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1、第二章 细胞培养,体外培养（In Vitro） 细胞培养（Cell Culture ） 组织培养（Tissue Culture） 器官培养（Organ Culture ）,细胞培养与组织培养,定义:从动物体内取出组织或细胞，模拟机体 内生理条件，在体外建立无菌、适温和 一定营养条件等，使之生长和生存，并 维持其结构和功能的技术。,优点：离体条件下观察细胞生命活动规律， 不受体内环境影响可人为改变条件， 进一步观察生理功能的改变。,2.1细胞培养的设施和基本条件,2.1.1实验室设计 原则 防止微生物污染和有害因素影响 要求 工作环境清洁、空气清新、干燥 和无烟尘,清洗和灭菌室,无菌操作室(更衣
2、间、缓冲间、操作间）,培养与观察室,制备室（液体制备）,储藏室（冰箱、液氮罐、储物柜等）,2.1.2常用仪器与设备,超净工作台 CO2培养箱 倒置显微镜 正置显微镜 解剖镜 过滤除菌装置 超声波清洗器 水纯化系统 pH计 天平 灭菌锅,干燥箱 冰箱 细胞计数板 离心机 移液器 显微操作仪 细胞融合仪 超声波细胞破碎仪 酶标仪 荧光素酶检测仪 细胞冷冻存储器,超净工作台,细 胞 培 养 箱,倒置显微镜,正置显微镜,解 剖 镜,滤 器,滤 膜,超声波清洗器,水 纯 化 系 统,pH 计,电 子 天 平,灭 菌 锅,电 热 干 燥 箱,超 低 温 冰 箱,细 胞 计 数 板,移液器,显 微 操 作
3、仪,电穿孔仪,酶 标 仪,荧 光 素 酶 检 测 仪,超声波细胞破碎仪,液 氮 罐,程 序 降 温 盒,细胞培养用器皿,培养皿 培养瓶 培养板 冻存管,培养皿,培养瓶,培养板,冻存管,2.1.3清洗、包装与消毒,清洗目的清除杂质和微生物，使器皿 内不残留任何影响细胞生长 的成分。,玻璃制品 橡胶制品 塑料制品 G6除菌滤器 不锈钢除菌滤器,玻璃器皿的清洗,浸泡：,清水浸泡或刷洗,5%盐酸（过夜）,刷洗：,洗洁剂刷洗,流水冲洗1520遍,烘干,泡酸：,清洁液浸泡（24小时）,冲洗：,流水冲洗1520遍,双蒸水冲洗5遍,纯水冲洗一遍,橡胶制品的清洗,新购置的橡胶制品,2%NaOH,（煮沸15分钟）
4、,流水冲洗,1%HCl,流水冲洗,蒸馏水煮沸20分钟,晾干,（煮沸30分钟）,塑料制品的清洗,用后流水冲洗,纱布或棉签+洗洁剂刷洗,2%NaOH浸泡过夜,流水冲洗,5%HCl浸泡30min,流水冲洗,蒸馏水冲洗,包装,牛皮纸,皱纹纸,锡箔纸,棉布, 铝饭盒,不锈钢消毒筒等,消毒,物理灭菌法,紫外线消毒 电离辐射消毒 湿热消毒 干热消毒 过滤除菌,化学消毒法75%酒精，1新洁尔灭， 甲醛，环氧乙烷，戊二醛等,紫外线消毒,适用范围：空气、操作台面、其他方法不能进行消毒 的培养器皿,优点：直接照射，方便，效果好,作用机制：直接破坏微生物的核酸和蛋白质 间接照射产生臭氧杀死微生物,要求：室内清洁无尘，h灯-地面2.5m，消毒物品勿 相互遮挡,电离辐射消毒,适用范围：消毒量大，不适于做高压或滤过等培养用品,优点：灭菌时物品不升温， 可直接对密封包装的物品进行灭菌,注意：电离辐射诱变能力强，不适合消毒活的生物材料,方式：2.5百万拉德60Co产生的射线照射4872hr 大于5百万电子伏特的高能电子束照射,湿热消毒,适用范围：广泛,优点：效果最好,方式：常规101.3kPa(121.3) 20min.,干热消毒,适用范围：主要为玻璃器皿,优点：消毒后的器皿干燥、易于存储,缺点：热传导慢,方式：1.加热到160 以上，保持90120min 2.灼烧,