulite, BN systems Abbott IMx, AxSYM, Architect IL Coagulation instrument range,Homocysteine 检测方法,HPLC 准确，但耗费时间较长，需要设备，不适用于检测大批量样本 ELISA 操作简便，但不适用于检测大批量样本仅Axis-Shield一家 免疫测试平台 在不同公司的大型的全自动设备上，如
11、西门子和雅培，操作简便 临床生化平台 可用于任何临床生化检测系统全自动的或半自动的,Axis-Shield Hcy ELISA,准确 可信 可调整 与 HPLC (参考方法)的相关性 与其他免疫方法的相关性 全球专利持有人,Homocysteine 临床生化 日新月异的趋势,方法学之间 CAP 数据 2008 vs 2009,临床生化方法上，增加了9%,方法学之间 Scand. EQA 数据 2008 vs 2009,临床生化方法上，增加了5%。,方法学发展 免疫到生化,在过去的2年里，全球有一股动力，将免疫平台上检测的Hcy推向常规的临床生化仪器进行检测。 酶法Hcy检测： 性能上与免疫方法
12、等同 降低TAT时间 适用多种仪器 改善了试剂稳定性 便于使用,Homocysteine 试剂,液体稳定剂型 试剂预先混匀 EDTA, 肝素Li, 血清 & SST 都可用 NIST SRM 1955标准化 机上稳定30天 定标稳定30天 性能上与金标准方法等同 可供应不同包装规格的试剂包,适用的机型,适用机器如下: Olympus AU 系列 Roche Modular ANALYTICS Hitachi 917/911 Roche Cobas 6000 Bayer Advia 1650 Cobas Mira Architect Beckman Cx4/5/7 and Synchron LX
13、 Siemens Dimension RxL,特点 & 益处,准确性,Olympus AU400上建立的准确性数据,定标稳定性,定标期限高达30天,机上稳定性-Olympus AU400,敏感度和特异性,分析灵敏度 0.42mol/L,性能 vs 免疫测试,与其他不同的样本类型，展示出非常好的相关性,性能 vs. 其他免疫测试,AS Homocysteine 试剂包室间质评,所有的 ASD 生产的产品参与了下列机构的质评 : 英国 NEQAS 德国 Instand 美国 CAP 北欧 Homocysteine ECAT 纽约 DOH Wadsworth Center 其他 客户的特定需求,试剂
14、盒组成,Kit 规格 Liquid Stable (LS) 2-Part 试剂 FHRWR100/200/1000 100/200/1000 试剂包 2 个水平的定标液 质控物 FHCY200 低,中, 高值 (3x1.5ml),试剂 1（R1）：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH ), 乳酸脱氢酶(LDH) ,丝氨酸，三羟甲基，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，叠氮钠，还原剂TECP 试剂2（R2）： 循环酶(CBS)、胱硫醚-裂解酶(CBL)、叠氮钠,检测原理,还原：,检测原理,游离的Hcy经CBS催化（R2中）与丝氨酸（R1中）反应生成胱硫醚；然后胱硫醚在CBL酶（R2中）的作用下分解生成Hcy、丙酮酸盐和氨；之后丙酮酸盐通过乳酸脱氢酶（LDH） （R1中）转换成乳酸盐，用NADH （R1中）作为辅酶。NADH转换成NAD+的转化率直接与Hcy的浓度成正比（A340nm）。,操作步骤,根据生化仪厂家、型号不同，样本量和血样量略有不同。,总结,优化的2包试剂 酶法检测 已经确立并得到认可的技术 优越的性能 可以进行调整，针对各种临床生化平台量身定做。,www.homocysteine.org.uk,THANK YOU FOR YOUR ATTENTION !,