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1、实验内容,一、细菌染色标本观察 （操作） （革兰染色法）,【菌种】齿垢 【试剂】生理盐水、革兰染液 【其他材料】酒精灯、接种环、玻片、牙签、吸水纸、 显微镜等 【方法】1、细菌涂片标本的制片 2、革兰染液染色 3、油镜下观察结果,一、革兰染色法,由丹麦医生Hans Christian Gram于1884年创立。,器具：接种环（上）和接种针（下）,细菌涂片的制备,操作原则：无菌操作（烧灼灭菌）,Aseptic area 10-20cm,外焰,焰芯,内焰,菌液采取法,细菌涂片的制备,细菌涂片的制备,一般制备涂片包括涂片、干燥、固定三步。 涂片 干燥 固定,【操作步骤】,固定的目的：,使细菌的细胞凝
2、固，使菌体与玻片粘得更牢固； 可改变菌体对染料的通透性； 加热固定可杀死细菌，比较安全。,结晶紫 1 碘液 1 95% 乙醇 30” 复红 1 冲洗 滤纸干燥 油镜观察,冲洗,冲洗,冲洗,二、革兰染液染色,初染,媒染,脱色,复染,【操作步骤】,紫色（G）,革兰氏染色步骤示意图,革兰氏染色,甲菌,乙 菌,初染,结晶紫,媒染,碘液,脱色,乙醇,复染,稀释复红,紫色（G）,红色（G-）,革兰氏染色步骤示意图,【结果】,细菌被染成紫色者，称为革兰阳性菌； 而细菌染成红色者，称为革兰阴性菌；,阳性菌紫色 阴性菌红色,【革兰氏染色法的原理 】,1、细胞壁通透性学说 2、等电点学说 3、化学学说,通透性学说
3、,G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易进入。 G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄，含大量脂质，乙醇易渗入。,等电点学说,G+菌等电点（pI23） G-菌等电点（pI45） 在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。,化学学说,G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色 G-菌 菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色,注 意 事 项,涂片的厚度。 固定的程度。 染色的时间控制：一一半一。 冲洗的方法，不要对着涂片区。 95% 乙醇脱色时间。,实验报告（作业）,简要写出革兰氏染色原理、操作步骤 绘制革兰染色镜下细菌图,