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1、第四节 干化学技术简介,干片技术,VITROS MicroSlide (干片)技术,介绍三种干片 定义干片 分层, 功能, 和测量技术 叙述 VITROS 干片 在操作中与常规方法相比的优势,1970 年：化学干片技术起源于1970年的伊斯特 曼-柯达公司 1971年：借鉴普通临床生化反应序列 生产出葡萄糖分析干片 1976年：干片获得专利 1978年：推出专利的干片生化技术 1980年：FDA批准五个分析产品可以进入市场 1995年：推出一些免疫产品,干片的历史,干片分类,CM/RT,PM,IR,比色/速率法干片 电极法干片 免疫-速率法干片,通过测定干片颜色变化来确定化合物浓度 终点法、双
2、波长 测定法，固定时间法、 速率法,终点法,应用终点法进行测试的项目 白蛋白干片（ALB） 血氨干片（AMON) 钙离子干片（Ca) 胆固醇干片（CHOL) 葡萄糖干片（GLU) 高密度脂蛋白胆固醇干（HDLC) 镁离子干片（Mg) 磷离子干片（PHOS) 总蛋白干片（TP) 甘油三酯干片（TRIG) 尿素氮干片（BUN/UREA) 尿酸干片（URIC),双波长 测定法,应用双波长 测定法进行测试的项目 总胆红素（TBIL) 消除可形成的光谱干扰 非结合胆红素和结合胆红素（BUBC) 摩尔吸收值相近 两不同波长处的读数可以用来确定BU和BC的浓度,固定时间法（两点法）,应用固定时间法进行测试的
3、项目 淀粉酶干片（AMYL) 脂肪酶干片（LIPA) 肌酐干片（CREA) 铁离子干片（FE) 茶碱干片（THEO),速率法（多点法）,应用速率法进行测试的项目 谷丙转氨酶干片（ALT) 碱性磷酸酶干片（ALKP) 谷草转氨酶干片（AST) 肌酸激酶干片（CK) 肌酸激酶同工酶干片（CK-MB) 谷氨酰转肽酶干片（GGT) 乳酸脱氢酶干片（LDH) 胆碱酯酶干片（CHE),指示剂层 支持层,扩散层 试剂层,比色/速率法干片,指示剂层 支持层,均匀分布标本 过滤大分子 标本预处理 提供反射测定的背景,扩散层 试剂层,扩散层,包含干性试剂 多层试剂，控制反应顺序,包含染料以产生显色复合物 驱使反应
4、完成,支持层,提供反应支持基垫 允许光路自由通过,均匀分布标本,标本进入扩散层,标本迅速向四周扩散,标本均匀向下层渗透,标本与试剂反应,反应物在指示剂层被固定,干扰物质,反光背景,指示剂层,生成纯净的反射光,光源,滤光片,接收器,透射与反射,湿化学 ： 采用透射光度法 遵循朗勃比尔定律 干化学 ： 采用反射光度法 遵循Williams Clapper定律,吸光度,浓度,反射光,浓度,透射与反射,湿化学 ： 仪器相对开放，试剂选购方便,但是质量控制是隐患 由使用者监控仪器状态和结果的可信度 频繁的日常仪器校验，繁琐且工作量大 干化学 ： 仪器相对封闭，采用固定的试剂及耗材来保证结果 长期稳定的定
5、标曲线，大大减少了日常工作量,干化学与湿化学比较,电极法干片,离子选择电极技术 直接法测定两电极间电势不同 K、Na、Cl,干片在接触点被穿透 测量电压读数 通过电压读数计算出分析物的浓度,电极法干片测量技术,盐桥,S2,S1,S3,S4,aI,ar,离子载体膜,M+ Cl,AgCl,Ag,离子载体膜,M+ Cl,AgCl,Ag,aI,ar,V,V,干片,常规,已知浓度液体(参比液),待测液体(标本),离子选择电极(ISE),盐桥,ar,VITROS干化学检测电解质与常规方法比较,常规法（间接法） 干片法（直接法） 电极与电极膜重复使用 稳定性差 独立电极 / 测试 单一采样针、进样通道 交叉
6、污染 一次性Tip头 大量蠕动泵、电磁阀 维修保养复杂 无 众多管道、多种液体 易腐蚀、老化 无管道 频繁定标与冲洗保养 耗时、不环保 定标周期长、环保 电解质排斥效应 有 没有,ISE间接法电解质排斥效应,标本10微升，非水相5，水相9.5微升 稀释100倍，加入稀释液990微升，水相999.5微升 实际稀释倍数999.59.5105.211 如果标本中含K 3.50 mmol/L; Na 140 mmol/L 间接法实测值为：3.50105.2111003.33 mmol/L 140105.211100133.0 mmol/L 直接法没有电解质排斥效应,一次性电极 没有基质效应 没有电解质
7、排斥效应 没有繁琐的日长保养,性能优势,免疫速率法干片 竞争性与非竞争性免疫速率反应模式 需要液体反应底物 地高辛、苯妥因、苯巴比妥、CRP、 卡马西平,免疫速率法干片,酶,抗体,酶标抗原,胶乳试剂,扩散层 受体层 胶乳层 聚酯支持层,胶乳试剂,免疫速率法干片,胶乳试剂,免疫速率法干片,酶标抗原 标本中抗原,抗体,免疫速率法干片 竞争法结合,结合抗原 + 游离抗原,免疫速率法干片 加入液体反应底物洗去未结合物质,免疫速率法干片 竞争法结果,高浓度 低浓度,VITROS 干化学技术在 抗干扰方面 具有突出优势,去除干扰的干片原理 I,扩散层 表面活性剂 试剂层 钙螯合剂,指示剂层 缓冲液 蜡染料衍生物 支持层,清道夫层 使用氧化酶或特异性结合物去除干扰物 以镁离子干片为例,Mg+2+ Ca +2 Mg +2 + Ca +2 螯合剂 复合物,Mg+2 + 甲蜡染料衍生物 Mg +2 染料复合物,去除干扰的干片原理 II,选择性半透膜 增强结果特异性；去除干扰物 以尿素氮干片为例,NH3 + 氨指示剂 呈色,扩散层,半透膜,指示剂层 氨指示剂,支持层,试剂层 尿素酶 缓冲液 pH7.8,H2 NCONH2 + H2O 2NH3 + CO2,多层涂膜干片技术 优异的抗干扰能力 稳定的定标曲线 所有元素尽在其中,VITROS 干化学技术特点,