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1、动 物 生 理 学 实 验 2012.10,主讲教师： 魏 香 电话：62781668 手机：13691588816 邮箱： 协助指导教师：李英姿 电话：62781668 手机：13641311711 邮箱：,助 教,王卓然 博士： 72241，15901041535， 姜敬非 博士： 96270，13439820924, ,序论 反射弧分析及反射时测定 坐骨神经-腓肠肌标本的制备,本节课内容:,主要参考资料,生理学实验指导。魏香，谢佐平，苏付荣，编著。清华大学出版社，2005。 生理学实验（第三版）。谢景田、刘燕强、崔庚寅主编。高等教育出版社，2009. 动物生理学实验。张才乔主编。科学出
2、版社，2008。 生理科学实验教程。陆源，夏强主编,浙江大学出版社，2004。 http:/ 平时成绩占70，期末考试成绩占30。 * 平时成绩包括课上操作（20%）和实验报告（80%， 包括预习报告和实验结果报告） * 期末考试为实验设计，包括设计报告、设计内容 完成情况、设计总结报告,实验内容安排,实验设计立题范围的选择： 对原有教学实验的改进或扩展； 建立一种新的生理过程的实验动物模型并对其进行评价； 提出一种假说并对其进行验证； 某一因素在某种生理过程中的作用。 要求：以小组为单位 设计报告完成截止日期： 第十一周（11月19、20日）,部分设计题目,反射弧组成分析实验 蟾蜍坐骨神经腓
3、肠肌标本制备方法改进 探讨乙醇对神经的影响 心脏不同部位的自动节律性不同 常见饮料对心脏功能的影响 蛙心灌流拓展 双蛙心灌流 一种简易的家兔离体心脏灌流方法 * 肝的解毒功能 温度对家兔血压和呼吸的影响 氧气含量对家兔呼吸运动的影响 家兔提睾反射及提睾肌收缩的调节,实验课的总体要求,遵守实验室规则、尊重客观事实 主动学习、分工合作、独立思考 实验室安全,实验课要求,实验课前做好预习，参照网络课件，写出预习报告： 预习报告内容： 实验题目 本次实验要解决的主要问题 利用的主要理论知识 需掌握的实验技术 提出一个科学问题 提交预习报告时间： 上课前一天，可交纸版，也可在网络学堂提交。,实验课要求,
4、实验课中： 按时上课，不迟到，不早退，不随便请假。 分工合作，积极参与实验的操作、观察和记录。不进行与实验无关的活动。 节约试剂和药品，爱护实验器材，如出现故障，及时报告老师。 控制实验时间，在规定的课时内完成相应的实验任务。,实验课要求,实验课后： 将实验用品擦洗干净、归位，经老师查验无误后方可离开。 值日生做好实验室清洁工作。 整理实验记录，认真书写实验报告，按时通过网络学堂上交报告（下一次上课前）。,实验报告的书写,总体要求： 独立完成，语句通顺，文字清楚，表达简洁明了。 一份完整的实验报告应包括以下几部分： 姓名 班次 组别 同组者 日期 实验序号及题目 实验目的及意义 实验对象及器材
5、 实验方法及步骤 实验结果 分析与讨论 结论,生理学的基本概念,生理学（Physiology）是生命科学中的一个分支，它以生物机体的功能为研究对象。 生理学的任务就是要研究这些生理功能的发生机制、发生条件以及机体所处内、外环境的变化对这些功能所产生的影响，从而找到各种生理变化的规律。,动物生理学实验课的总体目的与任务,了解获得生理学理论知识的过程及方法，加深对生理学基本概念和基本理论的理解和巩固； 了解、熟悉或掌握生理学实验中常用的实验方法与技术； 了解实验设计的基本原则与过程； 培养严谨、客观的科学态度与创新意识以及良好的合作精神。,动物生理学实验中应掌握的基本实验方法与技术,生理实验软件及
6、相关配件的正确使用； 常用手术器械的正确使用； 常用实验动物的抓取、麻醉及基本操作技术； 双毁髓蟾蜍的制备； 蟾蜍坐骨神经腓肠肌标本的制备； 家兔动、静脉插管，气管插管，膀胱插管,实验用动物,蟾 蜍,家 兔,RM6240多道生理信号采集处理系统,主要实验记录设备,软件请在网络学堂下载并安装,实验1 反射弧分析及反射时测定,反射弧模式图 1 感受器； 2 传入神经纤维； 3 神经中枢；4 传出神经纤维；5 效应器,实验目的及意义,反射是指在中枢神经系统参与下的机体对内外环境刺激的规律性应答。 反射活动的结构基础称为反射弧，包括感受器、传入神经、神经中枢、传出神经和效应器。 在自然条件下，反射活动
7、一般都需要经过完整的反射弧来实现，如果反射弧中任何一个环节中断，反射即不能发生。,实验目的及意义,反射时是指从施加刺激到效应器产生反应所经历的时间。在一定条件和范围内，刺激强度越大，反射时越短。 以蟾蜍屈肌反射为例，学习并掌握测量反射时的方法，了解刺激强度与反射时的关系。 分析反射弧的组成，并探讨各部分在反射活动中的作用。,蟾蜍，蛙类手术器械一套，蛙板，铁支架，肌夹，玻棒，小滤纸片，纱布，培养皿，小烧杯，棉花，秒表 盐酸（0.2%, 0.5%, 1% ），2 % 普鲁卡因，清水,实验对象与器材,蟾蜍的抓取： 用右手拇指和食指夹住蟾蜍，用自来水稍加冲洗，去除表面的污物即可（不可搓揉，不可碰触其耳
8、后腺，以免有毒液射出）。 左手握蟾蜍，小指和无名指夹住后肢，拇指按压背部，中指放在胸腹部，用食指下压头部前端使头前俯。,实验步骤,实验步骤,脊蟾蜍制备： 右手持探针由头背侧前端沿正中线向脊柱端触划，当触到凹陷处（头前部，位于两个耳后腺之间），即枕骨大孔处，将探针垂直插入，左右摇动，切断脑和脊髓的联系，然后将探针向前刺入颅腔内，将探针左右摇动、旋转，捣毁脑组织。 保留脊髓完好。 为了实现快速有效地破坏脑组织，可以采用去上颌法，即用粗剪刀沿蟾蜍嘴角边缘将其整个上颌（包括脑组织）剪除。,实验步骤,分离坐骨神经： 将脊蟾蜍腹位固定于蛙板上，用手术剪剪开左侧大腿背部皮肤，分离肌肉和结缔组织，暴露坐骨神经
9、，在神经下穿一条丝线备用。,手术剪,反射时的测定： 用平头肌夹夹住脊蟾蜍下颌，悬挂于铁支架上。 用0.2 % HCl（培养皿中）浸泡刺激一侧后肢的最长趾趾端皮肤，同时启动秒表计时，当该侧后肢一出现收缩，即屈肌反射一出现，立刻停止计时，记录屈肌反射的反射时，将HCl浸泡部位用清水冲洗并拭干，重复测定屈肌反射的反射时三次，求平均值。 实验动物休息 2 min后，分别用0.5 % HCl，1% HCl 刺激同一后肢最长趾趾端皮肤各三次，记录反射时。与前一步骤进行比较。,实验步骤,反射弧组成分析 I： 用0.5 % HCl分别刺激二后肢的最长趾趾端皮肤，观察记录屈肌反射的反射时，之后立刻用清水洗净刺激
10、部位，并用纱布轻轻拭干水。 在右膝关节处将皮肤作一环形切口，剥去切口以下的全部皮肤。再用0.5% HCl刺激右后肢的最长趾趾端，观察记录结果，洗净刺激部位。 用小滤纸片浸1 % HCl，贴在该侧后肢环形切口以上的皮肤上，观察记录此侧是否出现反射活动，洗净刺激部位皮肤。,实验步骤,实验步骤,反射弧组成分析 II： 在坐骨神经上放一浸过2%普鲁卡因的小棉球，每隔1 min用0.5 % HCl测试左后肢的最长趾趾端皮肤，观察记录该侧后肢屈肌反射变化情况。 当左后肢屈肌反射刚刚不能出现时，立即将浸过1 % HCl的滤纸片贴在背部，观察左侧后肢是否发生搔扒反射，洗净刺激部位皮肤。 4.用探针捣毁脊髓，观
11、察各种反射变化情况。,关键技术,蟾蜍的抓取 脊蟾蜍制备 手术剪的正确使用,本实验需掌握的实验技术,脊蟾蜍制备 膝关节以下皮肤的剥离,注意事项,毁脑时不可伤及脊髓，以免破坏脊髓反射中枢。 分离坐骨神经应尽量向上，并尽量剪断与其相连的分支。 每次酸刺激条件应保持一致，刺激后应立即用清水洗净刺激部位，并用纱布拭干。 剥脱趾端皮肤要完全，若剩留少量皮肤会影响实验结果。,思考与探索,试自行设计另外一个实验，证明反射弧有五个部分组成。 请设计实验证明蟾蜍坐骨神经在反射活动中的具体功能。,实验2 坐骨神经腓肠肌标本的制备,实验目的及意义,蛙类坐骨神经腓肠肌标本是研究神经 冲动和肌肉收缩机能等实验最常用的实
12、验材料，制备此标本是动物生理实验的 一项基本但又非常重要的操作技术。 通过本次实验，学习破坏蟾蜍脑和脊 髓的方法，掌握制备蟾蜍坐骨神经腓 肠肌标本的技术。,实验对象与器材,蟾蜍，两栖类手术器械，蛙板，蛙钉，培养皿， 滴管，锌铜弓，烧杯，林格溶液，纱布，医用缝合线，玻璃分针，污物盘，眼科剪,实 验 步 骤,1. 破坏蟾蜍中枢（脑和脊髓） 制备脊蟾蜍后，将探针退回枕骨大孔，沿与脊椎骨平行的方向向后刺入脊椎，不断捻动探针，使之刺入整个椎管内，彻底捣毁脊髓。若中枢破坏彻底，动物则表现为肌肉松弛、四肢瘫软。 2. 剪去躯干上部及内脏 在脊柱胸段用金冠剪（粗剪刀）剪断脊柱。 沿脊柱切口向下剪开两侧腹部皮肤
13、、肌肉至耻骨处，将头、前肢、内脏及腹部软组织全部剪掉，放于污物盘，只保留下端脊柱和下肢。在腹侧脊柱两旁可看到腰骶神经丛。注意切勿触及或损伤坐骨神经。,实 验 步 骤,3. 剥后肢皮肤 左手持手术镊夹住脊髓断端，右手捏住断端边缘，剥掉全部后肢皮肤。将标本放于盛有林格溶液的培养皿内，将手和手术器械洗净。 4. 分离两腿 用粗剪刀剪去尾骨杆（骶骨），沿脊椎中线将脊柱剪开，再沿耻骨联合正中央剪开两侧大腿，使两腿完全分离（切勿伤及神经），将两腿浸于林格溶液中。,手术镊,实 验 步 骤,实 验 步 骤,5. 游离坐骨神经 1） 取一后肢，腹面向上（背位）固定于蛙板上，沿脊柱侧用玻璃分针轻轻勾起坐骨神经，逐
14、一剪去神经分支至股端。用金冠剪剪断脊柱，只保留一小段椎骨片与坐骨神经相连。 2）将标本改为背面向上（腹位）固定，用镊子提起梨状肌，剪断，用玻璃分针将坐骨神经小心勾至背部。再沿坐骨神经沟（半膜肌和股二头肌的肌间缝）分离坐骨神经。用镊子夹住与神经相连的脊椎骨，提起神经，用眼科剪将神经分支及结缔组织膜顺序剪断，将神经一直游离到腘窝处。,玻璃分针,实 验 步 骤,6. 游离腓肠肌 用镊子夹住脊椎骨，将神经搭在腓肠肌上，用剪刀将膝关节周围的大腿肌肉完全剪除，用金冠剪将膝关节上方的股骨刮干净，暴露骨股并在距膝关节上1-1.5 cm处剪断，分离腓肠肌的跟腱，用线结扎，然后自跟腱的附着点剪断，提起跟腱，将腓肠
15、肌分离至膝关节处，将小腿其余部分剪掉。,实 验 步 骤,坐骨神经腓肠肌标本,实 验 步 骤,7. 标本检验 左手用镊子轻轻提起结扎神经的线或连接神经的椎骨片，右手用经林格溶液沾湿的锌铜弓短暂轻触坐骨神经，如腓肠肌发生迅速的收缩反应，则表明机能完好。将标本置于林格溶液中，稳定其兴奋性1520 min，即可进行实验。,锌铜弓,关 键 技 术,（毁中枢）双毁髓的方法 坐骨神经的剥离技术,常用手术器械的正确使用 蟾蜍毁中枢技术 蟾蜍神经分离技术,本实验需掌握的实验技术,注意事项,在制备标本时，避免过度牵拉神经，不可用手或金属器械触碰神经干。 避免动物皮肤分泌物（蟾酥、血液等）污染神经和肌肉，也不要用水冲洗，以免影响组织机能。神经周围的结缔组织要剥离干净。 制备标本时，要随时用林格溶液润湿神经和肌肉，防止干燥。 实验要迅速，以免时间过长影响标本活性（兴奋性）。,思考与探索,制备坐骨神经腓肠肌标本前为什么要完整破坏神经中枢？ 该标本可以进行哪些实验研究？试设计实验内容。,下次实验内容 骨骼肌单收缩的分析； 骨骼肌收缩的总和与强直收缩； 神经干动作电位的观察； 神经冲动传导速度的测定； 坐骨神经不应期的测定。 请提前预习并完成预习报告 请提前下载安装并熟悉实验软件,