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1、血小板功能试验在心血管疾病 诊治的应用与质量控制,丛玉隆,解放军总医院,血 管 损 伤,九肽,vWF-1/GP,血小板粘附,血小板聚集,纤维蛋白原,纤维蛋白原单体,可溶性复合物,不溶性复合物,复合血栓,血凝块,血块收缩,暴露胶原释放ADP,发生释放反应,致密颗粒释放,ADP,5-HT,加速血小板聚集,综合在血小板膜上介导血小板对胶原的粘附,颗粒释放,血小板收缩,局部形成a血小板激活,GMP140,-TG,抑制血管产生PGI2,PF4,中和肝素,减慢a灭活,TSP,中和肝素,促进血小板聚集,纤维连接蛋白,血小板膜受体,Mg2+,Ca2+TXA2,白色血栓,激活血小板收缩蛋白,PI,磷酸肌酶,脂酶
2、C,磷脂酰1磷酸,磷脂酰2磷酸,磷脂酰3磷酸,二磷酸甘油脂,磷酸甘油脂酶，脂酶C,花生四烯酸,环氧化酶,PGH2，PGG2,17羧酸丙二醛,异构酶,TX合成酶,PGD2，PGE2，PGF2,TXG2,TXA2,粘附：血小板附着在某物体的表面 聚集：血小板相互间的粘附 变形：血小板形态变化，白色血栓形成 释放：释放血小板内容物，加强凝血 因子 、血小板、内皮细胞功能,血小板功能,3,4,解放军总医院,特殊检查,血小板释放 血小板AA代谢：TXB2；丙二醛 血小板膜蛋白：GP,GPb/a 血小板内钙流：钙波动,致密颗粒释放 颗粒释放,血小板ATP释放 5-TH测定,PF4 -TG GMp-140,
3、血小板检查,一般检查:血小板计数;MPV;血块回缩试验;网织血小板,血小板功能:血小板粘附试验;血小板聚集试验；,血小板变形,血小板血栓,血小板聚集原理,诱导剂 (ADP或AA),血小板集聚试验分析 血小板功能状态,特殊检测（仪器）,血小板聚集,“PF-100”检测 血小板粘附聚集功能,流式细胞术检测 血小板功能,流式细胞术检查血小板 活化标志物,PAC-1 血小板膜糖蛋白b/a 复合物 CD-62p 血小板-颗粒膜蛋白 （GMP-140）,冠心病,高血压,正常对照,CD62p+PMP(%),PAC-1+PMP(%),20uMADP诱导,正常对照,冠心病,高血压,服药前,服药后5d,停药后3d
4、,CD62p+PMP(%),PAC-1+PMP(%),20uMADP诱导,停药4d,停药3d,服后6d,服后5d,服后4d,服药前,利用血栓弹力图图形变化判断血小板功能变化及耐药情况,参数r,凝血状况,凝血成分,低凝,高凝,功能紊乱,4-8 min,47- 74,1-4 min,55-73 mm,血小板型高凝,酶动力型高凝,原发性纤溶亢进,继发性纤溶亢进,个体化的抗血小板治疗,A: 50% 血小板抑制不足以完全排除血栓或缺血事件的危险 B: 50% 血小板抑制可有效抗栓而没有出血风险 C: 50% 血小板抑制但是出血的危险增加,阿司匹林治疗下血小板的抑制情况,血小板检测质量控制,22,血小板变
5、形,血小板血栓,血小板聚集原理,诱导剂 (ADP或AA),血小板聚集率,血小板的浓度,药物干扰,抗凝剂种类,抗凝剂用量,PRP保存的条件,血小板聚集仪(比浊法)工作状态,聚集剂的研制与保存,PRP保存的时间,PRP的制备,血浆的PH变化,血小板聚集的质量控制,口服阿斯匹林后及停药后不同时间 血小板聚集、GMP-140、TXB2结果比较,服 药 后 4d,服开 药始 后停 4d药,服 药 前,停 药 后 10d,停 药 后 2d,停 药 后 4d,停 药 后 6d,停 药 后 8d,AA TXB2 GMP-140,枸椽酸盐抗凝剂用量对血小板聚集的影响,血液 1ml 1ml 1ml 1ml 1ml
6、 抗凝剂 0.097 0.111 0.133 0.155 0.177 二者比 1:10 1:9 1:7.5 1:6.5 1:5.6 a b c d e,机制: 抗凝剂的增加活性钙减少; 游离钙+减少,影响血小板聚集,A b,27,解放军总医院,不同Hct的抗凝血对血小板聚集率的影响,红 细 胞 压 积,抗凝剂的校正,28,解放军总医院,采血,并使血浆中枸橼酸钠的浓度低至正常水平.也可使用如下三种方法确定在收集高比积血标本时所用枸橼酸盐的体积: (1)使用公式计算用量; 抗凝剂用量= 0.00185血量(ml)(100-病人红细胞压积）；,根据Hct变化,抗凝剂用量效正图,29,红细胞比积,抗凝
7、剂的校正,2ml,5ml,10ml,标本的保存 1.标本取出后必须加塞保存，否则血浆中CO2扩散影响PRP的pH值 2.或者标本存在5%CO2和95%空气混合气体环境中,贮存 时间 (min),标本pH Air 5%95%CO2 Air,0 7.40 7.42 45 7.74 7.46 105 7.92 7.42 165 8.05 7.41 195 8.15 7.41 255 8.30 7.47,ADP,Ph Time,7.75 110,8.30 255,8.15 20,7.50 75,含“死腔”真空管内抗凝血 用于血小板功能检测或用于 肝素抗凝治疗监测存在的问题,死腔概念,真空采血管中 未被
8、血液填满的空腔,采血量5ml的采血管死腔,死腔,满管标本,方 法,20例肝素治疗心梗病人的静脉血 分别以有死腔和无死腔的真空凝血管收集 测定其APTT和PF4指标,20例患者中，8例出现二种抗凝管的APTT和PF4结果有较大差异（40%） 无死腔抗凝管APTT 68.5秒；有死腔抗凝管APTT 60.6秒 无死腔抗凝管PF4 99.4IU；有死腔抗凝管PF4 104.6IU,结 果,三例患者分别用有死腔和无死腔的真空管，其APTT时间和PF4值的变化比较,APTT PF4 无死腔 有死腔 无死腔 有死腔 患者编号4 98.2 90.8 95.0 106.5 患者编号11 52.5 46.9 97.6 103.0 患者编号14 33.5 26.5 104.3 114.0 均值 61.4 54.7 99.0 107.7,为什么产生这种现象？,安全凝血试验管APTT,硅化玻璃管壁4.5ml采血量,安全厚壁塑料管2.7ml采血量,APTT:62.2S 8例：67.3S,APTT:63.1S 8例：68.5 S,39,解放军总医院,