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1、,B细胞发育 (B lymphocyte development),依赖于骨髓或法氏囊发育的淋巴细胞，负责体液免疫和抗原递呈功能，参与抗细胞外感染微生物、速发型变态反应、溶细胞型变态反应、免疫复合物型变态反应。,B细胞的分化发育 B细胞亚群 B细胞膜表面分子 B细胞检测方法,B细胞的发育过程,抗原非依赖阶段：在胚肝或骨髓,淋巴干细胞,原B细胞,前B细胞,未成熟细胞,成熟B细胞,抗原依赖阶段：外周淋巴器官,成熟B细胞,sIgM+,sIgD+,活化B细胞,sIgM+,sIgD+,抗原,记忆B细胞,sIgG+,sIgA+,浆细胞,胞浆Ig,抗原非依赖阶段,B细胞在骨髓微环境中的发育也同样经历阳性选择
2、和阴性选择，通过这两次选择大约75%的B细胞经历凋亡过程。只有少量经历功能性免疫球蛋白基因重排的B细胞进入外周淋巴器官。,祖B细胞（pro B）,早祖B细胞阶段：首先发生Ig重链DHJH的重排 晚祖B细胞阶段：开始编码无V片段基因产物的链。轻链 仍处于胚系（germ line)状态.，但出现替代轻链。,DH JH C,重链,轻链（胚系）,VH,VL,JH C,5基因,编码DH JH C,Vpro-B基因,编码 5蛋白 编码Vpro-B蛋白,替代BCR,前B细胞（pre-B）,早期前细胞,DH JH C,重链,VH,编码完整链,轻链（胚系）,VL,JH C,5基因 Vpro-B基因,编码 5蛋白
3、 编码Vpro-B蛋白,前受体,晚期前B细胞,DH JH C,重链,VH,编码完整链,轻链（重排）,VL,JH C,5基因,编码 5蛋白 编码Vpro-B蛋白,前受体,前受体对B细胞分化早期起着十分重要作用，它介导的信号可导致： A、 细胞大量增殖；B、 RAG-1/RAG-2的表达短暂下调；C 、上述重排终止。 此阶段若重链与轻链的基因重排发生错位时，这些细胞将发生凋亡。,DH JH C,重链,VH,编码完整链,轻链,VL,JH C,BCR,编码完整轻链,不成熟B细胞,这个阶段的B细胞表面最早表达sIgM分子。此时若受到抗原的刺激，易致膜受体交联而产生负信号，使B细胞不能进一步分化成熟。这可
4、能是自身反应性B细胞克隆发生流产，形成B细胞耐受性的机制之一。,成熟B细胞,DH JH C,重链出现类别转换,VH,编码完整/链,轻链,VL,JH C,sIgM/sIgD,编码完整轻链,调控Ig基因重排及转录的一些胞内蛋白,参与调控Ig基因重排的胞内蛋白也与B细胞分化阶段相 一致的顺序改变。包括： A、重组活化基因1/2 （recombination activation gene 1 and 2,RAG1/2） B、末端脱氧核苷酸转移酶 （terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT） C、E2A及Id基因 D、转录因子B细胞特异性活化蛋白（BSAP）
5、E、Oct-2及NF-B等,A、重组活化基因1/2 （recombination activation gene 1 and 2, RAG1/2）,L V1 V2 V3 V4 V5 Vn J1 J2 J3 J4 J5 J6,C区,RAG1/2,RAG1/2,C区,连接酶,L V1 V2,J4 J5 J6,L V1 V2,J4 J5 J6,B、末端脱氧核苷酸转移酶 （terminal deoxynucleotidyl transferase,TdT）,TdT,Dt/A/C/GTP,Dt/A/C/GTP,AGCTAG,CTAG,连接酶,AGCTAG,CTAG,随机核苷酸加减,C、 E2A及Id基因
6、,E2A 是编码bHLH家族转录因子蛋白，可识别多种B细胞样特异基因中E-box，参与Ig基因重排。Id基因编码产物可与E2A 形成异源二聚体，抑制E2A的活性。,D、转录因子B细胞特异性活化蛋白（BSAP）,由Pax5基因编码，参与CD19的转录调控。,VH DH JH,启动子,增强子,调控序列,内含子,C区,Oct-2 （在B细胞特异表达）,E、Oct-2及NF-B等,NF-B参与轻链的转录,骨髓中B细胞分化发育的微环境,A、主要是基质细胞（stroma cell)，包括巨噬细胞、血管内皮细胞、纤维母细胞等。 作用方式：基质细胞直接作用；其分泌的细胞因子及细胞外基质。 功 能：调节造血干细
7、胞的定向、增殖、分化和成熟造血细胞的迁出。,B、细胞因子 IL-11和SCF是造血干细胞向未定向祖B细胞分化所必需的细胞因子。 IL-7是祖B细胞（pro B)和前B细胞（pre B)的生长因子。 Kee发现，IL-11+IL-7+SCF三种细胞因子在无基质细胞的条件下，即可诱导干细胞分化为浆细胞。,二、B细胞在外周淋巴器官中的分化发育过程,B 细胞在骨髓成熟后，迁移至各个外周淋巴器官，构成外周B细胞库。这些大多是未接触过抗原的“处女”细胞。当接受抗原后可发生活化、增殖，大部分分化为浆细胞，小部分停止分化为记忆性B细胞。 接受抗原刺激后的活化B细胞，大量增殖，并经历体细胞突变、亲和力成熟和Ig
8、同型转换等过程。,1、B细胞对不同抗原的抗体应答,A、B细胞对TI- Ag的应答在外周淋巴细胞的胸腺依赖区， 产生IgM。,副皮质区,Ag,B细胞活化,IgM,IL-5,B、B细胞对TD-Ag的应答,初次应答：在胸腺依赖区,Ag,B细胞活化、增殖、分化,浆细胞 IgM （亲和力低；量少）,再次应答：在胸腺非依赖区,少部分进入初级淋巴滤泡，并大量增殖。,体细胞突变、 抗原受体编辑、 亲和力成熟、 Ig同型转换、,记忆性B细胞 寿命较长浆细胞,离开生发中心 进入再循环,Ag,IgG为主（亲和力高；量多）,生发中心,B细胞活化和生发中心的形成,分三个阶段 1、中央母细胞阶段 2、中央细胞阶段 3、记
9、忆性/效应 性 B细胞阶段,活化B细胞,浆细胞,迁移,克隆增殖,增殖,中央细胞，形成基底亮区（抗原选择）,大部分凋亡,次级母细胞，形成顶亮区（发生类别转换）,高亲和力,FDCs/Th,中央母细胞，形成暗区（体细胞高突变及抗原受体编辑）,初级淋巴滤泡，转化为B淋巴母细胞,记忆性B细胞/长命浆细胞，进入外周血,初次应答（胸腺依赖区）,体细胞超突变,即重排后的V/D和V/D/J外显子发生高频率的点突变，常伴有亲和力成熟。 特点： 1、只有在次级淋巴结；抗原刺激下；有T细胞辅助 2、突变频率很高 3、只发生在V区及其5和3的旁侧区，不发生在C区 4、主要为点突变 5、与类别转化无关,抗原受体编辑（re
10、ceptor editing）：二次重排，消除自身应答性B细胞,抗原选择,基底亮区的中央细胞，由FDCs上的抗原对其选择。 高亲和力：凋亡 低亲和力：被选择 免于凋亡的细胞需要两种信号： 第一信号：B细胞,FDCs-Ag,合成抗凋亡分子（BCL-2）,第二信号：CD40-CD40L,关于生发中心的DC及T细胞,、： 来源：不明 表面标志：IgFc、C3受体 功能：表面的IgFc、C3受体与Ag-Ab复合物结合，可长期潴留Ag，对维持免疫记忆及血中抗体的浓度有重要作用。 、细胞： 占生发中心的，是抗原特异性的，通过直接接触和分泌细胞因子作用与细胞，并发生类别转换。,Ig类别转换（class sw
11、itch）： 抗原激活B细胞后，膜上及分泌的Ig类别会由IgM转成IgG、A、E其它类别，但V区不变； 影响因素： 抗原性质：可溶性蛋白：IgG 多糖类抗原：IgM 蠕虫：IgE CD40-CD40L：激活NFB，诱导类别转换 抗原免疫途径：口服：IgA；皮内、皮下：IgG 细胞因子调控 记忆B细胞的产生： 经上述改变的B细胞停止向浆细胞分化，长寿，低剂量抗原可激活。,C基因5端内含子中，除C基因外，都有一段重复性DNA序列称为转换区（switch region,S region)，重组时，其间C基因被环出,记忆性细胞,表达高亲和力的，寿命长，是参与g的再次应答细胞，与静止细胞有明显的差别。
12、Bm与r的不同点,特点 Bm r,抗原激活 易 不易 耐受 不易 易 寿命 较长 较短 分布 再循环 胸腺非依赖区 表型 IgMhi IgDlo伴IgG/IgA IgMlo IgDhi CD21lo CD44hi CD23- CD21hi CD44loCD23+,细胞亚群,将外周静止细胞分为两群细胞，分别称为和细胞，其中细胞为上述讲的常规细胞。而细胞在个体发生、表型、分布及功能都与有明显的不同。 、个体发育： 胚胎干细胞,分化为细胞，定位于大网膜、胸腔及肠黏膜固有层,具有自我增殖的能力。,胚肝,分化为细胞，在骨髓发育，分布外周淋巴器官。,、细胞的表型 根据细胞表面有无分子，细胞可分为a和b.,
13、a、b和细胞亚群的表型,表面标记 a b B2,IgM + + + IgD +/- +/- + CD5 + - - CD11 + + - CD23 - - + CD44 + + - MHC + + +,3、的分布,胚胎期：大网膜和肝脏 新生期：脾脏、腹腔 成年：腹腔及胸腔 另外，细胞主要在胚胎期及新生期内出现，随后为逐渐增多的细胞代替。胚胎的脾脏绝大多数为 细胞，成年后仅有,、细胞的功能,功能还不完全清楚 ，一般认为有三方面。 、产生抗细菌抗体 、产生多反应性自身抗体 、产生致病性自身抗体 参与非特异免疫,抗感染免疫 清除变性的自身抗原 介导自身免疫性损伤,5、细胞抗体应答的特点 、可通过表面
14、抗原受体直接与多糖抗原交联结合而 被激活，等细胞因子可作为活化第二信号。 、小时之内即可产生以IgM为主的低亲和性抗体。 、在增殖分化过程中不发生类别转换。 、不产生免疫记忆。,B-1细胞与B-2细胞的异同,性质 B-1 B-2,初次产生时间 胎儿 出生后 更新方式 自我更新 骨髓产生 自发性产生 高 低 特异性 多反应 单特异性 Ig同种性 IgM为主 IgG为主 体细胞高频突变 低 高 对碳水化合物抗原应答 是 可能 对蛋白质抗原的应答 可能 是,细胞的表面标志,B 细胞重要膜分子,1）B细胞抗原识别受体（BCR) 即SmIg(surface membrane immunoglobulin
15、) B细胞特异标志 Ig, Ig (CD79a, CD79b) 相当于CD3 BCR复合物，胞浆区尾部含有。 BCR识别抗原特点: 游离抗原,空间构像表位，无MHC限制性,2) B细胞活化辅助受体： 由CD19/CD21/CD81/Leu13五种成分组成，促进B细胞活化。 CD19是B细胞共同抗原CD21即CR2，也是EB病毒受体 3) CD80、86 (B7-1、2): 协同刺激T细胞活化 4) CD40: 促B细胞生长和记忆细胞产生,5) 补体受体、IgFc受体和细胞因子受体 促进B细胞活化、增殖与分化,B细胞及其活性检测,免疫荧光（Immunofluorescence）： 利用荧光标记的
16、抗Ig抗体，CD19或CD20抗体 流式细胞仪（Flow cytometry） 空斑形成细胞（Plaque-forming cell,PFC）实验 Ig水平检测,思考题,1、 B细胞在中枢免疫器官的分化发育过程 2、 B细胞在外周免疫器官的分化发育过程 3、细胞抗体应答的特点,参考文献,1、B CELL DEVELOPMENT PATHWAYS Annu. Rev. Immunol. 2001. 19:595621 2、Selection events operating at various stages in B cell development Current Opinion in Immunology 2001, 13:202207 3、Regulation of B cell fates by BCR signaling components Current Opinion in Immunology 2002, 14:341347,