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1、 工业生产常用的微生物及要求 l一、工业生产常用的微生物 l细菌（bacteria）：常用的有枯草芽 孢杆菌、醋酸杆菌、棒状杆菌、短杆 菌等。 l酵母菌（yeast）：属单细胞真核生 物，主要分布于含糖较多的酸性环境 中。常用的有：啤酒酵母、假丝酵母 、类酵母等。 啤酒酵母 霉菌 棒状杆菌 短杆菌 棒状杆菌 yeasts l霉菌（mould）：喜偏酸性环境。可 用于生产多种酶制剂、抗生素、有机 酸及甾体激素等。 l放线菌（actionmycetes）：原核微 生物类群。在含有机质丰富的微碱性 土壤中分布较为广泛。主要用于生产 多种抗生素 放线菌 l担子菌（basidiomycetes）：主要
2、用于多糖、橡胶物质和抗癌药物的开 发。 l藻类（alga）：许多国家已把它作为 人类保健食品和饲料。还可通过藻类 将CO2转变为石油；国外还有从“藻 类农场”获得氢能的报道。 硅藻 担子菌 二、微生物工业对菌种的要求： 原料廉价、生长迅速、目的产物产量 高。 易于控制、酶活性高、发酵周期较短 。 抗杂菌和噬菌体能力强 菌种遗传性能稳定，不易变异和退化 ，不产生任何有害的生物活性物质和 毒素 G微生物菌种的衰退 A菌种的复壮 B菌种的保藏 工业微生物菌种的 衰退、复壮与保藏 l一、菌种的衰退： 微生物个体特征 微生物群体特征 各方面 发生变化 营养物质代谢 和生长繁殖能 力下降 发酵周 期延长
3、抗不良 环境的 性能减 弱 目的产物 的产量下 降 l菌种衰退的原因 l菌种性能的改变 l防止菌种衰退的措施 菌种衰退的原因 菌种保藏不当 提供不了当的条件或不利的条件 经诱变得到的新菌株发生回复突变 l菌种保藏的基本原理是将微生物菌种 保存在不利于微生物活跃生长和代谢的 不良环境中，如低温、干燥、缺氧、黑 暗营养饥饿等条件，使微生物代谢速率 极为缓慢或处于休眠状态。尽可能保持 其活力和使其不发生变异。 l高质量保藏，即要求保藏的菌种不死 亡、活性不衰退、特性不变异、分类不 紊乱； l随时可提供保持有原始特性的菌种用于 l交换和使用。 菌种连续传代是造成菌种衰退的直接 原因。 菌株经连续传代后
4、，含突变基因的个 体在数量上逐渐占优势，退化现象逐渐 显露。 回复突变：指变异菌株因遗传组成的自 身修复，使原有的遗传障碍解除，代谢 途径发生变化，从而恢复原有的特性， 表现出原育种过程中已获得的优良性状 退化的现象 l菌种遗传特性的改变 l菌种生理状态的改变 l菌种遗传特性的改变的原因 异核现象导致微生物群体发生变异 自发突变导致菌种遗传特性的改变 突变所产生的变种或杂交重组所形成 的杂种的不稳定性，易发生回复突变 或产生分离子 菌种生理状态的改变 菌种是由一些变异株混合组成 菌种培养基影响菌种的生理状态 在某些培养条件下，菌体的某些 基因处于活化状态或阻遏状态， 而使菌种的生理状态改变 l
5、菌种培养基营养过于丰富不利于孢子形成 ，影响发酵；菌种培养基营养贫乏，菌种 在营养贫乏的培养基中多次传代会使菌体 细胞内缺乏某些生长因子而衰退甚至死亡 l因此培养基应选择具有传代后生产能力不 发生明显下降、菌落不易衰老和自溶的正 常形态菌落，孢子丰富的培养基。 l菌种的复壮 l提供良好的环境条件 l定期纯化菌种 l防止自身突变 生产产菌种的改良 G杂交育种 A原生质体融合 BDNA重组技术 l指两个不同基因型的菌株通过接合或 原生质体融合使遗传物质重新组合， 再从中分离筛选具有新性状的菌株 细胞壁 细胞壁 溶解酶 细胞膜 营养细胞原生质体 原生质体融合 融合细胞 原生质体形成原生质体融合细胞壁
6、 再生 原生质体融合的基本过程 影响原生质体融合的主要因素 l菌体的前处理 l菌体的培养时间 l融合剂的浓度 l融合剂作用的时间 l阳离子浓度 l融合的温度及体系的pH值等 影响原生质体再生的主要因素 l菌体自身的再生性能 l原生质体制备的条件 l再生培养基成分 l再生培养条件等 lDNA重组技术：就是把外源DNA分 子结合到任何病毒、质粒、或其它载 体系统中，组成新的遗传物质，并转 入宿主细胞内进行繁殖的过程。 l可以从复杂的DNA分子中分离出单独 的DNA片段。 l可以大量生产高纯度的基因片段及其 产物。 l可以在大肠杆菌中研究来自其它生物 的基因。 l在高等动植物中也可以发展和建立这 种
7、基因操作系统。 DNA重组过程 目标DNA片段的获得 与载体DNA分子的连接 重组DNA分子引入宿主细胞 筛选含有所需重组DNA分子的宿主细胞 对外源基因的表达及稳定性的鉴定 l基因的分离 l去垢剂溶解细胞，酚和蛋白酶去除蛋 白质，核糖核酸酶去除RNA，乙醇沉 淀等步骤。特异目的基因的分离主要 采用：物理分离法、互补DNA分离法 和“鸟枪法”等。 lDNA分子的切割与连接 l用限制性核酸内切酶（类，识别顺 序通常为46个核苷酸）进行切割； l限制酶产生的黏性末端、末端转移酶 合成的同聚物接尾以及合成的人工接 头等，利用DNA连接酶来实现DNA 分子的连接 载体 l能在大肠杆菌中自主复制 l对某些限制酶来说只有一个切口，并 在酶作用后不影响其自主繁殖能力。 l从细菌核酸中易于分离和纯化。 l在宿主中能以多拷贝形式存在，有利 于插入的外源基因表达，能在宿主中 稳定地遗传 质粒：重组DNA以转化的方式进入宿 主细胞 噬菌体：重组DNA以转染的方式进入 宿主细胞 柯斯质粒：以转导的方式进入宿主细胞 引入宿主细胞