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1、11微生物的培养和应用,一、微生物培养基的配制,1、培养基定义： 培养基（培养液）是为人工培养微生物而制备的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。,思考：微生物细胞的元素组成是什么？,2类型,（1）按物理状态分：固体培养基、液体培养基、半固体培养基。,区别：加入琼脂的量决定培养基的形态。 熔点：96度 凝固点：40度 注意：一般细菌不能利用琼脂。,应用微生物分离、鉴定、计数和 菌种保存等方面,微生物在固体培养基表面生长,可以形成肉眼可见的菌落,用途：纯化、计数、鉴定,液体培养基：工业生产,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,半固体培养基：观察运动,无动力 有动力(弥散),例、下列叙
2、述不正确的是 A 培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质 B 液体培养基和固体培养基所含的最基本物质不相同 C 微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌,B.C.,（2）按成分分：天然培养基、合成 培养基和半合成培养基。,依据：成分是否明确 判断下列培养基按成分属于何种培养基？ 牛肉膏、蛋白胨培养基 葡萄糖铵盐培养基 马铃薯蔗糖培养基,（3）按功能分：基础培养基、选择培养基和鉴别培养基。,基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。 选择培养基：培养基加入某种物质或缺少某种营养物质而抑制不需要的微生物生长，促进需要微生物生长。 举例说明：加链霉素培养基作用 加青霉素培养基作用 无
3、氮培养基作用 鉴别培养基：区别微生物 伊红美蓝 产气杆菌菌落大、灰棕色 大肠杆菌菌落小、绿色金属光泽,抗生素，抑制细菌,按功能状态分,选择培养基 鉴别培养基 基础培养基,从众多微生物中分离所需的微生物,鉴别不同种类的微生物,加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌,伊红美篮培养基使大肠杆菌的菌落呈深紫色，可以鉴别大肠杆菌,几种选择培养基：,加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌 加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌 不加氮源的无氮培养基: 分离固氮菌 不加含碳有机物的无碳培养基: 分离自养型微生物,微生物生长需要条件 1、夏天为什么食物容易腐败？ 如何处理可以防止腐败？ 2、为什么真空包装
4、的食品不容易腐败？ 3、醋酸是否具有杀菌作用？ 以上反应了微生物生长受到哪些条件影响？,细菌3037 霉菌2528 放线菌2528 12d 34d 57d,大肠杆菌 乳酸菌 破伤风杆菌 大多数细菌为好氧型,霉菌 5.06.0 细菌6.57.5 放线菌 7.58.5,微生物的类群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌、霉菌,单细胞的动植物 如草履虫、单细胞藻类等,微生物包含了除植物界和动物界以外的所有生物,无细胞结构,真核细胞,细菌、蓝藻等,原核细胞,3.培养基营养成分：,不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮源、 无机盐等营养物质。,讨论：为什么大多数培养基 都含有这四类物质？,
5、？,（1）基本成分：,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO2、CO32-、HCO3-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH4、NO3-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,自养微生物,异养微生物,1000mL牛肉膏蛋白胨固体培养基配方,（2）特殊营养：,细菌生长必需，而往往自身不能合成的化合物，如维生素、某些氨基酸、碱基等,（3）pH、氧气等要求,碳源,可作为碳源的物质有: 含碳无机物: 含碳有机物：,蛋白质,脂肪酸,不同微生物所利用的碳源不同 异养型微生物的碳源为 自养型微生物的碳源为,碳酸盐、碳酸氢盐、二氧化碳,糖类（主要）,含碳有机物（有机碳）,含碳无机
6、物（无机碳）,氮源,可作为氮源的物质有: 含氮无机物： b.含氮有机物：,蛋白胨,牛肉膏,尿素,氮气,氨气,硝酸盐,铵盐,二、无菌操作,1、获得纯净培养物的关键： 2、无菌操作,防止外来杂菌的入侵,1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A 光合细菌 B 根瘤菌 C 硝化细菌 D 乳酸菌 2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源是 A 糖、有机酸等 B 二氧化碳、碳酸盐 C 蛋白质 D 无机氮化物,A.C,A.C,二. 无菌技术（思考）,1. 什么是无菌技术？包括哪些方面？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 3. 消毒和灭菌有何不同？
7、4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？ 5哪些地方有菌可能导致菌体感染？ 操作者 培养基、接种工具、器皿 空间,无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防 止杂菌污染的方法。,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,1、灭菌和消毒 1.）灭菌：强烈的因素杀死所有微生物，包括芽孢和孢子。 思考：哪些因素可以灭菌、消毒？ 物理高温、紫外线 化学酒精、氯气、石碳酸 2.）消毒：温和的因素杀死一部分对人体有害的微生物。 举例：煮沸 问题：一段时间后为什么会腐败？,不包括芽孢和孢子,3）. 常用的消毒方法：,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法,4）常用的灭菌方法：,灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽
8、灭菌 ：100kPa 121 15-30min,牛奶,接种室、接种箱或超净工作台,接种工具，接种环、接种针或其他金属用具,玻璃器皿（吸管、培养皿）,思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？ 操作者 培养基 接种工具 器皿 空间 牛奶,手用酒精消毒,高压蒸汽灭菌,灼烧,干热灭菌,紫外线,巴氏消毒 7075度30min 80度15min,灼烧灭菌,微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧,干热灭菌 160170 ；12h,能耐高温的需要保持干燥的物品( 玻璃器皿),高压蒸汽灭菌 100kPa 121 15-30min,通常用于培养基的灭菌,总结：无菌技术 1、实验操
9、作空间、操作者、衣着和手要 和 。 2、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进行 。 3、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在 附近进行。 4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。,清洁,灭菌,酒精灯,消毒,例：下列关于腐乳制作的描述中，错误的是 A在腐乳制作过程中必须有能产生蛋白酶的微生物参与 B含水量大于85%的豆腐利于保持湿度，适宜制作腐乳 C加盐和加酒都能抑制微生物的生长 D密封瓶口前最好将瓶口通过火焰以防杂菌污染,六、培养基的配制,（一）、细菌培养基的配制,1.计算: 100ml蒸馏水中各物质的量。,2.称量：注意牛肉膏的粘稠度大。,3.溶化： 牛肉膏
10、连同称量纸一同放入 不断搅拌 4.调节pH: 7.07.2 思考：判断该培养基的作用是什么？,5.分装： 培养基高度1/5 不要污染试管口 棉塞塞紧,6、包扎,7 .灭菌： 思考：灭菌的温度、压力、时间分别是多少？,8 .搁置斜面/倒平板,图中哪些措施是防止杂菌污染的？,培养基灭菌后，需要冷却到50度左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 刚刚不烫手。 为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 防止瓶口附近的微生物污染培养基,平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基 在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能
11、用来培养微生物吗？为什么？ 空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最好不要用该培养基培养微生物。,六、接种技术 无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程称为接种。,1、接种工具,常用的接种方法,斜面划线法,问题：上述结果反应了什么情况？ 问题：可对菌液如何处理？,稀释涂布平板法VS稀释混合平板法,菌种的保存,1、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。 2、长期保存：甘油冷冻管藏法,从哪里可以获得微生物呢？ 微生物的大本营：土壤 从众多微生物中分离某种微生物有什么方法？ 根据微生物所需营养物质、氧气、pH不同利用选择性培养基选择。 对微生物进行分离的培养基是？ 固体培
12、养基 固体培养基上不同菌的区别是什么？ 菌落 菌落作用：分类、鉴定的依据,七、微生物的分离、数量测定,菌落,细菌的菌落特征因种而异 菌苔：菌落连成片,主题：分离土壤中分解尿素的微生物,1、原理： 分离：以尿素为唯一氮源的选择性培养 基进行选择。 计数：稀释倒平板法,2、实验步骤：,问题：统计细菌和统计分解尿素所用的细菌的稀释倍数相同吗？ 细菌：4、5 、6 放线菌：3、4、5 真菌 2、3、4 问题：统计的菌落数往往比活菌实际数目偏低？,每克样品中的菌落数 =C（菌落数）* M （稀释倍数）/ V（涂布体积）,本课题知识小结:,做什么准备？ 点燃酒精灯 斜面向上,斜面用什么接种？ 接种环如何灭菌？,取棉塞（不放到桌面？） 试管口灭菌,挑取少量菌体,轻轻划“S”，不要划破培养基 试管口通过火焰，塞紧试管 放在37度培养24h,平板划线的具体操作：,A.从试管中取菌,问题：每次划线后要灼烧接种环，目的是什么？ 灭菌 问题：每次划线的起点有什么 特点？,微生物的恒温培养,思考：如何将菌液由1倍稀释成10-6？ 注意事项：使用的水有何要求？ 用移取菌液的移液管是否要灭菌？,（1）稀释,2.涂布平板法,