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1、实 验 四,一、血沉测定 二、HCT测定及贫血分类 三、Ret计数 *四、红细胞平均直径测定,一、血沉测定,概念 红细胞沉降率简称血沉（ESR），指在规定的条件下，离体抗凝全血中的红细胞自然下沉的速率。 血沉测定实际上是测量单位时间内红细胞下沉后血浆段的距离。,临床意义,血沉测定对临床诊断有一定的参考价值，但并无特异性。 1、生理性增快：年龄（新生儿偏低，50岁以上FIB ，ESR ）；性别（女大于男）；月经期、妊娠3个月以上， FIB ，ESR ,2、病理性增高： （1）动态观察病情变化（风湿热、结核病活动期或静止期 ）； （2）良性肿瘤与恶心肿瘤鉴别的参考 （良性时多正常，恶性时多增快，晚
2、期或转移明显增快）； （3）功能性病变与器质性病变的鉴别 （心绞痛多正常，心肌梗死时增快） 3、血沉减慢： 真心红细胞增多症、低纤维蛋白原血症、充血性心力衰竭、红细胞形态异常等。,影响因素,1、RBC本身的因素（大小、形态、 HB含量）:大红细胞、红细胞贫血等 2 、血浆因素：Fbg 、CHOL、TG、r- Globulin、a、- Globulin均ESR。 3、药物、病毒、代谢物等均ESR 4、标本溶血、血沉管倾斜、温度过高 5、Albumin 、卵磷脂均ESR。,实验操作过程,1、实验器材准备,2、试管中加入106mmol/l枸橼酸钠0.4ml,3、静脉抽血1.6ml加入试管中，轻轻混匀
3、；,4、用血沉管吸取抗凝血至“0”刻度，擦去 管外附着的血液，将血沉管直立于血沉架上；,5、室温静置1小时，读取血浆段的高度， 报告方式：mm /h,参考值,男 015 mm / 1h 女 020 mm / 1h,HCT（红细胞比积）又称红细胞压积 1、方法：温氏法,二、红细胞压积测定及贫血分类,2、原理：将定量的抗凝血液置于温氏管中，用一定速度和时间离心沉淀，即得红细胞和血浆的比例，从而得知每升血液中红细胞所占体积的比值（ 升/升）。 HCT主要与红细胞的数量及大小有关，常用于帮助诊断贫血并判断贫血程度，也用于红细胞各项平均值的计算。,1 根据MCV、MCH、MCHC对贫血分类 类型 MCV
4、(fl) MCH(pg) MCHC (%) 病因 大细胞性贫血 100 34 32-36 巨幼贫等 正常细胞性贫血 80-100 27-34 32-36 急性失血等 小细胞低色素性 80 26 32 缺铁贫等 贫血 单纯小细胞性 80 26 32-36 慢性感染、 贫血 中毒等,贫血的形态学分类,根据 MCV RDW的贫血形态学分类,MCV RDW 贫血类型 常见疾病,增高 正常 大细胞均一性贫血 再生障碍性贫血 增高 大细胞非均一性贫血 巨幼细胞贫血 MDS 正常 正常 正常细胞均一性贫血 急性失血性贫血 增高 正常细胞非均一性贫血 再生障碍性贫血 减低 正常 小细胞均一性贫血 珠蛋白生成障
5、碍性贫血 增高 小细胞非均一性贫血 缺铁性贫血,3、操作： （1）静脉采血2ml，注入EDTA-K2 3mg（干粉），立即混匀，即为抗凝血； （2）用细长的毛细滴管吸取混匀的抗凝血液，插入温氏管底部，然后将血液慢慢注入至刻度“10”处，注意防止气泡产生。 （3）3000转/min离心30分钟,（4）读取读数：读取红细胞段高度，以还原红细胞层表面为准，再以3000转/min离心5分钟，如读数不变，表明红细胞已压实，即可按此数值计算HCT；,5） HCT红细胞段高度的mm数0.01， 即得每升血液中红细胞体积的升数，单位以升/升表示。,三、网织红细胞计数,一、实验原理 网织红细胞胞浆内残存有嗜碱性
6、的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后RNA中负电荷基团与带正电荷的有色基团结合，凝聚成颗粒呈浅蓝或蓝黑色的点状、丝状或网状结构，可在显微镜下识别。 计数1000个红细胞中所有的网织红细胞数直接报告其百分比，或红细胞计数结果报告其绝对值。,网织红细胞（Ret）,网织红细胞是晚幼红细胞脱核后到成熟红细胞间的过渡细胞，是尚未完全成熟的红细胞，其胞浆内残存有嗜碱性的RNA物质。嗜碱性物质与染料凝聚成蓝色颗粒，颗粒与颗粒连缀成线，线连接成网，故而得名。 分型：丝球型、网型、破网型、点粒型。（、型）,网织红细胞,计数方法,1、普通光学显微镜法： 活体染色后推片镜检 2、网织细胞计数仪法： 荧光染色
7、后用流式细胞术计数,二、试剂器材,1、试剂 10g/L煌焦油蓝酒精（水）溶液 2、器材 毛细血管采血用具、小试管、载玻片、推片、显微镜、香柏油、二甲苯及擦镜纸、Miller窥盘,三、操作步骤,1. 染色： 玻片法于载玻片的一端加煌焦油蓝酒精溶液1滴，任其自然晾干后备用，取末梢血或抗凝血一滴，于已干燥的染料上，用推片角混匀后，将两玻片盖合； 试管法取染液2滴入试管，加血2滴混匀，封闭好，待15分钟以上时间； 2. 推片：取混合液1小滴于载玻片的一端，推制成薄而均匀的血膜； 3. 低倍镜浏览：选取红细胞分布均匀网织红细胞染色较好的部分（体尾交界处），滴香柏油转换至油镜，在Miller窥盘下计数小方
8、格中的RBC数和大方格中的网织红细胞数（或数出整个视野中的RBC总数和其中的网织红细胞数，换一视野同法计数至几个视野RBC总数1000为止）。,Miller窥盘,A,3,1,B,将Miller窥盘放在显微镜目镜中,通过窥盘中大小方格间的9比1比例关系计算RBC数和Ret数。,四、计算,1.Miller窥盘法：网织红细胞（Ret）百分率(%)= （大方格内Ret总数）/（小方格内RBC总数9）100% 2.直接计数法：网织红细胞（Ret）百分率(%)= 多个视野内Ret总数/多个视野内RBC总数100%,五、注意事项,1.用酒精染液时，应待玻璃片上的酒精挥发干燥后，才能加血液，染色时应用推片角不
9、停搅动，使染料和血液混合，防止凝固。 2.染色时间一定要充足，混合后不能立即推片，室温低时染色时间应适当延长，应覆以另一玻片防止蒸发。 3.染液与血液比例以1：1为宜，贫血适当加血量。 4.涂片厚薄均匀适宜，弓形移动，多个区域计数 5.试剂应定期重配，以免变质沉淀。,六、参考值,成人：0.005-0.015（0.5%-1.5%） 新生儿：0.02-0.06（2%-6%） 儿童：0.005-0.075（0.5%-7.5%） 成人绝对值（24-84） 109/L,七、临床意义,（1）评价骨髓增生能力，判断贫血类型 再障时，明显降低。绝对值低于5109/L可做为急性再障的辅助诊断指标。 失血、多数溶
10、血性贫血患者网织红细胞可明显高于正常。 营养不良性贫血在治疗前网织红细胞可保持正常、轻度升高或降低。,（2）评价疗效 网织红细胞反应：IDA或巨幼细胞贫血分别给予铁剂、维生素B12或叶酸治疗23d后，网织红细胞计数值开始上升，710d达到最高(10%左右)；两周以后逐渐降至正常水平，红细胞、血红蛋白开始升高。 骨髓移植、EPO治疗后：若骨髓开始恢复造血功能，RMI升高，网织红细胞计数值上升。,（3）放、化疗监测 机体接受放、化疗后，如出现骨髓抑制，早期HFR和MFR降低，然后才检测到网织红细胞的降低。而停止放、化疗，骨髓功能恢复后，又见上述指标依次上升。可指导临床医师适时调整治疗方案，避免造成严重的骨髓抑制。,